细胞活性检测DNA合成增殖实验

BrdU检测法BrdU为胸腺嘧啶核苷(Thymine)的衍生物,可用于标记活细胞中新合成的DNA(细胞活性周期S期),BrdU可随着DNA复制进入子细胞,因此在加入BrdU后分裂增殖的细胞DNA都会带有BrdU标记,可通过抗BrdU单克隆抗体检测,借此检测细胞的增殖能力,但BrdU单克隆抗体检测过程需要将部分DNA变性,使部分双股解开成单股才能顺利检测。且BrdU为光敏性,因此需要在光线刺激较低(黑暗)的环境下操作,并避光培养。EdU检测法EdU原理跟BrdU检测法很像,都是代替胸腺嘧啶(Thymine,T)渗入正在复制的DNA中,并加入能与EdU反应的荧光染料,即可利用检测荧光值侦测细胞增殖,或在细胞组织级别作为标记追踪等研究,实验过程不需要经过BrdU检测法的DNA变性处理。......阅读全文

细胞活性检测DNA合成增殖实验

BrdU检测法BrdU为胸腺嘧啶核苷(Thymine)的衍生物,可用于标记活细胞中新合成的DNA(细胞活性周期S期),BrdU可随着DNA复制进入子细胞,因此在加入BrdU后分裂增殖的细胞DNA都会带有BrdU标记,可通过抗BrdU单克隆抗体检测,借此检测细胞的增殖能力,但BrdU单克隆抗体检测过程

细胞活性检测代谢增殖测定

MTT检测法活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶,能使额外添加的MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan),并沉积在细胞中,死细胞则无此现象。接着用二甲基亚砜(DMSO)溶解沉积在细胞中的甲瓒后,可利用酶标仪490nm波长测光吸收值,依据吸光值(OD值)计算出活细胞数量。在一定细胞数范围内,吸

用Ki67检测细胞增殖活性

实验步骤展开

细胞增殖生长_流式细胞仪检测细胞周期时相和DNA合成法

实验方法原理近年流式光度仪的发展已成为检测细胞增殖周期主要手段,可进行多项柱测,如细胞周期时相、DNA 合成强度、持续时间等,效果极好,已取代了应用同位素等繁琐方法。培养细胞是非常适用于做流式细胞仪检测的对象,程序简单、怏速、效果准确。实验材料细胞仪器、耗材流式仪实验步骤1.  细胞80 %接近合细

非程序DNA合成检测实验

实验方法原理 非程序DNA合成(Unscheduled DNA Synthesis:UDS)即S期外的DNA合成。在一般情况下细胞内DNA合成只见于S期,但当处于非S期细胞DNA受损伤时,随着DNA损伤的修复也将发生DNA合成现象,即UDS。在化学致突变物、致癌物作用诱发细胞DNA损伤时,也诱导DN

非程序DNA合成检测实验

实验方法原理非程序DNA合成(Unscheduled DNA Synthesis:UDS)即S期外的DNA合成。在一般情况下细胞内DNA合成只见于S期,但当处于非S期细胞DNA受损伤时,随着DNA损伤的修复也将发生DNA合成现象,即UDS。在化学致突变物、致癌物作用诱发细胞DNA损伤时,也诱导DNA

细胞DNA增殖的特点

细菌DNA复制、RNA转录和蛋白质合成同时进行,这是细菌对快速生长的原因。DNA复制不受细胞周期的限制,快速生长的细菌,在上一次细胞分裂结束时,细胞内的DNA经复制到一半进程,以保证迅速进行下一次分裂。1、细胞周期是第一次分裂开始到第二次分裂开始所经历的全过程。《普通生物学》陈阅增2、细胞周期是第一

细胞增殖检测

细胞增殖检测:3H同位素渗入法实例             实验方法原理 树突状细胞(DC) 是一组分布广泛的、由骨髓来源的、具有迁移能力的免疫细胞。体外培养的细胞分化能力并为完全丧

细胞增殖检测

细胞增殖检测:3H同位素渗入法实例             实验方法原理 树突状细胞(DC) 是一组分布广泛的、由骨髓来源的、具有迁移能力的免疫细胞。体外培养的细胞分化能力并为完全丧

细胞增殖检测:MTT实验经验总结

MTT分析法以活细胞代谢物还原剂3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT噻唑蓝为基础。MTT为黄色化合物,是一种接受氢离子的染料,可作用于活细胞线粒体中的呼吸链,在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用

NK细胞活性检测实验步骤

  细胞毒检测技术包括补体依赖细胞毒试验、NK细胞介导的细胞毒试验和特异性CTL活性检测,常用的实验技术有后两种。NK细胞(natural killer cell)是在天然免疫系统发挥主要作用的效应细胞,可直接杀伤病毒感染的靶细胞和某些肿瘤细胞。而细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymp

IL1生物学活性检测实验——小鼠胸腺细胞增殖法

白细胞介素-1(IL-1)主要是由活化的单核-巨噬细胞合成和分泌的一种细胞因子,具有活化淋巴细胞、协同刺激胸腺细胞增殖、参与抗体产生和促炎症反应等多种生物学功能。IL-1有IL-1α和IL-1β构成,结合同种受体,表现相同的生物学活性。实验方法原理IL-1与小鼠胸腺细胞共同培养时,IL-1可刺激小鼠

细胞增殖检测方法

一、胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)渗入法 胸腺嘧啶核苷(TdR)是DNA特有的碱基,也是DNA合成的必需物质。用同位素3H标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体能掺入DAN合成代谢过程,通过测定细胞的放射性强度,可以反映细胞DAN的代谢及细胞增殖情况。但是具有放射性。 二、MTT检测法 MTT检

细胞增殖检测:BrdU

5-brdu 的分子量为307.1,将100mg分为三份30.7mg(0.1mmol),溶于1ml三蒸水,分装-20度保存。用的时候再稀释100倍,如在1ml 溶液里加入10ul即可。尽量分装为小剂量,如100ul,避免反复冻融使其活性降低。 1、BudR贮存液的配制 BudR 5mg(先用0.5m

MTT法细胞活性检测实验步骤

MTT是一种粉末状化学试剂,全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,汉语化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名:噻唑蓝,是一种黄颜色的染料。MTT主要有两个用途:

淋巴细胞增殖实验

淋巴细胞增殖法对于(1)免疫学的研究(2)淋巴细胞的T细胞,吞噬细胞等的功能研究。实验方法原理淋巴细胞在体外经某种物质刺激,细胞代谢和形态相继变化,在24——48h细胞内蛋白质和核酸的合成增加,产生一系列增殖的变化,如细胞变化、细胞浆扩大、出现空泡、核仁明显、核染色质疏松等,由淋巴细胞转变为淋巴母细

细胞凋亡检测实验——DNA-片断化检测

实验方法原理细胞凋亡时主要的生化特征是其染色质发生浓缩, 染色质DNA 在核小体单位之间的连接处断裂, 形成50~300 kbp 长的DNA 大片段, 或180~200 bp 整数倍的寡核苷酸片段, 在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(DNA ladder)。细胞经处理后,采用常规方法分离提纯DNA,进

细胞增殖检测:MTT法

细胞增殖检测:MTT法             实验方法原理 MTT 分析法以活细胞代谢物还原剂 3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-

细胞增殖检测:MTT法

MTT法,又称MTT比色法,可以用于:检测细胞存活和生长。实验方法原理MTT 分析法以活细胞代谢物还原剂 3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide, MTT 噻唑蓝为基础。MTT 为黄色化合物,是一种接受氢离子的染

小鼠胸腺细胞增殖3HTdR掺入法检测IL1的生物活性实验

实验试剂1. 75%酒精2. 5% FCS-RPMI-1640完全培养液与RPMI-1640完全培养液3. ConA或PHA4. IL-1标准品:倍比稀释成至少6个不同浓度值。实验设备1. 3H-TdR、β-液闪汁数仪,微量细胞收集仪2. 解剖刀、剪、单皿、研磨工具(玻璃匀浆器,不诱钢网或者毛玻璃片

细胞生物学实验中细胞增殖的检测方法

1.检测细胞代谢活性检测细胞的代谢活性也可以反映细胞增殖的情况。在细胞增殖过程中乳酸脱氢酶的活性会增加,而活性的脱氢酶可以使得外源性的四唑盐或者阿尔玛蓝(Alamar blue)还原成为带有颜色还原产物。通过分光光度计或者酶标仪来读取含染料培养基的吸光度,从而衡量细胞的代谢活性,检测细胞增殖的情

细胞凋亡检测实验——DNA-ladder法

实验方法原理发生细胞凋亡时,内源性核酸酶被激活,染色体DNA链在核小体之间被切割,形成180~200个碱基或其整数倍的DNA片段,将这些DNA片段抽提出来进行电泳,可得到DNA梯状条带(DNA ladder)。 实验材料凋亡细胞试剂、试剂盒蛋白酶K醋酸钾白细胞裂解液Tris-HClNaClEDTAS

细胞凋亡检测实验——Caspase3活性检测法

实验方法原理Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中caspase-3为关键的执行分子,它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞浆中,在凋亡的早期阶段,它被激活,活化的Caspase-3由两个大亚基(17KD)和两个小亚基(

L929细胞增殖MTT比色法检测IL1的生物活性实验原理和操...

L929细胞增殖MTT比色法检测IL-1的生物活性实验原理和操作步骤【基本原理】IL-1具有刺激多种来源的成纤维细胞增殖的作用,可用于IL-1生物活性检测。目前国内外大多数实验室常用L929细胞株(小鼠成纤维细胞瘤细胞)作为检测IL-1生物活性的靶细胞或反应细胞。MTT比色法的原理是利用四甲基偶氮唑

细胞增殖的密度限制实验

实验方法原理细胞在无限制培养基中培养,生长至包和密度。用放射自显影测定 3 H-胸腺嘧啶脱氧核苷标记细胞的百分比。实验材料传代用的细胞                                                          试剂、试剂盒生长培养基              

细胞增殖的密度限制实验

实验方法原理细胞在无限制培养基中培养,生长至包和密度。用放射自显影测定 3 H-胸腺嘧啶脱氧核苷标记细胞的百分比。实验材料传代用的细胞试剂、试剂盒生长培养基维持培养基D-PBSA胰蛋白酶仪器、耗材24 孔培养板培养皿实验步骤一、材料无菌1. 准备用于传代的细胞 2. 生长培养基 3. 维持培养基(无