一种适于大鼠牙周膜I型胶原mRNA原位杂交的方法
实验概要本实验方法是选用大鼠为对象建立动物模型，采用地高辛标记的寡核苷酸探针的原位杂交。实验步骤1. 标本制备 选用80只体重为250±20g的雄性Wistar成年大鼠，给大鼠注射过量麻药后，左心室用4％多聚甲醛灌注。解剖出下颌骨，仅保留磨牙区骨段，浸泡于4％多聚甲醛中再固定6小时。将标本移入脱钙液(含0.7g/L EDTA，8mg/L 酒石酸钠钾，0.14g/L 酒石酸钠，99.2ml/L HCL)中4℃保存两周。洗净脱钙液，梯度乙醇脱水，石蜡包埋。每个下颌骨标本切3张组织切片，厚度一律控制为5μm，裱于经硅化处理的玻片上。2. 探针的制备与标记 采用长度为39个碱基的反意义寡核苷酸探针，序列为：5’-GCC GTC TTC AGA GCT GTA AAC GTG GAG GCA AGG AGT CCC-3’。用地高辛寡核苷酸加尾试剂盒将地高辛精11-dUTP标记到寡核苷酸的3’末端。 3. 原位杂交 &n......阅读全文
转运RNA的定义
大多数tRNA由七十几至九十几个核苷酸组成，参与蛋白质的合成。分子量为25000～30000，沉降常数约为4S（个别tRNA的沉降常数为3S，含63个核苷酸）。曾用名有联接RNA、可溶性RNA、pH5RNA等。一种tRNA只能携带一种氨基酸，如丙氨酸tRNA只携带丙氨酸，但一种氨基酸可被不止一种
微RNA的作用
人类基因组计划结束后，人们发现编码蛋白质的基因只占总基因组的约2%。而占人类基因组95%的非编码序列竟是产生大量非编码RNA的源泉，这些非编码RNA主要充当调控者的角色，在细胞分化凋亡、生物发育、疾病发生等方面均起重要作用。其实，RNA比DNA更为古老，它组成了地球上最早的生命。生命起源初期，没有由
ISOLATION－OF－RNA－FROM－BACTEROIDS
3 g nodules (fresh or frozen in liquid N2) were ground to a powder in mortar and pestle with liquid N2. To the powder was added ice cold 0.5 M mannito
RNA沉默的作用
植物可利用 PTGS 和 TGS 来抵抗病毒侵染, 病毒侵染植物后会产生大量病毒来源的小 RNA (virus-derived small interfering RNAs, vsiRNA), 介导对病毒 RNA 的降解或抑制病毒基因的转录; 而在与植物长期共进化过程中, 病毒编码一个或多个RNA沉
RNA电泳操作步骤
试剂: 琼脂糖(Agarose)、甲醛、甲酰胺、MOPS、EDTA、DEPC水。 步骤 一 、5 x MOPS-EDTA Buffer的配制(0.1 M MOPS pH7; 5mM EDTA; 10mM NaAc) 1、称量20.9g的MOPS,置于1L烧杯中。 2. 加700mL DEPC水溶解
转运RNA的定义
大多数tRNA由七十几至九十几个核苷酸折叠形成的三叶草形短链组成，相对分子质量为25000〜30000，沉降常数约为4S。旧称联接RNA、可溶性RNA等。主要作用是携带氨基酸进入核糖体，在mRNA指导下合成蛋白质，即以mRNA为模板，将其中具有密码意义的核苷酸顺序翻译成蛋白质中的氨基酸顺序。tRNA
卫星RNA的重组
在一些动物病毒中，存在着基因组之间的重组现象。发生重组的RNA可能具有同源性，也可能没有同源性。前一种情况下，交换重组的RNA发生在两者之中的相同位置而不会改变通读框架ORF；后一种情况下，交换重组的位置不确定，因而会影响到ORF。在植物病毒中，仅证明雀麦花叶病毒BMV存在着RNA基因组重组现象。T
总RNA提取实验
实验方法原理 GTC和N-十二烷基肌氨酸钠的联合使用，将促使核蛋白复合体的解离，使RNA 与蛋白质分离，并将RNA 释放到溶液中。而进一步从复合体中纯化RNA ，则根据Chomc zynski和Sacchi的一步快速抽提法进行，采用酸性酚-氯仿混合液抽提。低pH值的酚将使RNA 进入水相
核RNA的概念
中文名称核RNA英文名称nuclear RNA定 义细胞核内的RNA。如核内不均一RNA、核小RNA、核仁小RNA等。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），核酸与基因（二级学科）
3.5－RNA－反转录
利用 RNA 模板通过反转录获得 DNA,进而复制和感染细胞实验材料poly(A)+RNA反转录酶鼠源反转酶 或禽源反转录酶试剂、试剂盒oligo(dT)12-18lmol LTris-Cl1mol LTris-Cllmol LKC125 mmol LMgCl2dNTP 混合物0.lmol LDTT
RNA病毒的简介
RNA病毒（RNA virus) 也称RNA型病毒。植物病毒，除少数例外（如花椰菜花叶病毒Caulif -lower mosaic virus），几乎都是RNA病毒。RNA病毒冠状病毒直径为80～160nm，为有包膜的单股RNA病毒RNA的复制过程中，其错误修复机制的酶的活性很低很低，几乎是没有
卫星RNA的特点
1、多个卫星RNA分子可与辅助病毒基因组存在于同一衣壳中。2、对宿主植物无独立的侵染性。3、其复制和包装全部依赖于辅助病毒而后者不依赖于前者。4、不具有mRNA活性。5、与辅助病毒的RNA无同源性。6、能干扰辅助病毒的复制从而降低其增殖量。7、可改变辅助病毒所引起的植物病害程度和症状。8、它对辅助病
卫星RNA的加工
在具侵染性小分子RNAs的复制机制中，RNA的加工最令学者们兴趣，即是在多聚体形式与相关的线状和环状单体之间的切割与连接过程。1986年有学者发现烟草环斑病毒ToRSV与卫星RNA 正链二聚体在接点处自我切割，产生具有感染性的线状单休。随后，又发现包含有ASBV的正链与负链的二聚体的体外转录休能够在
转运RNA的功能
主要是携带氨基酸进入核糖体，在mRNA指导下合成蛋白质。即以mRNA为模板，将其中具有密码意义的核苷酸顺序翻译成蛋白质中的氨基酸顺序（见蛋白质的生物合成、核糖体）。tRNA与mRNA是通过反密码子与密码子相互作用而发生关系的。在肽链生成过程中，第一个进入核糖体与mRNA起始密码子结合的tRNA叫
RNA定位的功能
中文名称RNA定位英文名称RNA localization定 义RNA特异定位在细胞不同区域的过程。尤其是信使核糖核酸(mRNA)的定位对生长和发育是重要的。细胞质中RNA定位起始于细胞核，在核中被特异RNA结合蛋白识别，生成核糖核蛋白复合体，然后输出到细胞质。应用学科生物化学与分子生物学（一级学
反义RNA技术要素
[1]长的反义RNA并不一定比短的反义RNA更为有效；[2]在原核生物中针对SD序列及其附近区域的反义RNA可能更有效；[3]在真核生物中，对应于5'端非编码区的反义RNA可能比针对编码区的反义RNA更有效；[4]尽量避免在反义RNA分子中出现自我互补的二级结构；[5]设计的反义RNA分子中
RNA病毒类型介绍
病毒的核酸包括双链DNA（dsDNA）、单链DNA（ssDNA）、双链RNA（dsRNA）、正单链RNA（+ssRNA）、负单链RNA（-ssRNA）五种不同类型。病毒颗粒中的组成成分有简有繁，有的用颗粒自带专门用于病毒复制的核酸酶，有的则无。有些RNA病毒的RNA并不仅有一个分子，如流感病毒有8条
RNA干扰实验技术
实验概要本文介绍了RNA干扰的原理及基本实验方法，包括了siRNA的设计、siRNA的制备和siRNA的转染等方法，及RNA干扰实验中的注意事项。实验原理近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因
真菌RNA提取实验
真菌RNA的提取可以：（1）用于真菌RNA干扰机制研究；（2）用于cDNA文库构建等研究；（3）用于真菌分子生物学相应研究。实验方法原理液氮研磨可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成
RNA沉默的作用
植物可利用 PTGS 和 TGS 来抵抗病毒侵染, 病毒侵染植物后会产生大量病毒来源的小 RNA (virus-derived small interfering RNAs, vsiRNA), 介导对病毒 RNA 的降解或抑制病毒基因的转录; 而在与植物长期共进化过程中, 病毒编码一个或多个RNA沉
病毒RNA提取实验
病毒RNA提取可以：（1）用于RNA病毒复制机制研究；（2）用于反向遗传学研究；（3）用于分子病毒学其他研究。实验方法原理大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。实验材料TMV病毒液试剂、试剂盒TE-饱和酚:氯
动物RNA提取实验
实验方法原理 SV Total RNA Isolation System (SV 总RNA 纯化系统)可在1小时内从组织、培养细胞和白细胞中提取纯化完整总RNA，方法简单、快速。该系统以膜为基础，根据组织类型的不同，每次最多可纯化60 mg 组织。系统包含DNase 处理步骤，直接在小离
Arabidopsis－RNA－extraction－protocol
1-2 g fresh material, freezer-dried, ground with 0.2g sand (if necessary), and then homogenized with 10ml RNA extraction buffer (see below). Spin
概述反义RNA技术
随着分子生物学和遗传工程的发展，基因治疗应运而生，反义技术是其中一种，它的基础是根据核酸杂交原理设计针对特定靶序列的反义核酸，从而抑制特定基因的表达，包括反义RNA、反义DNA及核酶（Ribozyme），它们通过人工合成和生物合成获得。 反义DNA是指一段能与特定的DNA或RNA以碱基互补配对
Arabidopsis－RNA－extraction－protocol
1-2 g fresh material, freezer-dried, ground with 0.2g sand (if necessary), and then homogenized with 10ml RNA extraction buffer (see below).Spin at 8,
RNA干扰的特点
1.高效性：Elbashir等在研究中发现分别为25 nmol/L与100 nmol/L的起始双链RNA产生的结果是一样的，只是高浓度起始的更有效些。将双链RNA浓度降低到1.5 nmol/L时产生的基因沉默效果变化不大，只有当浓度降低到0.05 nmol/L时，沉默的效果才消失。Holen等也证实
真菌RNA提取实验
实验方法原理 液氮研磨可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。 实验材料 菌丝体试剂、试剂盒 NaCl蒸馏水SDSTr
分离纯化总RNA
1） 用酸性酚-硫氰酸胍-氯仿提取纯化组织和细胞中的RNA1. 选取从组织细胞或细胞中提取RNA的适宜方法组织a. 分离组织并立即置于液氮中。b. 将约100 mg冰冻组织含液氮的研钵中，用研棒研磨。研磨过程中可加入液氮使组织保持冰冻状态。c.
RNA提取技术概述
RT-PCR是将RNA的反转录（Reverse Transcription，RT）和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术，近年来得到快速发展和广泛应用。首先，经反转录酶的作用，以RNA为模板，合成互补的DNA链（cDNA），再以cDNA为模板，通过PCR扩增合成目的片段。RT-PC
提取病毒RNA方法
一、用异硫氰酸胍提取提禽流感病毒的详细步骤，可参考（我提过N次做定量PCR都没问题）：1.取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管2.加600ul异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加200ul氯仿，颠倒混匀3.13000rpm离心15min4.在第3步离心快结束时，