PCR方法检测病原微生物
多聚酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)是一种模拟天然DNA复制过程，在体外扩增特异性DNA（或RNA）片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板，然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物，引物分别与待扩增DNA片段的两端互补，经55℃低温退火，引物与模板互补结合。在72℃条件下，结合于模板上的引物在DNA聚合酶的催化下，利用反应体系中的4种dNTP为原料，按碱基互补配对的方式延伸合成两条新的DNA链。经过20-30个周期后，特异的目的DNA可扩增百万倍以上。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后即可观察到特异的扩增条带。 PCR方法操作简便，灵敏度高，可检测出少至0.1pg的目的DNA。目前已广泛应用于多种病原微生物及寄生虫的检测。 【材料】 1．无菌双蒸水、石蜡油、溴化乙锭 2．10×PCR反应缓冲液 3．25mmol dNTP混合液 4．引物1，......阅读全文
PCR方法检测病原微生物
多聚酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)是一种模拟天然DNA复制过程，在体外扩增特异性DNA（或RNA）片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板，然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物，引物分别与待扩增DNA片段的两端互补，经55℃低温退火，引
PCR方法检测病原微生物
多聚酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)是一种模拟天然DNA复制过程，在体外扩增特异性DNA（或RNA）片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板，然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物，引物分别与待扩增DNA片段的两端互补，经55℃低温退火，引
PCR方法检测病原微生物
多聚酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)是一种模拟天然DNA复制过程，在体外扩增特异性DNA（或RNA）片段的新技术。本实验是将待检双链DNA经94℃高温变性成单链作模板，然后加入一对人工合成的寡核苷酸引物，引物分别与待扩增DNA片段的两端互补，经55℃低温退火，引
PCR检测方法
PCR反应的zui大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。污染原因一、标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染
PCR检测方法（一）
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。污染原因一、标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致
PCR检测方法（二）
3.实验操作注意事项：尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意：（1）戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套。（2）使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不
食品病原微生物的检测方法有几种
食品病原微生物的检测方法有几种？生化检测方法分别有什么试验？正确答案：答：分别有生化检测方法和分子生物学检测方法。生化检测方法有：糖酵解试验，淀粉水解试验，V-P试验，靛基质实验，硝酸盐还原试验，明胶液化试验，尿素酶试验，氧化酶试验，硫化氢试验和三糖铁琼脂试验。
超多重PCR技术及其在临床病原微生物检测的应用（三）
2.2.2 基于分子的病原体检测技术2.2.2.1蛋白检测目前针对病原体蛋白的直接检测使用质谱技术，基于已建立的微生物胞膜蛋白质、脂多糖、核酸等的数据库对微生物进行精准鉴定和分析。质谱方法针对培养后浓度较高、品种较为单一的待测样品，通过获得其蛋白质图谱，再与已知微生物构建的数据库的参考图谱进行比对，
超多重PCR技术及其在临床病原微生物检测的应用（二）
1.3 靶向-NGS（tNGS）技术的应用超多重PCR兼具PCR对于特定微量DNA模板的特异性扩增性能以及多个片段同步扩增的能力，配合NGS测序，会拥有比普通宏基因组，全外显子组测序更为灵敏的特定基因检出率，此外前期建库流程更加简便易行并具有相当大的成本优势。目前tNGS技术的应用范围至少包括遗传疾
超多重PCR技术及其在临床病原微生物检测的应用（一）
一超多重PCR技术简介1.1 PCR及多重PCR技术1.1.1 PCR技术聚合酶链式反应(PCR)是一种在体外是用已知寡核苷酸引物引导未知片段中微量待测基因片段进行扩增的技术。PCR反应体系主要包括待扩增样品模版、特异性引物、DNA聚合酶(polymerase)、扩增底物dNTPs以及含有Mg2+的
荧光定量PCR检测方法
所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。 检测方法 1.SYBRGreenⅠ法： 在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信
病原微生物中细菌常见检测方法有哪些
1、快速测试片技术法快速测试片是指以纸片、纸膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过微生物在上面的生长、显色来测定食品中微生物的方法。细菌总数检测纸片的研制始于 20 世纪 80 年代，其主要优点是简便、实用、经济、操作性强。近年来以滤纸和美国某公司的 Petrifilm
病原微生物中细菌常见检测方法有哪些
病原微生物中细菌常见检测方法有哪些病原微生物种类繁多，变异迅速，快速鉴定病原微生物的检验技术也在不断发展前进著。目前，应用比较广泛的病原微生物检测方法主要有直接涂片镜检、分离培养、生化反应、血清学反应、核酸分子杂交、基因晶片、多聚酶链反应等，该文对这些检测技术进展做一综述。 对人和动物具有致病性的微
病原微生物中细菌常见检测方法有哪些
1、快速测试片技术法快速测试片是指以纸片、纸膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过微生物在上面的生长、显色来测定食品中微生物的方法。细菌总数检测纸片的研制始于 20 世纪 80 年代，其主要优点是简便、实用、经济、操作性强。近年来以滤纸和美国某公司的 Petrifilm
病原微生物中细菌常见检测方法有哪些
1、快速测试片技术法快速测试片是指以纸片、纸膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过微生物在上面的生长、显色来测定食品中微生物的方法。细菌总数检测纸片的研制始于 20 世纪 80 年代，其主要优点是简便、实用、经济、操作性强。近年来以滤纸和美国某公司的 Petrifilm
PCR（RTPCR）反转录－定性检测方法
1、试剂 (1)10倍 RT 缓冲液:500mmol/L Tris·Cl(pH8.0),0.60 mmol/L MgCl2,400mmol/L KCl,10mmol/L DTT。 (2)10倍 PCR 缓冲液:100mmol/L Tris·Cl(pH8.3),500mmol/L kCl,15
实时荧光定量PCR检测方法
聚合酶链式反应（PCR）是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。目前，PCR成为分子生物学研究必不可少的一部分。实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）技术，是指在PCR反应
核酸杂交法检测病原微生物
核酸杂交技术是根据两条互补的核苷酸单链可以杂交结合成双链的原理所建立，用一段已知序列的放射性或非放射性标记的核苷酸单链做探针，与待检标本中的DNA杂交来探查待检标本中有无与之相互补的核酸。该方法特异性高，但敏感性低于PCR方法。 本实验学习用非放射性标记物-地高辛(DIG)标记DNA片段作探针，用
核酸杂交法检测病原微生物
核酸杂交技术是根据两条互补的核苷酸单链可以杂交结合成双链的原理所建立，用一段已知序列的放射性或非放射性标记的核苷酸单链做探针，与待检标本中的DNA杂交来探查待检标本中有无与之相互补的核酸。该方法特异性高，但敏感性低于PCR方法。 本实验学习用非放射性标记物-地高辛(DIG)标记DNA片段作探针，用
PCR产物的检测方法有哪些
PCR产物的检测方法：琼脂糖凝胶电泳这是实验室最常用的方法，简便易行，只需少量DNA即可进行实验。其原理是不同大小的DNA分子通过琼脂糖凝胶时，由于泳动速度不同而被分离，经溴化乙锭（EB）染色，在紫外光照射下DNA分子发出荧光而判定其分子的大小。 用于电泳检测PCR产物的琼脂糖浓度常为1%—2%，应
常见荧光定量PCR检测方法比较
定量PCR：以参照物为标准，对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测，从而达到评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 常见荧光定量PCR方法比较 SYBR Green I 检测模式 SYBR
PCR产物的检测方法有哪些
1.琼脂糖凝胶电泳同时点分子量marker，根据marker条带判断产物分子量大小，从而大致判断是不是你要的2.酶切已知你产物的序列，看上面有什么酶切位点，用一个酶或者两个酶切断，看与理论预测的条带数目和大小是否一致。一般检测有以上两步就行了，如果需要知道确切的需要进行33.测序连接到pMD-18t
沙门氏菌PCR检测方法
美国爆发大肠杆菌疫情 疑似沙门氏菌肉事件爆发 ——重温沙门菌PCR 检测方法，奥豪斯助力食品检测安全 据英国《每日邮报》4月5日报道，美国疾病控制与预防中心（CDC）宣布，美国至少有5个州爆发危险性大肠杆菌疫情，已致72人患病。 据CDC 4月5日发布的公告称，大肠杆菌疫情已导致美国五个州72人患病
PCR产物的检测方法有哪些
PCR产物的检测方法：琼脂糖凝胶电泳这是实验室最常用的方法，简便易行，只需少量DNA即可进行实验。其原理是不同大小的DNA分子通过琼脂糖凝胶时，由于泳动速度不同而被分离，经溴化乙锭（EB）染色，在紫外光照射下DNA分子发出荧光而判定其分子的大小。 用于电泳检测PCR产物的琼脂糖浓度常为1%—2%，应
常见荧光定量PCR检测方法比较
定量PCR：以参照物为标准，对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测，从而达到评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量PCR。定量PCR的可行性定量一般是在PCR扩增的指数期进行的。 常见荧光定量PCR方法比较 SYBR Green I 检测模式 SYBR Green I 是一种能与双链 D
使用定量PCR方法检测转基因产品
转基因产品的检测可以从核酸和蛋白质水平上进行检测。定量检测主要是基于核酸水平的检测,由于目前转基因技术中使用的基因构件主要来源于花椰菜花叶病毒(CaMV)的 35S 启动子和脓杆菌的 Nos 终止子,绝大部分转基因产品含有这两个基因片段,所以检测 35S 启动子和 Nos 终止子基本可达到检测转基因
RTPCR的定义与检测方法
1.定义：是以RNA为模板，联合逆转录反应（reverse transcription，RT）与PCR，可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA模板。 RNA扩增包括两个步骤： 在单引物的介导下和逆转录酶的催化下，合成RNA的互补cDNA；加热后cDNA与RNA链解离，然后与另一引物退火
基因检测：NGS在病原微生物检测中的应用
文章导读 感染性疾病是当今世界严重威胁人类健康的重大疾病。目前，全球感染性疾病的发病率有所上升，病原体呈现多样化和复杂化的发展趋势。近年来快速发展的NGS技术因其不依赖于已知核酸序列，无需特殊探针设计，可直接对未知病原微生物进行检测，打破了传统微生物检验的局限性，在临床微生物领域展现了广阔的前景。
什么是RTPCR，RTPCR的定义与检测方法？
1.定义：是以RNA为模板，联合逆转录反应（reverse transcription，RT）与PCR，可用于检测单个细胞或少数细胞中少于10个拷贝的RNA模板。 RNA扩增包括两个步骤： 在单引物的介导下和逆转录酶的催化下，合成RNA的互补cDNA；加热后cDNA与RNA链解离，然后与另一引物退火
犬巨球菌PCR检测试剂盒检测方法
犬巨球菌PCR检测试剂盒检测方法： 1.Ⅰ法： 在PCR反应体系中，加入过量SYBR荧光染料，SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后，发射荧光信号，而不掺入链中的SYBR染料分子不会发射任何荧光信号，从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。 定量PCR扩增荧光曲线