细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法：细胞的制备
CMC中效应细胞的制备1）用淋巴细胞分离液分离PBMC1．抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸盐（PBS）悬浮细胞。将此悬液小心加在淋巴细胞分离液上，400×g离心30分钟。2．离心后红细胞在管底，PBMC在血浆和淋巴细胞分离液的交界面。收集PBMC，用PBS洗涤细胞两次，每次离心150×g 10分钟。低速离心可以减少血小板沉淀，但细胞沉淀物较松散，去上清液时注意丢弃细胞。3．将细胞悬浮于含2％～5％人AB血清的RPMI-1640培养液中，计数细胞，用1％台盼蓝染色检测细胞活力（应>90%），再用同样培养液将细胞配成1×106～2×106/ml。 2）分离大颗粒淋巴细胞1．配制不连续Percoll梯度：取Percoll原液与10倍浓缩的PBS以9：1的比例混合，此时溶液为100％ Percoll，比重是1.127，毫克分子渗透压浓度为290mOsmol/kg。将100％ Percol......阅读全文
细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法：细胞的制备
CMC中效应细胞的制备1）用淋巴细胞分离液分离PBMC1．抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸盐（PBS）悬浮细胞。将此悬液小心加在淋巴细胞分离液上，400×g离心30分钟。2．离心后红细胞在管底，PBMC在血浆和淋巴细胞分离液的交界面。收集PBMC，用PBS洗涤细胞两次，每次离心150×
细胞介导细胞毒作用检测法6：荧光法检测CMC
荧光法检测CMC1．用含10％小牛血清和抗生素的RPMI-1640培养液将K562细胞配成1×105/ml浓度。用同样培养液将PBMC配成1×106/ml浓度。2．取96孔圆底细胞培养板，每孔加0.1ml K562细胞悬液；每孔加适量PBMC使效靶比为1：1～5：1，每种处理3个复孔；3个对照孔只加
细胞介导细胞毒作用检测法7：单细胞CMC试验
单细胞CMC试验1．用细胞培养液等量混合效应细胞和靶细胞，30℃水浴10分钟。室温中250×g离心5分钟，去上清液。同量靶细胞不加效应细胞同样处理作为对照。2．用少量细胞培养液轻轻悬浮细胞，吸管上下吹打5～6次。这一分散细胞的步骤关系到试验的准确性和重复性，应当设法保持技术的一致性。取少许细胞悬液，
细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法：效应细胞和靶...
细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法：效应细胞和靶细胞的制备CMC中效应细胞的制备：1）用淋巴细胞分离液分离PBMC：1、抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸盐（PBS）悬浮细胞。将此悬液小心加在淋巴细胞分离液上，400×g离心30分钟。2、离心后红细胞在管底，PBMC在血浆和淋巴细胞分离
细胞介导细胞毒作用检测法5：用MTT检测法测定CMC
用MTT检测法测定CMC1． Fen细胞培养于含10％小牛血清的RPMI-1640培养液中，在625px2培养瓶中生长到接近汇合。用含0.05％胰蛋白酶，0.02％ EDTA的PBS消化细胞5分钟，洗涤后，用细胞培养液将细胞配成1×105/ml。2． 取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml细胞悬液，在
细胞介导细胞毒作用检测法1：Cr释放法
4小时51Cr释放法检测CMC活性1）用51Cr铬酸钠标记靶细胞短期标记法1．用RPMI-1640培养液洗涤107靶细胞，去上清液。用0.5ml不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。加入100μCi（3.7MBq）51Cr铬酸钠，37℃水浴中标记1小时，每5～10分钟摇晃一次，混匀细胞。2．如上用RPM
细胞介导细胞毒作用检测法3：LDH释放法
LDH释放法1）测定方法1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞调整到5×104～2×105/ml，此浓度需根据情况预先标定。2．在96孔圆底细胞培养板中加入靶细胞，每孔加100μl。3个效应细胞自然释放对照孔不加靶细胞，只加100μl培养液。3．向各孔加100μl效应细胞，效应细胞与
细胞介导细胞毒作用检测法：时间分辩荧光分析法
1）铕荧光检测法：标记靶细胞：1、EuCl3的制备：称取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl搅拌至溶解，再用1N NaOH调节pH至4.0。加双蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存备用。2、用预冷的标记液将靶细胞浓度调整到5×106/ml，加50μl 10mg/ml硫酸葡聚糖
细胞介导细胞毒作用检测法4：时间分辩荧光分析法
时间分辩荧光分析法1）铕荧光检测法标记靶细胞1．EuCl3的制备：称取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl搅拌至溶解，再用1N NaOH调节pH至4.0。加双蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存备用。2．用预冷的标记液将靶细胞浓度调整到5×106/ml，加50μl 10mg/
补体介导的细胞毒实验——补体介导法
细胞毒实验可应用于：（1）检查细胞膜抗原；（2）鉴定抗体的特异性。实验方法原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死
抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用
ADCC是一种细胞毒反应，指表达FcR的具有杀伤活性细胞（如NK,单核巨噬）通过识别Ab的Fc段直接杀伤被抗体包被的靶细胞。
细胞介导细胞毒作用检测法2：[3H]脱氧胸苷释放法
[3H]脱氧胸苷释放法1）标记靶细胞1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞配成2×106/ml，取10μCi（370kBq）[3H]TdR加到1ml靶细胞中，37℃水浴标记4～6小时，每30分钟摇晃一次。2．用RPMI-1640培养液洗涤细胞3次，每次400×g 10分钟。用含5％小
关于免疫细胞的功能检测—细胞介导的细胞毒试验的介绍
一种细胞通过直接接触将另一种细胞杀伤的现象，称为细胞介导的细胞毒作用。在人体内有两种能直接杀伤靶细胞的细胞，即自然杀伤细胞(NK细胞)和特异性杀伤T细胞(特异性Tc细胞)。NK细胞存在于未受抗原刺激的正常人体，对某些受感染的细胞、肿瘤细胞或正常的未成熟造血细胞有杀伤活性。特异性Tc细胞存在于受过
补体介导的细胞毒实验
实验方法原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞
补体介导的细胞毒试验
一、实验原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞
补体介导的细胞毒实验
实验方法原理 带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或
补体介导的细胞毒试验
【原理】 补体介导的细胞毒试验（complement dependent cytotoxicity test）的原理是特异性抗体与细胞膜上相应抗原结合后，在补体的参与下，可产生细胞膜损伤，细胞死亡；不带相应抗原的细胞仍然存活。利用染料排斥实验判定淋巴细胞死活状态，活细胞不着色，具有折光性，
补体介导的细胞毒实验
实验方法原理 带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或
补体介导的细胞毒实验
实验方法原理 带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细
补体介导的细胞毒试验
1、实验原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞
细胞技术专题：补体介导的细胞毒试验
1、实验原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞
抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用是什么意思？
抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用是指表达IgGFc受体的NK细胞、巨噬细胞和中性粒细胞等，通过与已结合在病毒感染细胞和肿瘤细胞等靶细胞表面的IgG抗体的Fc段结合，而杀伤这些靶细胞的作用。
细胞毒性T细胞的作用机制
当细胞毒性T细胞遇到受感染或是不健康的体细胞，细胞毒性T细胞会释放出细胞毒素，如穿孔素、颗粒酶，以及颗粒溶解素。这些酵素会进入目标细胞的细胞质，并使细胞内的丝氨酸蛋白酶诱发胱天蛋白酶的级联反应，这个反应会使一连串的胱胺酸蛋白酶活化，引发细胞凋亡。另外一种诱发细胞凋亡的途径是借由细胞表面受体的结合。细
细胞毒性T淋巴细胞的作用机理
一、杀伤靶细胞的过程CTL杀伤靶细胞是一个连续过程，可分为三个阶段，主要研究内容如下：1、效应靶细胞结合：CTL是通过其膜上的受体TCR，即Ti-CD3分子与靶细胞结合，此时膜上的淋巴细胞功能相关抗原Ⅰ与靶细胞膜上的配基Ⅰ，又称细胞内粘附分子相互作用，即靶细胞与效应细胞初步接触。此时亲和力低，为非特
细胞毒性T淋巴细胞的作用机理
一、杀伤靶细胞的过程CTL杀伤靶细胞是一个连续过程，可分为三个阶段，主要研究内容如下：1、效应靶细胞结合：CTL是通过其膜上的受体TCR，即Ti-CD3分子与靶细胞结合，此时膜上的淋巴细胞功能相关抗原Ⅰ与靶细胞膜上的配基Ⅰ，又称细胞内粘附分子相互作用，即靶细胞与效应细胞初步接触。此时亲和力低，为非特
什么是细胞毒作用
细胞毒性是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件，不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。有时需要进行特定物质细胞毒性的检测，比如药物筛选。细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测，常用以下几种方法：MTT、XTT法：利用线粒体内部酶的活性，可以将特定的四唑盐类进行转化，然后通过酶标仪进
什么是细胞毒作用
细胞毒性是由细胞或者化学物质引起的单纯的细胞杀伤事件，不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。有时需要进行特定物质细胞毒性的检测，比如药物筛选。细胞毒性检测主要是根据细胞膜通透性发生改变来进行的检测，常用以下几种方法：MTT、XTT法：利用线粒体内部酶的活性，可以将特定的四唑盐类进行转化，然后通过酶标仪进
NK细胞介导的细胞溶解作用的研究
前言自然杀伤细胞(Nature Killer Cells, NK)是骨髓衍化的淋巴细胞，其最初通过巨大的颗粒性状被识别。NK细胞能自发杀灭多种肿瘤细胞，同时还可保护正常的细胞，从而被认为是癌症的克星。最重要的是，不管是在胞内还是胞外，NK细胞不需要免疫接种或提前激活，就能够自发溶解特定的肿瘤靶细胞，
简述防御素的细胞毒作用
防御素对正常和恶性哺乳动物细胞都表现出非特异性的细胞毒作用，并且对人淋巴细胞及实体瘤细胞的细胞毒作用更为显著，尤其对抗 TNF 的 U9TR 细胞、抗NK细胞细胞毒因子的小鼠淋巴瘤 YAC-1 细胞和人组织细胞淋巴瘤 U937 细胞具有杀伤性。在体外，HNP可抑制烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADPH
细胞毒性T细胞的细胞试验
该试验测定被特定抗原攻击后抗原特异性CD8+T淋巴细胞的裂解或者引起的炎症反应。用细胞毒性T淋巴细胞（CTL）测试细胞介导免疫需要成功的抗原呈递，以及随之产生的细胞因子、细胞接触依赖的信号转导来产生记忆T淋巴细胞，这是T细胞应答的基础。CTL试验曾用于小鼠和大鼠，也用于大型动物模型，但标准的临床