菌落PCR分析克隆的重组体实验
试剂、试剂盒 溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 缓冲液 热稳定 DNA 聚合酶引物仪器、耗材 无菌枪头琼脂糖凝胶电泳设备和试剂实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂（Stratagene)Tween20，10% 溶液2. 酶和酶缓冲液dNTP 溶液（包含所有的 4 种 dNTP，每种都是 25 mmol/L)PCR 缓冲液，10X, 用户买热稳定聚合酶时公司一并提供，或者 PCR 优化缓冲液，比如，Opti-Prime PCR 优化试剂盒（Stratagene)，以及 PCR Optimizer(Invitrogen)热稳定 DNA 聚合酶（5~10U)，比如，Taq DNA 聚合酶，克隆化的 Pfu DNA 聚合酶(Stratagene)3. 核酸和寡核苷酸可选择：插入物特异的引物（在双向克隆中用来确定插入物的方向）一套筛选重组体的引物4......阅读全文
菌落－PCR－分析克隆的重组体实验
菌落 PCR 分析克隆的重组体实验试剂、试剂盒溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 缓冲液热稳定 DNA 聚合酶引物仪器、耗材无菌枪头琼脂糖凝胶电泳设备和试剂实验步骤一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂（Stratagen
菌落－PCR－分析克隆的重组体实验
试剂、试剂盒 溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂Tween2010% 溶液dNTP 溶液PCR 缓冲液 热稳定 DNA 聚合酶引物仪器、耗材 无菌枪头琼脂糖凝胶电泳设备和试剂实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂溴化乙锭Taq 延伸 PCR 添加剂（Stratagene)Tween20，10%
菌落－PCR－分析克隆的重组体实验
实验方法原理 菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。使用载体上的通用引物，进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用
菌落PCR，快速鉴定重组质粒
质粒快速鉴定 试剂： Protoplasting buffer: 30mM Tris-HCl, pH8.0 0.33ml/1.0M 5mM EDTA 0.1ml/0.5M
菌落PCR实验
菌落PCR标签： 菌落 PCR菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。建议使用载体上的通用引物。通常利用此方法进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用引物之间的插入片断大小。
菌落PCR
菌落PCR可用于：（1）重组体的筛选；（2）重组体DNA测序分析。实验方法原理直接挑取菌落进行PCR，PCR的95℃加热可以破胞，释放基因组DNA或质粒，成为PCR体系的模板，然后进行链式扩增。实验材料菌落样品试剂、试剂盒dNTPPCR混合液仪器、耗材PCR仪实验步骤1. PCR混合液的制备（1）
重组克隆的概念
中文名称重组克隆英文名称recombinant clone定 义含有重组核酸分子或其片段的分子克隆或细胞克隆。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
利用PCR分析酵母菌落
实验方法原理 用 PCR 分析酵母菌落时，无需纯化 DNA。本方案以单个酵母菌落的粗裂解液作为 PCR 扩增的模板，来确定 YAC 中是否携带目的 DNA 序列。实验材料 Taq DNA 聚合酶寡核苷酸引物DNA 标准参照物YAC 重组子的酵母菌株试剂、试剂盒 PCR 缓冲液dNTP 溶液仪器、耗材
利用PCR分析酵母菌落
利用PCR分析酵母菌落 实验方法原理 用 PCR 分析酵母菌落时，无需纯化 DNA。本方案以单个酵母菌落的粗裂解液作为 PCR 扩增的模板，来确定酵母中是否携
利用PCR分析酵母菌落
利用PCR分析酵母菌落主要用于确定酵母中是否携带目的DNA序列。实验方法原理用 PCR 分析酵母菌落时，无需纯化 DNA。本方案以单个酵母菌落的粗裂解液作为 PCR 扩增的模板，来确定酵母中是否携带目的 DNA 序列。 实验材料Taq DNA 聚合酶寡核苷酸引物DNA 标准参照物YAC 重组子的酵母
菌落PCR
实验方法原理 直接挑取菌落进行PCR，PCR的95℃加热可以破胞，释放基因组DNA或质粒，成为PCR体系的模板，然后进行链式扩增。实验材料 基因样品试剂、试剂盒 dNTPPCR混合液仪器、耗材 PCR仪实验步骤 1. PCR混合液的制备（1）Taq buffer（10×） 180 ul（2）dNT
菌落PCR
实验方法原理 直接挑取菌落进行PCR，PCR的95℃加热可以破胞，释放基因组DNA或质粒，成为PCR体系的模板，然后进行链式扩增。 实验材料 菌落样品
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册
edited by Bruce A. Roe Judy S. Crabtreeand Akbar S. KhanDepartment of Chemistry and Biochemistry The Uni
重组M13噬菌体克隆分析
在本方案中，当外源 DNA 大于 200~300 个核苷酸时，用重组 M13 噬菌体克隆感染细菌后释放至周围培养基中的单链 DNA 进行凝胶电泳分析即可鉴定。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理在本方案中，当外源 DNA 大于 200~300 个核苷酸时，用重组 M13 噬菌
重组M13噬菌体克隆分析
实验方法原理 在本方案中，当外源 DNA 大于 200~300 个核苷酸时，用重组 M13 噬菌体克隆感染细菌后释放至周围培养基中的单链 DNA 进行凝胶电泳分析即可鉴定。 实验材料
重组M13噬菌体克隆分析
实验方法原理 在本方案中，当外源 DNA 大于 200~300 个核苷酸时，用重组 M13 噬菌体克隆感染细菌后释放至周围培养基中的单链 DNA 进行凝胶电泳分析即可鉴定。实验材料 重组 M13 噬菌体单链 DNAM13 噬菌体重组噬菌斑M13 噬菌体非重组载体噬菌斑大肠杆菌 F' 菌株试剂
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册5
C. Random fragment end-repair, size selection, and phosphorylationSince both sonicated and nebulized DNA fragments usually contain single-stranded end
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册7
III. Methods for DNA isolationA. Large scale double-stranded DNA isolationThe method used for the isolation of large scale cosmid and plasmid DNA is a
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册6
Electroporation ProtocolPreparation of Electro-competent Cells:1. Grow XL1-Blue cells on a tetracycline plate (20 ug tet/ml of LB agar)2. Inoculate 3
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册3
G. Bacterial cell maintenanceFour strains of E. coli are used in these studies: JM101 for M13 infection and isolation (4), XL1BMRF' (Stratagene) f
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册4
H. Fragment purification on Sephacryl S-500 spin columnsDNA fragments larger than a few hundred base pairs can be separated from smaller fragments by
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册2
C. Restriction digestionRestriction enzyme digestions are performed by incubating double-stranded DNA molecules with an appropriate amount of restrict
重组DNA的分离、克隆与测序实验手册8
B. Midiprep double-stranded DNA isolationA midi-prep double-stranded DNA isolation has been developed to generate a sufficient amount of template DNA
阳性重组克隆的构建和筛选
实验概要构建并筛选含有目的基因的候选阳性重组克隆。有助于理解目的基因与克隆载体的连接、转化和筛选原理及流程。实验原理1. 连接反应：利用经过限制性内切酶消化的线形载体与目的基因两端暴露出的平末端或相同的粘性末端，使用T4 DNA 聚合酶将二者连接起来形成重组载体。2. 转化过程：感受态细胞通过温度敏
PCR克隆常见问题分析
1、克隆PCR产物的最优条件是什么？ 最佳插入片段：载体比需实验确定。1:1（插入片段:载体）常为最佳比，摩尔数比1:8或8:1也行。应测定比值范围。连接用5ul 2X连接液, 50ng质粒DNA,1Weiss单位的T4连接酶，插入片段共10ul。室温保温1小时，或4℃过夜。在
菌落PCR（Colony－PCR）方法
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。建议使用载体上的通用引物。通常利用此方法进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用引物之间的插入片断大小。具体方法：1、PCR混合物的制备T
菌落pcr步骤
一、引言常规的PCR扩增需要进行细菌培养、质粒制备等多步操作后才能进行基因扩增,操作繁琐耗时较长,同时在反复的操作中DNA量损失也较大,产率较低。在1989年 Gussow Clackson3建立了菌落PCR( colony PCR)法,菌落PR与我们通常的普通DNA的PCR的不同在于,直接以单个菌
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定3
当多克隆位点有外源DNA片段插入时，破坏此酶的N端阅读框架，产生无α互补功能的N端片段，因此在带有外源DNA片段的细菌在含有IPTG/X-gal的培养基上呈白色，见图7-11 。如果外源DNA插入片段相当短，不破坏β-半乳糖苷酶的氨基端氨基酸序列的阅读框，有时产生的重组体菌落不呈白色而是呈浅蓝色。4
基于－PCR－的差减－cDNA－克隆实验
实验方法原理 实验材料 A 和 B 类细胞的双链 cDNA （ds cDNA） 试剂、试剂盒
基于－PCR－的差减－cDNA－克隆实验
实验方法原理 实验材料 A 和 B 类细胞的双链 cDNA （ds cDNA）试剂、试剂盒 ALuIRsaIATPT4 多聚核苷酸激酶及其缓冲液DNA连接酶和及其缓冲液Taq DNA聚合酶及其缓冲液寡核苷酸引物4dNTP 混合物驱动 dNTP 混合物转化感受态菌株HEPES缓冲液链霉亲和素溶