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重组蛋白质的表达、纯化、复性和定量按Qiagen公司的操作手册进行，具体步骤如下。一、重组蛋白质的诱导表达1.挑取转化有质粒的单菌落，接种于3ml 选择性LB液体培养基中，37 oC，250 rpm/min振摇培养过夜。2.次日将培养过夜的菌液500 μl再接种于10 ml（1:20）选择性LB液体培养基中，37 oC，250 rpm/min振摇培养至光密度（OD600=0.6）时，取1 ml样本作为诱导前标本，10000g离心1 min收集菌体沉淀，－20 oC冻存备用。3.加入1 mol/L IPTG于菌液中，使IPTG终浓度为1 mM，37 oC，250 rpm/min振摇培养4～5小时。取1 ml样本作为诱导后标本，同上法收集菌体沉淀，－20 oC冻存备用。4.将诱导前后菌体沉淀用20 ~ 40 μl PBS（pH= 8.0）重悬，加入等体积的2×SDS上样缓冲液，煮沸加......阅读全文
关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题，包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈，关于包涵体的处理一般包括这么几步：菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化，内容比较庞杂 一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌？ 细胞的破碎方法 1.高速组织捣碎
关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题，包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈，关于包涵体的处理一般包括这么几步：菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化，内容比较庞杂 一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌？ 细胞的破碎方法 1.高速组织捣碎：将材料配成稀糊状液，放
随着PCR技术的不断发展成熟（扩增长度、保证性、产量和特异性等），质粒构建过程的大多数细胞内的DNA复制将被PCR这一细胞外的DNA复制所代替，质粒构建效率将有质的飞跃。4.4密码子的偏好性的原则酵母菌对外源基因的表达也和外源基因密码子的选用有关。了解表达系统宿主在密码子使用上的偏爱性对从翻译水平分
现代分子生物学和免疫学的进展加深了我们对许多疾病的了解，并且导致了免疫新策略的产生，免疫学检测方法可分为体液免疫和细胞免疫测定。本文盘点了与免疫学有关的分子生物学实验技术汇总。 一、GST pull-down实验 GST是指谷胱甘肽巯基转移酶，GST pull-down实验是一个行之有效的验
1、质粒DNA提取 提取质粒的时候，最后一步的酒精挥发很关键，基本上是其后续的酶切反应的决定性因素。所以这一步尽量挥发长一点时间，最好是空调吹热风，或是37度温箱放长一点的时间，我试过室温过夜，酶切很好。 将amp浓度提高到200ug/ml，下班前接种，次日一早收获菌体，此时OD虽然不高，质
实验室里经常听到这样的抱怨：实验没做好，实验没结果，心情郁闷。但其实静下心来查找原因，往往是由于操作上面的不认真，或是一些小小的细节没有注意到，以下是10个实验室日常小技巧。 主题： 关于质粒提取的小技巧 内容： 现在用质粒提取试剂盒非常方便，而且菌体培
RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单
生物谷： RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。 要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。 3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存
生物谷： RT-PCR实验有三步：抽提RNA，RT，PCR。要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变
每一个领域的发展都是基于技术的进步和革新，蛋白质组学亦然。蛋白质的可变性和多样性等特殊性质导致了蛋白质研究技术远远比核酸技术要复杂和困难得多，但正是这些特性参与和影响着整个生命过程。在开始实验之前，先看看这篇技术简介吧。一 蛋白质与DNA相互作用在许多的细胞生命活动中，例如DNA复制、mR
核酸分子杂交技术由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的
DNA重组技术（或基因工程）是20世纪生物学的伟大成就，并已渗透到生命科学包括医学 各个领域，为肿瘤的实验研究和临床诊断及治疗提供了崭新的技术和有用的工具。本附录扼要介绍在分子肿瘤学领域中常用的分子生物学基本技术及其在肿瘤研究中的应用，着重介绍它们的原理和应用。至于具体的技术方法和操作步骤可参阅《分
PCR反应的准备PCR反应体系10×扩增缓冲液10μl4种dNTP混合物（终浓度）各100～250μmol/L引物（终浓度）各5～20μmol/L模板DNA0.1～2μgTaq DNA聚合酶5～10 UMg2+（终浓度）1～3mmol/L补加双蒸水100 μl其中dNTP、引物、模板DNA、Taq