肠道微生物DNA的提取方法
实验概要肠道微生物DNA是进行微生物分子生态学研究的前提。能否获得高的DNA提取率和高质量的DNA，从而真实地反映微生物群落的实际情况，是保障研究结果是否可靠的关键。如何获取高质量、较完整的肠道菌群基因组DNA是肠道微生物研究中的关键。本研究采用物理方法，化学方法，酶解法等进行DNA提取，并对其进行比较，经过优化得到最佳的提取方法，使其符合以后PCR扩增要求以及其它后续研究工作。试验结果表明用液氮研磨加CTAB提取液的方法提取的肠道微生物总DNA的效果高于其它方法。并且通过电泳以及PCR检测，所提取的DNA的质量适于进一步的分子生物学研究。实验材料健康成年对虾购于市场，挑取生长较好、大小均一的，于超净台下取肠道，无菌操作。实验步骤1. DNA提取方法方法A： 1) 取0.02g虾肠加入总量1mL PBS匀浆，液氮研磨 2) 加入250uL 0.5% Twee......阅读全文
怎样提取微生物的质粒（DNA）
碱提法：一、试剂准备1.溶液Ⅰ:50mM葡萄糖,25mM Tris-HCl(pH 8.0),10mM EDTA(pH 8.0）.1M Tris-HCl(pH 8.0）12.5ml,0.5M EDTA（pH 8.0）10ml,葡萄糖4.730g,加ddH2O至500ml.在10 lbf/in2高压灭菌
肠道微生物DNA的提取方法
实验概要肠道微生物DNA是进行微生物分子生态学研究的前提。能否获得高的DNA提取率和高质量的DNA，从而真实地反映微生物群落的实际情况，是保障研究结果是否可靠的关键。如何获取高质量、较完整的肠道菌群基因组DNA是肠道微生物研究中的关键。本研究采用物理方法，化学方法，酶解法等进行DNA提取，并对其进行
微生物检测应用DNA探针法
在许多病原微生物的检测上,常用的分离培养方法需要的时间较长,手续也较繁杂,而且病灶和粪便等病料含杂菌较多,阻碍病原微生物的检出,不能快速做出诊断。免疫学方法也有许多不足之处,尤其是在持续性感染和感染潜伏期抗体尚未产生或不易检测出抗体的情况下,即使有抗体存在也难以判断。而应用核酸探针技术,就可以直接确
DNA提取：为微生物研究扫清障碍
近年来，尽管测序技术在快速发展，但DNA提取方法却鲜有改进。对于宏基因组研究，这是必需的一步。然而，许多微生物无法在实验室中培养，这成为分析大量微生物样品的一个主要瓶颈。参与美国NIH的人类微生物组计划(Human Microbiome Project)以及地球微生物组计划(Earth Mi
单细胞DNA测序揭示微生物“暗物质”
据《自然》杂志网站7月14日(北京时间7月15日)报道，天文学家们认为，宇宙总物质量的23%由弥漫于其间且肉眼看不见的“暗物质”组成;现在，美国科学家进行了微生物“暗物质”研究，他们用单细胞DNA测序技术对多种微生物的基因组进行测序后发现，微生物远比我们所知道的要丰富多样，研究同时揭示了不同物种
土壤微生物总DNA提取及纯化
实验概要从土壤微生物中提取总DNA并纯化，高质量的DNA可用于后续文库构建。主要试剂TENP缓冲液(50 mmol/L Tris, 20 mmol/L EDTA, 100 mmol/L NaCl, 1% PVP, pH 10.0)PBS缓冲液(137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L
微生物DNA进行人体识别引发隐私担忧
研究人员已经发现寄生于人体的微生物的聚集DNA，它又被称为‘gut print’，可以唯一地识别某个人。但这引发了隐私问题。 研究结果于5月11日发表在《美国国家科学院院刊》上，表明它可能识别人体微生物栖息研究方面的匿名参与者。该微生物将会透露个人健康、饮食或种族方面的细节。4月29日发表在
土壤微生物总DNA的提取方法比较
实验概要通过对比不同DNA提取及纯化方法，选择和优化适合于土壤样品不同分子量DNA提取及纯化的技术路线。实验原理土壤是微生物最大的栖息地，20世纪80年代，微生物学家采用免培养(culture-in-dependent)方法，即直接从土壤中提取微生物总DNA的技术，使得在基因水平研究这些未培养微生物
土壤微生物DNA提纯方法及纯度检测
实验概要本实验比较了聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)和交联聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)在DNA提取过程中的纯化作用，并利用低电压长时间电泳法及PVP电泳法对纯化的DNA样品进行了检测。主要试剂DNA提取缓冲液(100 mmol/L Tris, 100 mmol/L EDTA, 100 mmol/L Na3
《自然》展望2016年11大领域－DNA、微生物备受关注
近日，《自然》杂志日前对2016年的热点研究领域进行了展望： 一是二氧化碳的吸收。一家瑞士公司将成为首个从大气中捕获二氧化碳并进行商业规模销售的企业，此举将成为研发有朝一日对抗全球变暖的大型设备的一块敲门砖。明年7月，Climeworks公司将在其位于苏黎世的工厂每月捕获约75吨二氧化碳，然后
微生物所建立无痕迭代DNA组装新方法
DNA组装与DNA合成技术并称为合成生物学的两大基础使能技术。在合成生物学和生物工程领域中，“设计-构建-验证-学习（Design-Build-Test-Learn，DBTL）”的循环工程，精细的遗传元件无缝拼接以及重复DNA序列（如CRISPR和TALEN结合序列）串联分别需要迭代、无痕和序列
火星微生物或隐藏地下与地球生命有相似DNA
据国外媒体报道，自从美国国家航空航天局海盗系列探测器发送回关于火星生命的不确定结果后，此后超过三十年的时间内没有人发现火星上存在生命的迹象。基因研究所的克雷格・文特尔(Craig Venter)博士想要改变这种状况，在上周位于纽约举行的在线会议上，文特尔博士提出了通过向火星发送DNA程序装置
河流水库水体中微生物残体DNA干扰微生物多样性研究新进展
微生物残体DNA广泛存在于陆地和水域生态系统中。从水环境样品中提取的微生物DNA通常来自活体微生物和死亡微生物残体。环境DNA高通量测序技术的应用，显著提高了微生物群落检测的效率和通量，而无法区分微生物细胞的死活状态。因此，基于环境DNA的微生物群落分析会造成一些微生物多样性和群落组成的错误估计
动物、植物、微生物中提取高质量的基因组DNA
概 述 基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出，而小分子DNA则
动物、植物、微生物中提取高质量的基因组DNA
基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出，而小分子DNA则只形成颗粒状沉淀
动物、植物、微生物中提取高质量的基因组DNA（二）
5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。 6. 在1.5ml eppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。 7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用500
动物、植物、微生物中提取高质量的基因组DNA（一）
基因组DNA的提取概 述基因组DNA的提取通常用于构建基因组文库、Southern杂交(包括RFLP)及PCR分离基因等。利用基因组DNA较长的特性,可以将其与细胞器或质粒等小分子DNA分离。加入一定量的异丙醇或乙醇，基因组的大分子DNA即沉淀形成纤维状絮团飘浮其中, 可用玻棒将其取出，而小分子DN
我国研制完成首个亚洲人源和微生物源DNA序列标准物质
6月19日，中国计量科学研究院和深圳华大基因研究院共同发布首个亚洲人源（炎黄一号）DNA序列标准物质（BW-5201）和大肠杆菌O157基因组DNA序列标准物质（BW-5202）。这是全球首次发布亚洲人源DNA和微生物基因组DNA序列标准物质，为基因检测产业评估测序和数据分析
微生物培养基的原理、制作和现象：DNA酶甲基绿琼脂(DTA)
成分 DNA 2.0g 植物蛋白胨 5.0g 胰蛋白胨 15.0g 氯化钠 5.0g 琼脂(1.5%) 15.0g 蒸馏水 1000mL pH7.3 制法 称取各成分后，加
污染水体土著微生物DNA稳定同位素探针和高通量测序技术
当污染环境中的土著微生物缺乏降解能力时，可通过从环境中分离具有较强污染物降解能力的土著微生物，经过扩大培养，再接种到原环境，用以提高污染物降解。这就是所谓土著微生物强化技术，在环境修复方面具有巨大的应用潜力。对土壤多环芳烃（PAHs）的研究表明，土著微生物强化技术能够显著提高PAHs的矿化速率，
我国研制完成首个亚洲人源和微生物源DNA序列标准物质
6月19日，中国计量科学研究院和深圳华大基因研究院共同发布首个亚洲人源（炎黄一号）DNA序列标准物质（BW-5201）和大肠杆菌O157基因组DNA序列标准物质（BW-5202）。这是全球首次发布亚洲人源DNA和微生物基因组DNA序列标准物质，为基因检测产业评估测序和数据分析的准确性提供了参考
漩涡振荡器在土壤微生物中提取总DNA并纯化应用
实验概要从土壤微生物中提取总DNA并纯化，高质量的DNA可用于后续文库构建。主要试剂TENP缓冲液（50 mmol/L Tris, 20 mmol/L EDTA, 100 mmol/L NaCl, 1% PVP, pH 10.0）PBS缓冲液（137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定1
㈣ DNA聚合酶 如前所述，选用合适的DNA聚合酶进行测序反应也是保证测序质量的重要因素之一。常用于双脱氧末端终止法测序的有几种不同的酶： 1．大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow片段） 此酶是最早用于建立Sanger测序的酶。但通常会有两个问题：①Klenow片段的持续合成能力较
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定2
目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法（双脱氧链终止法）和Maxam（1977）提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都同样生成相互独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组核苷酸都有共同的起点，却随机终止于一种（或多种）特定的残基，形成一系列以某一特定核苷酸
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定3
2．利用末端转移酶和α-32P-ddNTP标记DNA的3ˊ-末端 在二价阳离子存在下，末端转移酶催化dNTP加入DNA分子的3ˊ-羟基末端，如果作为底物的核苷酸经过修饰（如ddNTP），则可以在DNA的3ˊ-OH上仅加入一个核苷酸。对于双链DNA片段，亦存在DNA的两侧均被标记问题，可通过上述同
DNA重组技术(DNA－Recombination)
一、DNA 的酶切与连接（1）酶切反应：同质粒DNA 的鉴定，只不过是质粒DNA 换为载体DNA 。若大量酶切，则成比例增加。（2）加2倍体积的预冷无水乙醇和1/10体积的3mol/l NaAc混匀，-20℃2h以上。（3）15000rpm离心15min，弃上清。（4）加入75%乙醇洗涤2次，离心弃
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体3
在作为载体时，这些噬菌体有一个很大的优点，即克隆到M13mp载体的外源DNA片段（双链），在子代噬菌体便成为了单链形式。故应用M13mp进行克隆，可方便地分离到大量含有外源DNA某一单链的DNA分子。这种单链DNA可在下列工作中作模板：①主要用作双脱氧链终止法进行DNA序列测定的模板；②制备仅有一条
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定3
当多克隆位点有外源DNA片段插入时，破坏此酶的N端阅读框架，产生无α互补功能的N端片段，因此在带有外源DNA片段的细菌在含有IPTG/X-gal的培养基上呈白色，见图7-11 。如果外源DNA插入片段相当短，不破坏β-半乳糖苷酶的氨基端氨基酸序列的阅读框，有时产生的重组体菌落不呈白色而是呈浅蓝色。4
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定1
重组DNA是在体外用限制性内切酶，将不同来源的DNA分子进行特异地切割，获得的目的基因或DNA片段与载体重新连接，从而组成一个新的DNA杂合分子。重组的DNA分子能够通过一定的方式进入相应的宿主细胞，在宿主细胞中进行无性增殖，获得大量的目的基因或DNA片段，此过程称基因克隆。重组的DNA分子也能够在
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体2
二、噬菌体载体作为细菌寄生物的噬菌体，大多数具有编码多种蛋白质的基因，能利用宿主细胞的蛋白质合成体系，进行生长和增殖。构建的噬菌体载体，以λ噬菌体、M13和粘粒最为常用。㈠ λ噬菌体载体野生型λDNA是一种基因组为4.8 kb的线性双链DNA，全部序列已知，共编码50多个基因。其中约一半基因参与