细胞介导细胞毒作用检测法3：LDH释放法
LDH释放法1）测定方法1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞调整到5×104～2×105/ml，此浓度需根据情况预先标定。2．在96孔圆底细胞培养板中加入靶细胞，每孔加100μl。3个效应细胞自然释放对照孔不加靶细胞，只加100μl培养液。3．向各孔加100μl效应细胞，效应细胞与靶细胞的比例根据要求而定，通常为5：1～20：1。自然释放孔不加效应细胞只加100μl培养液，最大释放孔中加100μl 1％ NP40。每个实验置三个复孔。4．置37℃ 5％ CO2的二氧化碳培养箱中培养4～6小时。5．离心培养板200×g 10分钟。每孔吸出150μl上清液，对应加入另一块96孔酶联检测板中。向第二块板每孔依次加20μl 0.4mol/L乳酸溶液、20μl 4mmol/L 2-p-碘苯酯-3-p-氯化硝基苯四唑，20μl反应液（含0.03％ BSA，2.7U/ml硫辛酰胺脱氢酶......阅读全文
细胞介导细胞毒作用检测法3：LDH释放法
LDH释放法1）测定方法1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞调整到5×104～2×105/ml，此浓度需根据情况预先标定。2．在96孔圆底细胞培养板中加入靶细胞，每孔加100μl。3个效应细胞自然释放对照孔不加靶细胞，只加100μl培养液。3．向各孔加100μl效应细胞，效应细胞与
细胞介导细胞毒作用检测法1：Cr释放法
4小时51Cr释放法检测CMC活性1）用51Cr铬酸钠标记靶细胞短期标记法1．用RPMI-1640培养液洗涤107靶细胞，去上清液。用0.5ml不含碳酸氢钠的完全培养液悬浮细胞。加入100μCi（3.7MBq）51Cr铬酸钠，37℃水浴中标记1小时，每5～10分钟摇晃一次，混匀细胞。2．如上用RPM
细胞介导细胞毒作用检测法2：[3H]脱氧胸苷释放法
[3H]脱氧胸苷释放法1）标记靶细胞1．用含5％小牛血清的RPMI-1640培养液将靶细胞配成2×106/ml，取10μCi（370kBq）[3H]TdR加到1ml靶细胞中，37℃水浴标记4～6小时，每30分钟摇晃一次。2．用RPMI-1640培养液洗涤细胞3次，每次400×g 10分钟。用含5％小
细胞介导细胞毒作用检测法6：荧光法检测CMC
荧光法检测CMC1．用含10％小牛血清和抗生素的RPMI-1640培养液将K562细胞配成1×105/ml浓度。用同样培养液将PBMC配成1×106/ml浓度。2．取96孔圆底细胞培养板，每孔加0.1ml K562细胞悬液；每孔加适量PBMC使效靶比为1：1～5：1，每种处理3个复孔；3个对照孔只加
细胞介导细胞毒作用检测法：时间分辩荧光分析法
1）铕荧光检测法：标记靶细胞：1、EuCl3的制备：称取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl搅拌至溶解，再用1N NaOH调节pH至4.0。加双蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存备用。2、用预冷的标记液将靶细胞浓度调整到5×106/ml，加50μl 10mg/ml硫酸葡聚糖
细胞介导细胞毒作用检测法4：时间分辩荧光分析法
时间分辩荧光分析法1）铕荧光检测法标记靶细胞1．EuCl3的制备：称取58.08mg Eu2O3，用少量1N HCl搅拌至溶解，再用1N NaOH调节pH至4.0。加双蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存备用。2．用预冷的标记液将靶细胞浓度调整到5×106/ml，加50μl 10mg/
细胞介导细胞毒作用检测法7：单细胞CMC试验
单细胞CMC试验1．用细胞培养液等量混合效应细胞和靶细胞，30℃水浴10分钟。室温中250×g离心5分钟，去上清液。同量靶细胞不加效应细胞同样处理作为对照。2．用少量细胞培养液轻轻悬浮细胞，吸管上下吹打5～6次。这一分散细胞的步骤关系到试验的准确性和重复性，应当设法保持技术的一致性。取少许细胞悬液，
细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法：细胞的制备
CMC中效应细胞的制备1）用淋巴细胞分离液分离PBMC1．抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸盐（PBS）悬浮细胞。将此悬液小心加在淋巴细胞分离液上，400×g离心30分钟。2．离心后红细胞在管底，PBMC在血浆和淋巴细胞分离液的交界面。收集PBMC，用PBS洗涤细胞两次，每次离心150×
细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法：效应细胞和靶...
细胞介导的细胞毒作用（CMC）检测法：效应细胞和靶细胞的制备CMC中效应细胞的制备：1）用淋巴细胞分离液分离PBMC：1、抽取正常人静脉血加到肝素抗凝管中，加2倍量磷酸盐（PBS）悬浮细胞。将此悬液小心加在淋巴细胞分离液上，400×g离心30分钟。2、离心后红细胞在管底，PBMC在血浆和淋巴细胞分离
细胞介导细胞毒作用检测法5：用MTT检测法测定CMC
用MTT检测法测定CMC1． Fen细胞培养于含10％小牛血清的RPMI-1640培养液中，在625px2培养瓶中生长到接近汇合。用含0.05％胰蛋白酶，0.02％ EDTA的PBS消化细胞5分钟，洗涤后，用细胞培养液将细胞配成1×105/ml。2． 取96孔细胞培养板，每孔加0.1ml细胞悬液，在
补体介导的细胞毒实验——补体介导法
细胞毒实验可应用于：（1）检查细胞膜抗原；（2）鉴定抗体的特异性。实验方法原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理 乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下，不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时，细胞膜通透性改变，LDH可释放至介质中，释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中，使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I (NADH2），后者再通过递氢体-吩嗪
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下，不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时，细胞膜通透性改变，LDH可释放至介质中，释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中，使氧化型辅酶I(NAD+)变成还原型辅酶I (NADH2），后者再通过递氢体-吩嗪二甲酯硫酸
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理 乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下，不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时，细胞膜通透性改变，LDH可释放至介质中，释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中，使氧化型辅酶I(NAD+)变成
乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞活性实验
实验方法原理 乳酸脱氢酶(LDH)是活细胞胞浆内含酶之一。在正常情况下，不能透过细胞膜。当靶细胞受到效应细胞的攻击而损伤时，细胞膜通透性改变，LDH可释放至介质中，释放出来的LDH在催化乳酸生成丙酮酸的过程中，使氧化型辅酶I(NAD+)变成
NK细胞活性测定：LDH法
实验概要活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下，LDH不能透过细胞膜，当细胞受到NK细胞的杀伤后，LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢，进而使NAD还原成NADH，后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）还原碘硝基氯化四氮唑（INT），INT 接受H＋被还原成紫红色甲月赞类化合物。在酶标仪上
靶细胞杀伤实验：LDH法
一、效应细胞的制备 激惹5天后，于无菌条件下取出受鼠引流的腹股沟淋巴结，100目钢网研磨，调整细胞浓度为2×107.ml-1。台盼蓝色要求存活率>95%。 二、靶细胞的制备 P815细胞株系DBA/2小鼠的肥大细胞瘤细胞株。连续传代培养，调整细胞浓度为2×105/ml或3.33×1
NK细胞活性测定：LDH法
实验方法原理活细胞的胞浆内含有LDH。正常情况下，LDH不能透过细胞膜，当细胞受到NK细胞的杀伤后，LDH释放到细胞外。LDH 可使乳酸锂脱氢，进而使NAD还原成NADH，后者再经递氢体吩嗪二甲酯硫酸盐（PMS）还原碘硝基氯化四氮唑（INT），INT 接受H＋被还原成紫红色甲月赞类化合物。在酶标仪上
抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用
ADCC是一种细胞毒反应，指表达FcR的具有杀伤活性细胞（如NK,单核巨噬）通过识别Ab的Fc段直接杀伤被抗体包被的靶细胞。
NK细胞活性检测实验步骤
细胞毒检测技术包括补体依赖细胞毒试验、NK细胞介导的细胞毒试验和特异性CTL活性检测，常用的实验技术有后两种。NK细胞（natural killer cell）是在天然免疫系统发挥主要作用的效应细胞，可直接杀伤病毒感染的靶细胞和某些肿瘤细胞。而细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymp
细胞生长检测3：XTT检测法
XTT检测法用XTT代替MTT可省去溶解还原产物结晶的步骤，XTT可以被活细胞中的代谢酶还原成黄色水溶性的代谢产物（formazan）。代谢产物在OD450处有吸收峰。
H33342释放法检测单核巨噬细胞的胞毒作用
实验概要本实验利用H33342释放法检测了单核-巨噬细胞的胞毒作用。H33342(Hoechst33342)为DNA的特异性荧光染料，可用其标记肿瘤细胞以检测单核细胞对肿瘤细胞的杀伤效应。被损伤的靶细胞DNA断裂后，H33342释放到上清液中，采用微量荧光仪可定量测定上清液中的荧光强度。效应细胞的杀
大鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA检测法
大鼠乳酸脱氢酶(LDH)ELISA试剂盒 (用于血清、血浆、细胞培养上清液和其它生物体液内) 原理本实验采用双抗体夹心 ABC-ELISA法。用抗大鼠 LDH 单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的 LDH与单抗结合，加入生物素化的抗大鼠LDH，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的Strep
DELFIA经典技术应用于单抗研发及细胞治疗（一）
ADCC简介 Fc区域主要介导以下三类活动： 1. 通过结合表达在Natural killer (NK)等免疫细胞表面上的FcγR（Fcγ receptors）激活抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用（Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity，ADCC
补体介导的细胞毒实验
实验方法原理 带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或
补体介导的细胞毒试验
1、实验原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞
补体介导的细胞毒试验
一、实验原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞
补体介导的细胞毒试验
【原理】 补体介导的细胞毒试验（complement dependent cytotoxicity test）的原理是特异性抗体与细胞膜上相应抗原结合后，在补体的参与下，可产生细胞膜损伤，细胞死亡；不带相应抗原的细胞仍然存活。利用染料排斥实验判定淋巴细胞死活状态，活细胞不着色，具有折光性，
补体介导的细胞毒实验
实验方法原理带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细胞
补体介导的细胞毒实验
实验方法原理 带有特异抗原的靶细胞（如正常细胞、肿瘤细胞、病毒感染细胞）与相应抗体结合后，在补体的参与下，引起靶细胞膜损伤，导致细胞膜的通透性增加、细胞死亡。染料（例如：伊红-Y、台盼蓝）可通过细胞膜进入细胞内使细胞着色，故可用于指示死细胞或濒死细胞，而活细胞不着色。此即补体依赖性细胞毒试验，利用细