细胞生物基本方法：肌组织细胞培养
肌组织细胞培养1）骨骼肌细胞培养1．杀死动物，无菌取大腿肌组织，切成0.3～0.5厘米小块。2．用不含钙镁离子的Hanks液配的0.25％胰蛋白酶消化，无菌纱网或纱布滤过，合成培养基加10％小牛血清培养，为促进分化可加1％的胎汁。3．细胞接种量为2×106/皿，接种在胶原或明胶的底物上能促进细胞分化。明胶制备比较简单，常用Hanks液配的0.01％明胶。 2） 肌细胞培养1．选新鲜受精鸡卵，置温箱中孵育（温箱中放有水槽，以维持箱内温度），每日翻动一次（180度），孵育9～12天。2．取鸡胎法相间《组织培养和分子细胞学技术》53页。3．用眼科剪剪开胸腔，剥出心脏，置入皿中用Hanks液漂洗1～2次。4．小心剪除大的动静脉，保留心室肌，用组织块或消化培养法均可。......阅读全文
细胞生物基本方法：肌组织细胞培养
肌组织细胞培养1）骨骼肌细胞培养1．杀死动物，无菌取大腿肌组织，切成0.3～0.5厘米小块。2．用不含钙镁离子的Hanks液配的0.25％胰蛋白酶消化，无菌纱网或纱布滤过，合成培养基加10％小牛血清培养，为促进分化可加1％的胎汁。3．细胞接种量为2×106/皿，接种在胶原或明胶的底物上能促进细胞分化
细胞生物基本方法：神经组织细胞培养
神经组织细胞培养1．获取脑组织后，先仔细剥除脑膜和血管等纤维成分，置入Hanks液中漂洗1～2次后，置于30～50倍的Hanks液中，脑组织比较柔软，反复吹打即可制成细胞悬液。2．为排除脂肪成分和其它碎块，把悬液注入离心管中，在室温直立5～10分钟后，细胞或细胞团块自然下沉，脂肪等杂物易漂浮于悬液表
细胞生物基本方法：结缔组织类细胞培养
结缔组织类细胞培养1）成纤维细胞培养用人或动物胚体为好；动物可用小鼠或鸡胚，去头和内脏，剪成小碎块后，用胰蛋白酶消化法培养；如为人胚，可取皮肤培养。幼儿包皮是培养成纤维细胞的很好对象。 2） 巨噬细胞培养1．实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml（勿注入肠内）。2．引颈杀死动物，手
肌组织细胞培养实验
骨骼肌细胞培养实验 心肌细胞培养实验 神经组织细胞培养实验 实验材料 肌组织
肌组织细胞培养实验
实验材料 肌组织试剂、试剂盒 Hanks胰蛋白酶血清胎汁仪器、耗材 纱布实验步骤 动物胚或幼体的大腿肌组织为最好的培养材料。取材常用生后1~2 天的乳鼠（Wistar 大鼠更好）。1. 杀死动物，无菌取大腿肌组织，切成0.3~0.5 厘米小块；2. 用不含钙镁离子的Hanks液配的0.25 %胰
肌组织细胞培养实验——神经组织细胞培养实验
实验方法原理神经组织主要由两种神经细胞（神经元）和神经胶质细胞组成。神经元为高度分化的细胞，在组织发生晚期已失掉增殖能力，对生存条件要求高，只有在适宜情况下，如接种在胶原底层上，或在加入神经生长因子（NGF）和胶质细胞因子时，才能生存，并可能出现一定程度的分化现象，如长出突起等，但却难使之增殖；即使
细胞生物基本方法：肿瘤细胞培养
肿瘤细胞培养特殊之处在于成纤维细胞的排除（成纤维细胞常与肿瘤细胞同时混杂生长，致难以纯化肿瘤组织）。有以下一些方法：1．机械刮除法2．反复帖壁法3．消化排除法4．胶原酶消化法 1） 机械刮除法1．标记：镜下观察，用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位。2．刮除：弃掉培养液，把无菌胶刮伸入
细胞生物基本方法：上皮细胞培养
上皮细胞培养1）表皮细胞培养1．取材：取外科植皮或手术残余皮肤小块，以角化层薄者为佳，早产流产儿皮肤更好，切成0.5～1平方厘米小块。2．EDTA处理：先置入0.02％EDTA中室温置5分钟。3．冷消化：换入0.25％胰蛋白酶中，置4℃过夜。4．分离：取出皮肤，用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开。5．
肌组织细胞培养实验——心肌细胞培养实验
实验方法原理心肌组织是最早利用的培养材料，Carrel曾长期培养过鸡胚心肌组织，至今心肌仍不失为好的培养物。最常用的是鸡胚心肌、小鼠、大鼠以及人胎儿心肌等都可应用。心肌是比较容易培养和生长的组织，可应用多种方法进行培养，如悬滴培养、组织块培养和消化培养法等，主要取心室肌培养，均能获得良好的生长效果。
肌组织细胞培养实验——骨骼肌细胞培养实验
实验材料肌组织试剂、试剂盒Hanks胰蛋白酶血清胎汁仪器、耗材纱布实验步骤动物胚或幼体的大腿肌组织为最好的培养材料。取材常用生后1~2 天的乳鼠（Wistar 大鼠更好）。1. 杀死动物，无菌取大腿肌组织，切成0.3~0.5 厘米小块；2. 用不含钙镁离子的Hanks液配的0.25 %胰蛋白酶消
细胞生物基本方法：常规组织培养法
常规组织培养法1）初代消化培养法1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2. 布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染
细胞培养基本方法
= 细胞培养基本方法 = (一)准备和安装过滤器 (二)合成培养基的配制 (三)小牛血清的处理 (四)生长培养基的配制(五)冻存细胞的复苏 (六)传代 (七)冻存 (八)注意事项 (一)准备和安装过滤器 清洗好过滤器，干燥，放入一张孔径0.22μm的微孔滤膜，用布包装好，
细胞培养基本方法
一)准备和安装过滤器 清洗好过滤器，干燥，放入一张孔径0.22μm的微孔滤膜，用布包装好，15磅20 min进行高压灭菌处理。 在超净台内打开过滤器架好，胶管一端接入滤泵再插入待除菌的液体中，出口端胶管深入到已消毒好的瓶子中。用泵过滤，过滤后要检查滤膜是否完好无损。 (二)合成培养基的配制 1、根
细胞培养的基本方法（二）
第四节 细胞计数及活力测定一、原理 培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分
细胞培养的基本方法细胞分离技术（一）
细胞分离技术一、从原代组织中分离细胞 将组织块分离（散）成细胞悬液的方法有多种，最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短，以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织，获得较高产量的有活性细胞。1.胰蛋
细胞培养的基本方法细胞分离技术（二）
1.悬浮细胞 ●计数将要冻存的活细胞。细胞应该处于对数生长期。以大约200～400g离心5分钟沉淀细胞，使用移液管移去上清到最小体积，不要搅乱细胞。 ●以1×107到5×107细胞/ml密度，在包含有血清的冷冻培养基中再次悬浮细胞，或者以0.5×107到1×107在无血清培养基中，再次悬浮细胞。 ●
细胞分离技术是细胞培养的基本方法
从原代组织中分离细胞 将组织块分离（散）成细胞悬液的方法有多种，最常用的是机械解离细胞法、酶学解离细胞法以及螯合剂解离细胞法。从原代组织中获得单细胞悬液的一般方法是酶解聚。细胞暴露在酶中的时间要尽可能的短，以保持最大的活性。下列步骤可以解聚整个组织，获得较高产量的有活性细胞。1.胰蛋白酶 (Tryp
关于微生物细胞培养的基本介绍
微生物多为单细胞生物，野生生存条件比较简单。所以微生物人工培养的条件比动植物细胞简单得多。其中厌氧微生物培养比好氧微生物复杂，因为严格厌氧需要维持二氧化碳等非氧的惰性气体浓度，而好氧微生物则只需要通过不断搅拌提供无菌氧气。微生物对培养条件要求不如动植物细胞那样苛刻，玉米浆、蛋白胨、麦芽汁、酵母膏
结缔组织类细胞培养
一、成纤维细胞培养用人或动物胚体为好；动物可用小鼠或鸡胚，去头和内脏，剪成小碎块后，用胰蛋白酶消化法培养；如为人胚，可取皮肤培养。幼儿包皮是培养成纤维细胞的很好对象。二、巨噬细胞培养1．实验前三天，向每只小鼠腹腔内注入无菌硫羟乙酸肉汤1ml（勿注入肠内）。2．引颈杀死动物，手提鼠尾将全鼠浸入70％酒
结缔组织类细胞培养实验——巨噬细胞培养实验
实验方法原理巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞容易获得，便于培养，并可进行纯化。但属不繁殖型细胞群，难以长期生存，好的条件下仅能生活2~3 周，因之多用作初代培养。巨噬细胞也能建成无限细胞系；大多来自小鼠，如P388D-1、J774A.1、RAW
细胞生物基本方法：复苏
复苏方法1．从液氮罐中取出安剖；有时因安剖未封严，浸入了液氮，取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸，因此应带有防护眼睛和手套。2．迅速放入盛有36℃～37℃水的搪瓷罐中，扣上盖并不时摇动，尽快解冻。3．剪开纱布口袋，取出安剖，用70％酒精擦拭消毒后，净化台上打开盖，用吸管吸出细胞悬液，装入离心管中，
细胞生物基本方法：常用转化细胞
几种常用转化细胞和转化技术1）致癌化学物转化细胞：转化叙利亚地鼠胚胎细胞实验1．取材：妊娠后第13天取材，取数个同窝胚胎，去头和内脏，在无菌条件下剪碎至米粒大小，再用0.25％胰蛋白酶（含0.01％EDTA）37℃消化30分钟，滤过、低速离心、吸除消化液、加入营养液、制备成细胞悬液、接种入1875p
结缔组织类细胞培养实验
成纤维细胞培养实验 巨噬细胞培养实验 实验方法原理 包括人在内的各种成纤维细胞都很容易培养，也是其它组织培养时的副产物，极易获得。人的成纤维细胞不仅
细胞培养方法
1、收到细胞，请查看瓶子是否有破裂，培养基是否漏出，是否浑浊，如有请尽快联系。2、收到细胞，如包装完好，请在显微镜下观察细胞。因路途耽搁等因素，细胞会有部分脱落。请在超净台中将培养瓶里的培养基吸出一部分，保留大约5-6ml左右在培养瓶里。将培养瓶置于37℃培养箱中培养，盖子微微拧松。吸出的培养基可以
细胞培养方法
细胞培养方法：1.玻璃吸管和玻璃培养瓶的消毒:高压蒸汽灭菌15分钟以上;2)干烤消毒140度2小时以上;2.无菌工作台先清洗后用75%酒精擦拭干净,紫外线照射40分钟以上;各种培养板照射3小时以上;3.培养基(pH7.2)和血清配制好后要做无菌试验:将血清按10%加入培养基内,用无菌的玻璃离心管或玻
细胞培养方法
一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试，具体内容可参阅有关文献。 二、取材
细胞培养方法
一、准备工作 准备工作对开展细胞培养异常重要，工作量也较大，应给予足够的重视，推备工作中某一环节的疏忽可导致实验失败或无法进行。准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试，具体内容可参阅有关文献。 二、取
结缔组织类细胞培养实验——成纤维细胞培养实验
实验方法原理包括人在内的各种成纤维细胞都很容易培养，也是其它组织培养时的副产物，极易获得。人的成纤维细胞不仅容易培养，而且生物性状稳定，很难发生转化，成为二倍体细胞培养的主要对象，人的二倍体细胞系，主要为成纤维细胞。实验材料细胞试剂、试剂盒胰蛋白酶仪器、耗材剪刀实验步骤为获取大量成纤维细胞培养，以便
细胞生物基本方法：冻存
冻存方法1．细胞：选对数生长期细胞，收集细胞24小时前换液一次。2．计数：按常规方法把细胞制成细胞悬液，计数，令细胞密度达5×106/ml，离心去上清，吸入离心管中。3．冻存液：先用培养液9分＋DMSO 1分（或甘油）配成10％的DMSO冻存液，按上法一滴滴加入离心管中，然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬
细胞培养的基本条
细胞培养是指从体内组织取出细胞在体外模拟体内环境下，使其生长繁殖，并维持其结构和功能的一种培养技术。细胞培养的培养物可以是单个细胞，也可以是细胞群。以下是细胞培养的基本条件： 一、合适的细胞培养基 合适的细胞培养基是体外细胞生长增殖的重要的条件之一，培养基不仅提供细胞营养和促使细胞生长增殖的基础物质