肠道微生物DNA的提取方法
实验概要肠道微生物DNA是进行微生物分子生态学研究的前提。能否获得高的DNA提取率和高质量的DNA，从而真实地反映微生物群落的实际情况，是保障研究结果是否可靠的关键。如何获取高质量、较完整的肠道菌群基因组DNA是肠道微生物研究中的关键。本研究采用物理方法，化学方法，酶解法等进行DNA提取，并对其进行比较，经过优化得到最佳的提取方法，使其符合以后PCR扩增要求以及其它后续研究工作。试验结果表明用液氮研磨加CTAB提取液的方法提取的肠道微生物总DNA的效果高于其它方法。并且通过电泳以及PCR检测，所提取的DNA的质量适于进一步的分子生物学研究。实验材料健康成年对虾购于市场，挑取生长较好、大小均一的，于超净台下取肠道，无菌操作。实验步骤1. DNA提取方法方法A： 1) 取0.02g虾肠加入总量1mL PBS匀浆，液氮研磨 2) 加入250uL 0.5% Twee......阅读全文
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定2
（1）CaCl2处理以后的转化: 当细菌处于0℃、二价阳离子（如Ca2+、Mg2+等）低渗溶液中时，细菌细胞膨胀成球形，处于感受态；此时转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，重组DNA在42℃短时间热冲击后吸附在细胞表面，在丰富培养基中生长数小时后，球状细胞恢复原
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体2
二、噬菌体载体作为细菌寄生物的噬菌体，大多数具有编码多种蛋白质的基因，能利用宿主细胞的蛋白质合成体系，进行生长和增殖。构建的噬菌体载体，以λ噬菌体、M13和粘粒最为常用。㈠ λ噬菌体载体野生型λDNA是一种基因组为4.8 kb的线性双链DNA，全部序列已知，共编码50多个基因。其中约一半基因参与
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定1
重组DNA是在体外用限制性内切酶，将不同来源的DNA分子进行特异地切割，获得的目的基因或DNA片段与载体重新连接，从而组成一个新的DNA杂合分子。重组的DNA分子能够通过一定的方式进入相应的宿主细胞，在宿主细胞中进行无性增殖，获得大量的目的基因或DNA片段，此过程称基因克隆。重组的DNA分子也能够在
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体1
载体（vector）是携带靶DNA（目的DNA）片段进入宿主细胞进行扩增和表达的运载工具。常用的载体是通过改造天然的细菌质粒、噬菌体和病毒等构建而成。目前已构建成的载体主要有质粒载体、噬菌体载体、病毒载体和人工染色体等多种类型，亦可根据其用途不同分为克隆载体和表达载体二类。载体的构建和选择应考虑以下
DNA合成（DNA－synthesis－）技术介绍
蛋白质概念提出：DNA多肽合成（DNA synthesis ）：按照预定核苷酸的顺序，将脱氧核苷酸逐个进行人工连接合成DNA链的方法。目前多是采用固相合成法，即是在多聚体支持物上从3′端延伸核苷酸，可自动化操作。)目前，oligo DNA合成一般都采用固相亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，此方法具有高效
DNA－指纹的概念高变区DNA与DNA指纹
人的卫星DNA 或称随体DNA 是由一些短的DNA 片段（10bp 左右）多次重复所构成的。重复片段的组成和拷贝数在不同的个体及基因组的不同位置上不一样。提取不同个体的基因组DNA 后，用其切点能识别序列为4 个碱基而又不切割该重复片段的限制性内切酶在重复片段的两侧切割基因组DNA ，然后将样品进行
DNA－Fingerprinting,－DNA－Barcoding,－and－Next－Generation－Sequencing－...
DNA fingerprinting of plants has become an invaluable tool in forensic, scientific, and industrial laboratories all over the world. PCR has becom
DNA－Immunoprecipitation－for－the－Determination－of－DNABinding－Specificity
Andrea J. Gossett and Jason D. Lieb1 Department of Biology, University of North Carolina at Chapel Hill, Chapel Hill, NC 27599, USA 1Correspond
“垃圾DNA”或是编码DNA的“卫士”
“垃圾DNA”的概念是在上世纪70年代提出来的，用来形容那些基因组中不是编码蛋白质的DNA序列，而在学术上被称为非编码DNA序列。 由于当时的科学家普遍认为有生物学意义的蛋白质才是决定生物性状的关键，而且也没有一种好的理论和技术手段来解释这些“垃圾”存在的原因，于是“垃圾DNA”这一观念便形
“垃圾DNA”或是编码DNA的“保镖”
"垃圾DNA"的概念源自上世纪70年代，用来形容基因组中不是编码蛋白质的DNA序列，在学术上被称为非编码DNA序列。 非编码DNA"开关说"究竟是个啥？ 科学家们发现，人类基因组中包含多达400万个基因开关和功能调节因子，它们的载体便是"垃圾DNA"。这强烈地冲击了"DNA序列=生物性
DNA连接酶(DNA－ligase)介绍
DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA
DNA提取方法洗涤－DNA（或－RNA）
当裂解物通过硅胶膜进行离心分离,现在所提取的 DNA 或 RNA 应该与柱子结合,杂质、细胞蛋白和多糖应该已经通过了。 但是,膜仍然被残留的细胞蛋白质和盐弄脏。如果样品来自植物,仍然会有多糖,也许一些色素留在膜上,或者如果样品是血液,膜可能会被染成棕色或黄色。洗涤步骤用于去除这些杂质。通常有两次洗涤
DNA重组（DNA－recombination）技术：工具酶
一、限制性内切酶限制性内切酶（restriction endonucleases，RE）是其中最重要的工具酶之一。它是一类核酸水解酶，能识别和切割双链DNA分子中的特定核苷酸序列。（一）命名原则限制性内切酶大多从细菌中发现，根据来源进行命名，限制酶的第一个字母（大写，斜体）为宿主菌的属名，第二、第三
DNA提取方法DNA－提取后纯化：将－DNA－与色谱柱结合
离液盐对于裂解至关重要,而且对于将 DNA(或 RNA)与色谱柱结合也是如此。此外,为了增强和影响核酸与二氧化硅的结合,还添加了酒精。大多数情况下这是乙醇,但有时可能是异丙醇。乙醇百分比和体积有很大的影响。太多,你会带入大量降解的核酸和小物种,这会影响 A260 读数并降低你的一些产量。太少,可能难
Phage－DNA
IntroductionThe phage lysate from the plate contains bacterial DNA and RNA, as well as phage DNA encased in the phage coat. The following procedure, d
electrophoresis－of－DNA
Agarose Gel Electroporesis of DNA Making the gel: 1. Place casting platform with well former sideways in gel stand where you wish to pour
DNA转染
DNA转染· Transfection of Mammalian Cells Using Lipofectamine (LTI)· Guide to Eukaryotic Transfections with Cationic Lipid Reagents (PDF)
DNA克隆
DNA克隆（主要内容如下）· General Procedure· PCR Cloning· Subcloning· ET Cloning· Vector Preparation· Ligation Re
DNA转化
DNA转化Chemical Transformation· Transformation of Competent Cells (RbCl2 Method) (Goldberg Lab)Very nice protocol for E. Coli transformation inc
DNA测序
DNA测序（主要内容如下）· Sequencing Gel Preparation· Preparation of Templates · DNA Sequencing by the Dideoxy Method· DNA Sequen
DNA定量
Characterization of dnaLEVEL IMaterialsDNA sampleSSC bufferUV spectrophotometer 3 and quartz cuvettesProcedureDissolve a small quantity of your extrac
DNA－Laddering
I. Protocol1. Harvest cellsOptional: wash plate with 37°C PBS (gently, so as not to lose cells); check on microscope,after aspirate PBS or mediaPlace
DNA标记
DNA标记（主要内容如下） DNA Labeling by Nick Translation Random Primed Labeling End-Labeling Purification of Labeled DNA Non-isotopic Labeling OthersDNA L
DNA测序
实验方法原理 ABI PRISM 310型基因分析仪(即DNA测序仪)，采用毛细管电泳技术取代传统的聚丙烯酰胺平板电泳，应用该公司ZL的四色荧光染料标记的ddNTP(标记终止物法)，因此通过单引物PCR测序反应，生成的PCR产物则是相差1个碱基的3'末端为4种不同荧光染料的单链DN
DNA重组
目的：简单介绍了DNA重组技术的一些方法。包括重组质粒、PCR等。包括细胞结构、DNA，DNA如何改点等。
DNA电泳
DNA电泳（主要内容如下） Preparation of Agarose Gel and Electrophoresis Extraction of DNA From Agarose Gel Extraction of DNA from Acrylamide Gels DNA Marker
DNA－Electrophoresis
What is Electrophoresis?Electrophoresis is a technique used in the laboratory that results in the separation of charged molecules. DNA is a negatively
DNA测序
自动测序法 双脱氧链末端终止法 非同位素银染 鸟枪法 Maxam-Gilbert化学修饰法 实验方法
微生物
现代定义：微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物，个体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物，统称为微生物。微生物包括细菌、病毒、霉菌、酵母菌等。（但有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。）
DNA指纹图谱分析[DNA－Fingerprinting－]
一. 实验目的1. 掌握DNA指纹图谱技术的概念、原理和基本操作过程2. 学习DNA的限制性酶切的基本技术3. 掌握琼脂糖凝胶电泳的基本操作技术，学习利用琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段的长度，并能对实验结果进行分析。二. 实验原理1984年英国莱斯特大学的遗传学家Jefferys及其合作者首次将分离的