TNF的生物活性测定

1. 材料和试剂1.1培养液A :DMEM培养液添加10%的胎牛血清(FBS)。1.2培养液B:DMEM培养液添加10%的胎牛血清(FBS)和终浓度为0.7--1μg/ml的放线菌素D。1.3 L929细胞株:鼠结缔组织纤维母细胞,来源于22天雄性C3H鼠皮下组织。1.4 结晶紫染色溶液:0。05%结晶紫 (50mg结晶紫加入20ml乙醇,加蒸馏水定容至100ml),蒸馏水稀释。1.5 脱色液:(1)乙二醇独甲醚50%,蒸馏水稀释。(2)乙醇50%,乙酸0.01%(V/V),蒸馏水稀释。1.6 胰酶:消化贴壁L929细胞。1.7 半效稀释度TNF标准品:1000IU/ml。2. 实验用具超净工作台,细胞培养烘箱,酒精灯,显微镜,细胞计数器,微量移液器,细胞培养板,细胞稀释槽,酶标仪。3. 操作步骤3.1样板:弃L929细胞培养瓶中的培养液,加入800—900μl胰酶消化细胞,细胞收缩后,弃胰酶......阅读全文

TNF的生物活性测定

1. 材料和试剂1.1培养液A :DMEM培养液添加10%的胎牛血清(FBS)。1.2培养液B:DMEM培养液添加10%的胎牛血清(FBS)和终浓度为0.7--1μg/ml的放线菌素D。1.3 L929细胞株:鼠结缔组织纤维母细胞,来源于22天雄性C3H鼠皮下组织。1.4 结晶紫染色溶液:0。05%

TNF的生物活性测定

1.  材料和试剂1.1培养液A :DMEM培养液添加10%的胎牛血清(FBS)。1.2培养液B:DMEM培养液添加10%的胎牛血清(FBS)和终浓度为0.7--1μg/ml的放线菌素D。1.3  L929细胞株:鼠结缔组织纤维母细胞,来源于22天雄性C3H鼠皮下组织。1.4  结晶紫染色溶液:0。

TNFα生物学活性检测方法

光密度法 实验材料 小鼠L929细胞 试剂、试剂盒 TNF标准品

TNFα生物学活性检测方法

基本原理TNF的生物学活性之一是能直接杀伤肿瘤细胞。TNF与相应受体结合后向细胞内移,被靶细胞溶酶体摄取导致溶酶体稳定性降低,各种酶外泄,引起细胞溶解。肿瘤细胞株对TNF-α的敏感性有很大的差异,用放线菌素D、丝裂酶素C、放线菌酮等处理肿瘤细胞,可明显增强TNF-α杀伤肿瘤细胞活性。材料和试剂1,完

结晶紫法对TNF生物活性的检测

实验概要TNF包括TNFα与TNFß两型,它们具有极其相似的生物学活性,在体内外可对一些肿瘤细胞或细胞系起杀伤作用,而对正常细胞则无细胞毒效应。根据这一特点,可利用TNF对敏感靶细胞的细胞毒效应,在体外检测TNF的活性水平,既可检测分泌型TNF(sTNF),也可检测膜结合型TNF(mTNF)。最常用

应用MTT比色法检测TNF的生物活性

实验概要TNF包括TNFα与TNFß两型,它们具有极其相似的生物学活性,在体内外可对一些肿瘤细胞或细胞系起杀伤作用,而对正常细胞则无细胞毒效应。根据这一特点,可利用TNF对敏感靶细胞的细胞毒效应,在体外检测TNF的活性水平,既可检测分泌型TNF(sTNF),也可检测膜结合型TNF(mTNF)。最常用

TNFα生物学活性检测方法——光密度法

TNF的生物学活性之一是能直接杀伤肿瘤细胞。TNF与相应受体结合后向细胞内移,被靶细胞溶酶体摄取导致溶酶体稳定性降低,各种酶外泄,引起细胞溶解。肿瘤细胞株对TNF-α的敏感性有很大的差异,用放线菌素D、丝裂酶素C、放线菌酮等处理肿瘤细胞,可明显增强TNF-α杀伤肿瘤细胞活性。实验材料小鼠L929细胞

蛋白的生物活性测定方法

结晶紫法活性测定1、取对数生长期的人胰腺癌SW1990细胞,用0.25%胰酶(以无钙镁离子PBS溶液配制,pH7.4)消化后,加入RPMI-1640培养基(10%新生牛血清,100U/ml青霉素,100U/ml链霉素,pH7.2)吹打细胞,使形成细胞悬液。进行细胞计数,使细胞数为2~2.5x105个

生物学活性测定方法

用于细胞因子生物学活性测定,对细胞因子前体或其降解产物与可溶性受体结合的细胞因子、细胞因子聚合物等,均不能用此法检测。细胞因子受体拮抗物、细胞因子的天然抗体和类细胞因子等,也将干扰细胞因子活性的测定。细胞因子生物学活性测定法主要具有以下特点:①操作繁琐;②易受干扰;③敏感性较高;④特异性不高。

原位杂交法测定TNF的mRNA

实验概要本实验用原位杂交法测定了TNF的mRNA。主要试剂1. 原位杂交   1) TNF-DNA探针   2) 地高辛标记液试剂盒   3) 杂交液:60%去离子甲酰胺,300mmol/L NaCl、30mmol/L柠檬酸钠、10mmol/L EDTA 25mmol/L NaH2PO4(pH7.4

中药生物活性测定的基本原则

  符合药理学研究基本原则  建立的生物活性测定方法应符合药理学研究的随机、对照、重复的基本原则;具备简单、精确的特点;应有明确的判断标准。  体现中医药特点  鼓励应用生物活性测定方法探索中药质量控制,拟建立的方法的测定指标应与该中药的“功能与主治”相关。  品种选择合理  拟开展生物活性测定研究

新生物学活性测定方法介绍

近年来,抗体药物的接连上市和重磅销售引发国内外抗体类生物治疗药物的研发热潮。活性测定是对药物的有效成分和含量以及药物效价的测定,是确保抗体类药物有效性的重要质控指标。现阶段抗体药物的活性分析方法主要是体外( in vitro) 检测,主要有基于细胞、转基因细胞以及新技术应用三方面对抗体药物活性测定的

生物学活性测定方法学评价

用于细胞因子生物学活性测定,对细胞因子前体或其降解产物与可溶性受体结合的细胞因子、细胞因子聚合物等,均不能用此法检测。细胞因子受体拮抗物、细胞因子的天然抗体和类细胞因子等,也将干扰细胞因子活性的测定。细胞因子生物学活性测定法主要具有以下特点:①操作繁琐;②易受干扰;③敏感性较高;④特异性不高。

生物活性测定法的基本原理

生物活性测定法是以药物的生物效应为基础,以生物统计为工具,运用特定的实验设计,测定药物有效性的一种方法,从而达到控制药品质量的作用。其测定方法包括生物效价测定法和生物活性限值测定法。

中药生物活性测定法的​基本内容

1.实验条件  试验系选择  生物活性测定所用的试验系,包括整体动物、离体器官、血清、微生物、组织、细胞、亚细胞器、受体、离子通道和酶等。试验系的选择与实验原理和制定指标密切相关,应选择背景资料清楚、影响因素少、检测指标灵敏和成本低廉的试验系统。应尽可能研究各种因素对试验系的影响,采取必要的措施对影

9105-中药生物活性测定指导原则标准草案

  日前,药典委关于9105 中药生物活性测定指导原则标准草案的公示。  我委拟修订9105 中药生物活性测定指导原则。为确保标准的科学性、合理性和适用性,现将拟修订的9105 中药生物活性测定指导原则公示征求社会各界意见(详见附件)。公示期自发布之日起两个月。请认真研核,若有异议,请及时在线反馈,

新药活性一测便知新生物学活性测定方法介绍

  近年来,抗体药物的接连上市和重磅销售引发国内外抗体类生物治疗药物的研发热潮。活性测定是对药物的有效成分和含量以及药物效价的测定,是确保抗体类药物有效性的重要质控指标。现阶段抗体药物的活性分析方法主要是体外( in vitro) 检测,主要有基于细胞、转基因细胞以及新技术应用三方面对抗体药物活性测

抗体的生物活性

抗体的生物学活性体现在:(1)特异性结合抗原:抗体本身不能直接溶解或杀伤带有特异抗原的靶细胞,通常需要补体或吞噬细胞等共同发挥效应以清除病原微生物或导致病理损伤。然而,抗体可通过与病毒或毒素的特异性结合,直接发挥中和病毒的作用。(2)激活补体:IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通过经典途径激活补

糖脂的生物活性

生物活性甘油糖脂具有抗氧化、抗病毒、抗菌、抗肿瘤、抗炎、抗动脉粥样硬化等多种生物活性,存在于动物的神经组织、植物和微生物中 。(1)抗氧化活性实验发现甘油糖脂M874B还能够保护由于加热和外部的H2O2所引起的细胞死亡,能够消除由H2O2释放的羟基自由基,这说明MGDG(如M874B)是一种新型的氧

转氨酶活性的测定

(一)原理转氨酶是体内重要的一类酶。转氨酶催化α–氨基酸的α–氨基与α–酮酸的α–酮基之间的相互转化,从而生成一种新的氨基酸与一种新的酮酸,这种作用称为转氨基作用。它在生物体内蛋白质的合成、分解等中间代谢过程中,在糖、脂及蛋白质三大物质代谢的相互联系、相互制约及相互转变上都起着很重要的作用。在动物机

转氨酶活性的测定

实验概要本实验介绍了转氨酶活性测定的原理及方法等。实验原理转氨酶是体内重要的一类酶。转氨酶催化α–氨基酸的α–氨基与α–酮酸的α–酮基之间的相互转化,从而生成一种新的氨基酸与一种新的酮酸,这种作用称为转氨基作用。它在生物体内蛋白质的合成、分解等中间代谢过程中,在糖、脂及蛋白质三大物质代谢的相互联系、

生物活性测定方法设计、建立及验证指导原则

  近日,国家药典委发布“关于生物活性测定方法设计、建立及验证指导原则标准草案的公示”的通知。  生物活性测定方法设计、建立及验证指导原则草案分为 6 个板块,分别为:1.分析目标概况;2.生物活性测定方法的设计;3. 生物活性测定方法的建立;4. 生物活性测定方法的验证;5.生物活性测定方法的持续

细胞活性测定

1. 4细胞活性测定原理:根据活细胞线粒体内的脱氢酶可将试剂中的有效成分转变为有颜色的Formazan,并可被酶标仪检测,间接反应活细胞数量。对于细胞增殖、凋亡、生长受抑等可通过细胞数量间接得知的生物学改变,采用细胞活性测定可以提供可应用和参考的数据。应用:用于生物活性因子的活性检测、大规模药物筛选

PPO活性测定

一、原理与方法PPO催化各种酚与O2氧化为醌。本实验是采用邻苯二酚为底物,在0.2M磷酸氢二钠-0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8的反应体系中,PPO催化邻苯二酚形成褐色的醌,在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化,通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。其方法是:在含有4mlPH5.

PPO活性测定

一、原理与方法PPO催化各种酚与O2氧化为醌。本实验是采用邻苯二酚为底物,在0.2M磷酸氢二钠-0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8的反应体系中,PPO催化邻苯二酚形成褐色的醌,在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化,通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。其方法是:在含有4mlPH5.

PPO活性测定

分光光度法             实验方法原理 PPO催化各种酚与O2氧化为醌。本实验是采用邻苯二酚为底物,在0.2M磷酸氢二钠-0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8的反应体系中,PPO

PPO活性测定

一、原理与方法PPO催化各种酚与O2氧化为醌。本实验是采用邻苯二酚为底物,在0.2M磷酸氢二钠-0.1M柠檬酸缓冲液PH5.8的反应体系中,PPO催化邻苯二酚形成褐色的醌,在分光光度计410nm处使反应体系的OD值产生变化,通过OD值上升的读数变化确定PPO的酶活大小。其方法是:在含有4mlPH5.

细胞因子生物学活性测定法的特点

  ①敏感性较高;  ②特异性不高;  ③操作繁琐;  ④易受干扰。

细胞因子生物学活性测定法的特点

  细胞因子生物学活性测定法主要具有以下特点:  ①敏感性较高;  ②特异性不高;  ③操作繁琐;  ④易受干扰。

蛋白的生物活性测定方法(结晶紫法和MTT法)

结晶紫法活性测定1、取对数生长期的人胰腺癌SW1990细胞,用0.25%胰酶(以无钙镁离子PBS溶液配制,pH7.4)消化后,加入RPMI-1640培养基(10%新生牛血清,100U/ml青霉素,100U/ml链霉素,pH7.2)吹打细胞,使形成细胞悬液。进行细胞计数,使细胞数为2~2.5×105个