转化克隆的筛选和鉴定
实验概要本实验介绍了转化克隆的筛选和鉴定方法，有助于学会用酶切法或PCR法筛选重组质粒转化成功的克隆菌。实验原理利用转化后宿主菌所获得的抗菌素抗性性状筛选出获得质粒的菌落克隆。再从这些菌落中鉴定出质粒上带有外源基因插入片段的克隆菌落。主要试剂1. LB培养基(加抗菌素)2. PCR用试剂3. 引物4. 质粒提取用试剂5. 酶切需要的限制性内切酶及其缓冲液，70%甘油(70%甘油，0.1mol/L MgSO4，0.025mol/L Tris-HCl pH8.0)。6. 100mg/ml氨苄青霉素主要设备1. 旋涡混合器2. 小镊子3. 微量移液取样器4. 移液器吸头5. 1.5ml 微量离心管6. 双面微量离心管架7. 干式恒温气浴(或恒温水浴锅)8. 制冰机9. 恒温摇床10. 超净工作台11. 酒精灯12. 无菌牙签13. 摇菌管实验步骤1. 酶切鉴定 1) 在超净工作台中取3支无菌摇菌管，各加入3ml......阅读全文
转化克隆的筛选和鉴定
1．目的学会用酶切法或PCR法筛选重组质粒转化成功的克隆菌。 2．原理利用转化后宿主菌所获得的抗菌素抗性性状筛选出获得质粒的菌落克隆。再从这些菌落中鉴定出质粒上带有外源基因插入片断的克隆菌落。 3．器材旋涡混合器，小镊子，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，干式恒温
转化克隆的筛选和鉴定
1．目的学会用酶切法或PCR法筛选重组质粒转化成功的克隆菌。2．原理利用转化后宿主菌所获得的抗菌素抗性性状筛选出获得质粒的菌落克隆。再从这些菌落中鉴定出质粒上带有外源基因插入片段的克隆菌落。3．器材旋涡混合器，小镊子，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，干式恒温气浴
转化克隆的筛选和鉴定
实验概要本实验介绍了转化克隆的筛选和鉴定方法，有助于学会用酶切法或PCR法筛选重组质粒转化成功的克隆菌。实验原理利用转化后宿主菌所获得的抗菌素抗性性状筛选出获得质粒的菌落克隆。再从这些菌落中鉴定出质粒上带有外源基因插入片段的克隆菌落。主要试剂1. LB培养基(加抗菌素)2. PCR用试剂3. 引物4
转化克隆的筛选和鉴定实验
实验原理利用转化后宿主菌所获得的抗菌素抗性性状筛选出获得质粒的菌落克隆。再从这些菌落中鉴定出质粒上带有外源基因插入片段的克隆菌落。实验试剂1. LB培养基(加抗菌素)2. PCR用试剂3. 引物4. 质粒提取用试剂5. 酶切需要的限制性内切酶及其缓冲液，70%甘油(70%甘油，0.1mol/L Mg
重组片段的转化及克隆和筛选
一、目的与原理转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。二、材料和方法1.材料：大肠杆菌2.仪器：离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜
实验九 转化克隆的筛选和鉴定
1．目的学会用酶切法或PCR法筛选重组质粒转化成功的克隆菌。2．原理利用转化后宿主菌所获得的抗菌素抗性性状筛选出获得质粒的菌落克隆。再从这些菌落中鉴定出质粒上带有外源基因插入片段的克隆菌落。3．器材旋涡混合器，小镊子，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，干式恒温气浴
转化克隆的筛选和鉴定——快速PCR筛选法
实验材料重组大肠杆菌试剂、试剂盒LB培养基氨苄青霉素乙醇质粒提取试剂盒引物Taq酶PCR缓冲液甘油硫酸镁dNTP蒸馏水琼脂糖仪器、耗材试管记号笔酒精灯冰箱牙签旋涡混合器微量移液取样器移液器吸头离心管双面微量离心管架制冰机恒温摇床超净工作台摇菌管PCR仪培养皿凝胶电泳仪
转化克隆的筛选和鉴定——酶切鉴定法
利用转化后宿主菌所获得的抗菌素抗性性状筛选出获得质粒的菌落克隆。再从这些菌落中鉴定出质粒上带有外源基因插入片断的克隆菌落。实验材料重组大肠杆菌试剂、试剂盒LB培养基氨苄青霉素乙醇质粒提取试剂盒限制性内切酶缓冲液甘油硫酸镁Tris盐酸琼脂糖仪器、耗材试管记号笔酒精灯冰箱牙签旋涡混合器镊子微量移液取样器
克隆化酵母DNA的操作实验——整合性转化
实验材料酵母实验步骤1. 将待研究的基因亚克隆到YIP质粒。 2. 用限制性内切酶在克隆化基因内部切开，使质粒线性化。 3. 用1~10 μg DNA加上担体DNA转化适合的菌株，通过质粒上带的标记进行选择，在选择培养基上纯化几个转化子，制备DNA，应用Southern 杂交确证整合是否发生在
快速鉴定插入外源片段的克隆（从转化子中筛选重组名）
由于载体自身环化会产生大量的不含插入片段的转化子，给鉴定重组子带来一些麻烦。通常用双酶切（即插入片段两端酶切位点不同）载体去磷酸化，或者蓝白斑筛选有助于减少这种麻烦，但有的时候还是会需要大量筛选转化子中的重组子。A．Epicertre 公司提供一种快速连接和筛选试剂盒。可在转化子分布不是太密时（