非程序DNA合成检测实验
实验方法原理非程序DNA合成（Unscheduled DNA Synthesis：UDS）即S期外的DNA合成。在一般情况下细胞内DNA合成只见于S期，但当处于非S期细胞DNA受损伤时，随着DNA损伤的修复也将发生DNA合成现象，即UDS。在化学致突变物、致癌物作用诱发细胞DNA损伤时，也诱导DNA出现UDS现象。因此，UDS是检测环境致突变物、致癌物的短期测试方法之一。如被检物具有致突或致癌性，当把同位素标记的DNA前体物加入培养环境中，受损DNA仍能在DNA 合成期外，以半保留复制的方式把DNA前体掺入到DNA链中，遂可应用同位素技术检测出来。实验材料细胞试剂、试剂盒EMEM羟基脲胰蛋白酶MNNG实验步骤以人二倍体成纤维细胞W1 38 为例一、实验组合 为证实被检物作用的确切性，应做如下实验组合安排二、放射自显影法UDS 的测定 1. 细胞培养WI-38 成纤维细胞，完全培养液支持物盖片培养法......阅读全文
非程序DNA合成检测实验
实验方法原理 非程序DNA合成（Unscheduled DNA Synthesis：UDS）即S期外的DNA合成。在一般情况下细胞内DNA合成只见于S期，但当处于非S期细胞DNA受损伤时，随着DNA损伤的修复也将发生DNA合成现象，即UDS。在化学致突变物、致癌物作用诱发细胞DNA损伤时，也诱导DN
非程序DNA合成检测实验
实验方法原理非程序DNA合成（Unscheduled DNA Synthesis：UDS）即S期外的DNA合成。在一般情况下细胞内DNA合成只见于S期，但当处于非S期细胞DNA受损伤时，随着DNA损伤的修复也将发生DNA合成现象，即UDS。在化学致突变物、致癌物作用诱发细胞DNA损伤时，也诱导DNA
程序外DNA合成试验
基本方法是测定S期以外3H-胸苷掺入胞核的量，这一掺入量可反映DNA损伤后修复合成的量。由于此种合成发生在DNA正常复制合成主要时期以外，故称为程序外DNA合成(unschedule DNA synthesis UDS)试验或DNA修复合成试验。一般使用人淋巴细胞或啮齿动物肝细胞等不处于正在增殖
细胞活性检测DNA合成增殖实验
BrdU检测法BrdU为胸腺嘧啶核苷（Thymine）的衍生物，可用于标记活细胞中新合成的DNA（细胞活性周期S期），BrdU可随着DNA复制进入子细胞，因此在加入BrdU后分裂增殖的细胞DNA都会带有BrdU标记，可通过抗BrdU单克隆抗体检测，借此检测细胞的增殖能力，但BrdU单克隆抗体检测过程
关于DNA损伤试验—程序外DNA合成试验的介绍
程序外DNA合成试验基本方法是测定S期以外3H-胸苷掺入胞核的量，这一掺入量可反映DNA损伤后修复合成的量。由于此种合成发生在DNA正常复制合成主要时期以外，故称为程序外DNA合成(unschedule DNA synthesis UDS)试验或DNA修复合成试验。一般使用人淋巴细胞或啮齿动物肝
痘苗DNA检测实验
实验方法原理 实验材料 贴壁生长良好的单层 BS-C-1 或 HuTK-143B 细胞重组病毒噬斑悬液试剂、试剂盒 PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇DNA 提取缓冲液乙酸钠乙醇PCR 扩增缓冲液引物完全 MEM-10、MEM-2.5 和 MEM-5 培养基完全 MEM-10／BrdU 培养基筛选试剂4
痘苗DNA检测实验
PCR 法 斑点杂交法 Southern 杂交法 实验方法原理 实验材料
DNA合成仪合成原理
DNA的:即DNA3'端固定于基质上,然后沿3'向5'方向依次添加直至合成所需的DNA片段。不同于应用的DNA合成。合成过程:第一个碱基的3‘末端固定在树脂上,下一个碱基的5’-OH用二对甲氧三苯甲基DMT保护,碱基上的氨基用保护,然后对3‘-OH用氨基磷酸化合物进行活化。1
向平末端DNA连接合成接头实验
实验方法原理 接头是指合成的能够自身互补的 DNA 片段，一般长 8~16 个核苷酸，互补的片段复性后可形成平末端的含有一个酶切位点的双链分子。实验材料 T4 噬菌体连接酶T4 噬菌体多聚核苷酸激酶限制性内切核酸酶外源或目的 DNA 片段试剂、试剂盒 乙酸胺ATP乙醇10X 接头激酶缓冲液MgCl2
向平末端DNA连接合成接头实验
接头是指合成的能够自身互补的 DNA 片段，一般长 8~16 个核苷酸，互补的片段复性后可形成平末端的含有一个酶切位点的双链分子。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理接头是指合成的能够自身互补的 DNA 片段，一般长 8~16 个核苷酸，互补的片段复性后可形成平末端的含有一个
向平末端DNA连接合成接头实验
实验方法原理 接头是指合成的能够自身互补的 DNA 片段，一般长 8~16 个核苷酸，互补的片段复性后可形成平末端的含有一个酶切位点的双链分子。 实验材料
DNA合成仪合成原理介绍
DNA合成仪合成原理：DNA的固相合成:即DNA3'端固定于基质上，然后沿3'向5'方向依次添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于应用DNA聚合酶的DNA合成。合成过程:第一个碱基的3‘末端固定在树脂上，下一个碱基的5’-OH用二对甲氧三苯甲基DMT保护，碱基上的氨基用苯
DNA合成（DNA－synthesis－）技术介绍
蛋白质概念提出：DNA多肽合成（DNA synthesis ）：按照预定核苷酸的顺序，将脱氧核苷酸逐个进行人工连接合成DNA链的方法。目前多是采用固相合成法，即是在多聚体支持物上从3′端延伸核苷酸，可自动化操作。)目前，oligo DNA合成一般都采用固相亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，此方法具有高效
以3HTdR－掺入测定DNA合成实验
实验方法原理用3H -TdR 标记细胞，提取DNA用闪烁仪测定放射活性水平实验步骤 材料 无菌 处于合适时期的细胞（若使用热的 2mol/L PCA 方法需要细胞生长于玻璃器皿或试管中，若用其他方法，细胞可培养于常规的塑料皿中） 3H-TdR ，0.4 MBq /ml (约 10uC i/ml)
以3HTdR－掺入测定DNA合成实验
实验方法原理 用3H -TdR 标记细胞，提取DNA用闪烁仪测定放射活性水平 实验步骤 材料 无菌 处于合适时期的细胞（若使用热的 2mol/L PCA
以3HTdR－掺入测定DNA合成实验
实验方法原理 用3H -TdR 标记细胞，提取DNA用闪烁仪测定放射活性水平实验步骤 材料无菌处于合适时期的细胞（若使用热的 2mol/L PCA 方法需要细胞生长于玻璃器皿或试管中，若用其他方法，细胞可培养于常规的塑料皿中）3H-TdR ，0.4 MBq /ml (约 10uC i/ml)，每毫升
以3HTdR－掺入测定DNA合成实验
实验方法原理用3H -TdR 标记细胞，提取DNA用闪烁仪测定放射活性水平实验步骤材料无菌处于合适时期的细胞（若使用热的 2mol/L PCA 方法需要细胞生长于玻璃器皿或试管中，若用其他方法，细胞可培养于常规的塑料皿中）3H-TdR ，0.4 MBq /ml (约 10uC i/ml)，每毫升培养
贫血的实验室检测程序和诊断
贫血的诊断主要依靠检查外周血的血红蛋白（Hb）、红细胞数（RBC）和红细胞比积（Hct）。贫血的形态学分类需要借助红细胞三个平均值等参数。网织红细胞计数是每个贫血病人必须检查的项目，它对于鉴别贫血的基本性质有重要意义。直方图的观察分析，血涂片红细胞形态、大小等特征的观察对贫血的鉴别诊断有重要参考价值
贫血的实验室检测程序和诊断
贫血的诊断主要依靠检查外周血的血红蛋白（Hb）、红细胞数（RBC）和红细胞比积（Hct）。贫血的形态学分类需要借助红细胞三个平均值等参数。网织红细胞计数是每个贫血病人必须检查的项目，它对于鉴别贫血的基本性质有重要意义。直方图的观察分析，血涂片红细胞形态、大小等特征的观察对贫血的鉴别诊断有重要参考
痘苗DNA检测实验——PCR－法
除了 PCR 和 Southern 杂交可以检测病毒 DNA 外，也可以利用 DNA 点迹杂交方法检测在分离的噬斑中的重组病毒。本实验主要介绍用这3种方法来检测痘苗DNA。实验材料贴壁生长良好的单层 BS-C-1 或 HuTK-143B 细胞重组病毒噬斑悬液试剂、试剂盒PBS胰酶／EDTA干冰／乙醇
DNA合成的概念
中文名称DNA合成英文名称DNA synthesis定 义按照预定核苷酸的顺序，将脱氧核苷酸逐个进行人工连接合成DNA链的方法。目前多是采用固相合成法，即是在多聚体支持物上从3′端延伸核苷酸，可自动化操作。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
DNA合成仪简介
设计用于合成结构上类似DNA或RNA的寡核苷酸的自动化仪器。一般应用于固相合成法，每次将一个核苷酸加到所接长的寡核苷酸链上，加入每一个核苷酸都利用相同的化学反应与相应的嘌呤或嘧啶碱基衍生物作用。所用化学反应和操作细节随不同的仪器而改变，最广泛应用的方法是DNA合成的磷酸酰胺法。
DNA合成仪原理
DNA的固相合成。即DNA3'端固定于基质上，然后沿3'向5'方向依此添加核苷酸直至合成所需的DNA片段。不同于应用DNA聚合酶的DNA合成。合成过程个碱基的3‘末端固定在树脂上，下一个碱基的5’-OH用二对甲氧三苯甲基DMT保护，碱基上的氨基用苯甲酸保护，然后对3‘-OH用
细胞凋亡检测实验——DNA－片断化检测
实验方法原理细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩, 染色质DNA 在核小体单位之间的连接处断裂, 形成50~300 kbp 长的DNA 大片段, 或180~200 bp 整数倍的寡核苷酸片段, 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱（DNA ladder）。细胞经处理后，采用常规方法分离提纯DNA，进
慢病毒实验程序
含有目的基因的慢病毒 RNAi 干扰载体的构建和质粒纯化，提取慢病毒载体，包装系统共转染病毒包装细胞293T等。 3） 培养 48hrs - 72hrs 左右，收集含有病毒的上清培养液。 4） 病毒的纯化和浓缩。 5） 分装、- 80 ℃保存。 6） 滴度测定目的基因检定，并出具检测报告。
痘苗DNA检测实验——Southern－杂交法
实验方法原理以前，用 HindIII 限制性内切核酸酶消化鉴定痕苗病毒 DNA。大部分的外源基因插入重组病毒的 TK 基因中，TK 基因位于 HindIII 5.1 kb 的 J 片段上。这样在重组病毒中，如果插入片段上没有 HindIII 内切酶位点，则J片段就会增大。如果缺乏 HindIII 5
细胞凋亡检测实验——DNA－ladder法
实验方法原理发生细胞凋亡时，内源性核酸酶被激活，染色体DNA链在核小体之间被切割，形成180～200个碱基或其整数倍的DNA片段，将这些DNA片段抽提出来进行电泳，可得到DNA梯状条带（DNA ladder）。 实验材料凋亡细胞试剂、试剂盒蛋白酶K醋酸钾白细胞裂解液Tris-HClNaClEDTAS
细胞凋亡、非程序性和程序性细胞坏死的区别
区别点细胞凋亡非程序性细胞坏死程序性细胞坏死起因生理或病理性病理性变化或剧烈损伤死亡受体与肿瘤坏死因子结合，大多由于病毒侵染细胞膜保持完整，一直到形成凋亡小体破损破损染色质凝聚在核膜下呈半月状呈絮状同左细胞器无明显变化肿胀、内质网崩解同左细胞体积固缩变小肿胀变大同左凋亡小体有，被邻近细胞或巨噬细胞吞
互补DNA的合成步骤
1．cDNA第一链的合成所有合成cDNA第一条链的方法都要用依赖于RNA的DNA聚合酶(反转录酶)来催化反应，主要有两个关键因素，一个是mRNA模板，另一个是反转录酶 [3] 。商品化反转录酶有从禽类成髓细胞瘤病毒纯化到的禽类成髓细胞病毒（AMV）逆转录酶和从表达克隆化的Moloney鼠白血病病毒
DNA合成仪的发展
当前DNA合成仪的主要生产厂商都致力于机器性能的完善和应用领域的开拓以及高效率、高产率的仪器的开发与研究。 台湾科学委员会“基因医药卫生科技尖端研究计划”中的基因生物技术组已经成功研发全世界第一台高密度复制DNA合成仪，可以同时合成384条不同DNA，每日可合成768条DNA，并可以配合聚合酶