荧光二抗如何选择Dylight荧光与传统荧光标记的比较
荧光二抗的选择——Dylight荧光与传统荧光标记的比较顾名思义,荧光二抗通常指代的就是带荧光团标记的二抗,这样的二抗可以通过观察其在不同波长下荧光的强度来确定其二抗的含量。常见的荧光团包括FITC、Rhodamine、Texas Red、PE、Cy系列等。比如FITC即异硫*酸荧光素,是目前应用最广泛的荧光素。最大吸收光波长为490~495nm,最大发射光波长为 520~530nm,呈现明亮的黄绿色荧光。其优势是分子量较小为389.4,每一个抗体可标记几个FITC分子,而且人眼对黄绿色较为敏感,因此具有很好的对比度其缺点是淬灭快。罗丹明(Rhodamin)及其衍生物则是一群带黄红色荧光的荧光素,包括TRITC、Texas Red等。罗丹明及其衍生物与FITC的绿色荧光对比鲜明,可配合用于双重标记或对比染色。因其荧光淬灭慢,也可用于单独标记染色,但是其荧光强度偏弱,其中Rhodamin比Texas Red荧光又要偏弱。艾美捷能为......阅读全文
荧光素标记抗体技术
(一) 原理 目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocynate,FITC)或罗达明(Lissamine rhodamine B200, RB200)。在硷性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合,标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力
LSCM多重荧光标记
由于大部分实验都需同时观测两个或多个细胞内的组分,需要对细胞进行多重荧光标记。这时,研究者需要综合考虑实验目的、所使用的激光共聚焦显微镜配置和已有的实验材料。通常,激光共聚焦显微镜配备 4 个激光器(405nm 半导体固体激光器、氩离子激光器、543nm 氦/氖激光器或 561nm半导体固体激光器和
PCR荧光标记选择探针法还是染料法?
特异性荧光标记——探针法: 是目前临床最常用的方法,在加入一对引物的同时再加入一对探针,特异性好,这里列举的是TaqMan水解探针:一段与靶基因特异性结合的序列,分别在5’端加入荧光报告基团,3’端加入荧光淬灭基团。其核心是利用taq酶的5’-3’外切酶活性切断探针,使得使荧光报告基团和荧
如何选择荧光蛋白的激发波长?
表一:波长组指定激发发射适用于UV - 紫外线360 - 380nm415nm长波通DapiVI - 紫罗兰400 - 415nm450nm长波通蓝色荧光蛋白青色荧光蛋白RB - 皇家蓝440-460nm500nm长波通绿色荧光蛋白RB - 皇家蓝440-460nm500 - 560nm带通
如何正确的选择荧光定量PCR仪
定量PCR仪主要由两部分组成,一个是PCR系统,一个是荧光检测系统。选择定量PCR仪的关键——由于定量PCR必需借助样本和标准品之间的对比来实现定量的,对于定量PCR系统来说,重要的参数除了传统PCR的温控精确性、升降温速度等等,更重要的还在于样品孔之间的均一性,以避免微小的差别被指数级放大。至于荧
荧光标记物质的波长
荧光标记物质的波长做荧光标记用得着。已搜索,无重复。前一个数字是激发波长,后一个是发射波长Fluorochrome--Excitation Wavelength--Emission WavelengthAcid Fuchsin 540 630Acridine Orange(Bound to DNA)
免疫荧光技术的合适荧光素的选择
1)具有与蛋白质形成共价键的化学基团。荧光素-N=C +NH-蛋白质 荧光素-N-C-N-蛋白质‖ ︱ ︱‖ ︱S H H SH2)荧光效率高,标记后下降不明显。3)荧光色泽与背景色泽对比鲜明。4)标记后能保持生物学活性和免疫活性5)标记方法简单、快速。6)安全无毒
如何评估不同荧光标记的稳定性?
评估不同荧光标记稳定性的方法:时间序列检测:将标记好的细胞或样本在特定条件下(如室温、4°C 或 37°C 等)放置不同的时间间隔,然后在相同的检测条件下使用流式细胞仪或荧光显微镜进行荧光强度的检测。观察随着时间的推移,荧光强度的变化情况。光照暴露实验:将标记后的样本暴露在一定强度的激发光下不同的时
如何选择合适的荧光标记在流式细胞仪分选细胞?
选择合适的荧光标记在流式细胞仪分选细胞时,需要考虑以下几个方面:流式细胞仪的配置:了解仪器所配备的激光波长和检测通道。不同的流式细胞仪具有不同的激光和滤光片组合,应选择与仪器兼容的荧光染料。荧光染料的光谱特性:确保所选荧光染料的激发和发射波长与仪器的检测通道匹配,并且避免与其他同时使用的荧光染料的光
荧光素酶报告基因用品的选择与应用(二)
如果您的实验需要构建双荧光素酶报告载体,我们有下列产品供您挑选: 1.我们有双荧光素酶报告载体产品 产品名称 货号 规格 产品描述 pEZX-FR01 ZX001 10ug 包
原子荧光分光光度法与分子荧光法的比较
原子荧光分光光度法(Atomic fluorescence spec-trophotometry) 通过测量待测元素的原子蒸气在辐射能激发下所产生的荧光发射强度,来测定待测元素含量的仪器分析方法称为原子荧光分光光度法。 这种方法比原子吸收法灵敏度高,但需要采用高强度光源。例如:可待因、吗啡、那可汀、
多色流式实验荧光素的选择(二)
3. 多色流式细胞检测中荧光素选择的原则1) 根据机器配置选择荧光素了解你使用的流式细胞仪的性能,大多数流式细胞仪有两个或者多个激光器,有五种波长可供选择:紫外(355 nm)、紫色(405 nm)、蓝色(488 nm)、黄色(561 nm)和红色(640 nm)。除了激光器,具体的激光片和检测
多肽荧光标记——FITC修饰和AMC修饰(二)
(2)在整条肽中的某个Lys侧链接入FITC,Lys侧链为末端为-NH2的四碳直链烷基,直接起到了降低空间位阻的作用。这种修饰方式能够灵活的在整条肽中任何位置进行FITC修饰,而不仅仅局限于末端。我们所采用的FITC修饰多肽的两种形式,都具有操作简便,成功率高,容易分离纯化等优点。2.AMC修饰7-
单波长X荧光硅含量分析仪与传统仪器的性能比较
石油炼制过程中,有时会加入一些含有硅化合物的实际,或在燃油炼制完成后将一些废溶剂掺入到汽油造成汽油中含有硅元素。汽油中,即使硅含量很低,但仍然会造成像氧气传感器失效,以及发动机故障。长期使用劣质燃油,胶质和无法完全燃烧的物质会在气门、进气道、燃烧室内堆积,慢慢形成坚硬的积炭。这类物质会对汽油有吸附作
什么是荧光标记法
荧光物标记法,神经纤维的末梢可以吸收很多荧光化合物或荧光染料,经轴突逆向运输到细胞体内,从而建立逆行荧光标记法。例如:Kuypers等(1977)用这种方法在荧光显微镜下根据所用荧光物标记物特有的波长显示吸收荧光物的神经细胞。目前用于神经元标定的荧光物质有十多种。可以根据实验的要求进行单荧光物、双标
共聚焦荧光探针标记方法
(一)BCECF测定pH值 1. 储存液配制 BCECF-AM溶于DMSO配成1mmol/L溶液,等份分装后,-20℃避光保存。 2. 染色步骤 将培养细胞用PBS(含Ca2+、Mg2+)洗2遍。加入BCECF-AM(终浓度1~5μmol/L),37℃孵育30~60min。PBS(含Ca2+、M
蛋白质的荧光激发波长如何选择?
荧光蛋白的波长组指定激发发射适用于UV - 紫外线360 - 380nm415nm长波通DapiVI - 紫罗兰400 - 415nm450nm长波通蓝色荧光蛋白青色荧光蛋白RB - 皇家蓝440-460nm500nm长波通绿色荧光蛋白RB - 皇家蓝440-460nm500 - 560nm
如何选择荧光发射光谱的激发波长
以不同波长的入射光激发荧光物质,并在固定波长处测量激发出来的荧光强度,然后以激发波长为横坐标,荧光强度为纵坐标绘制关系曲线,便得到荧光激发光谱,简称激发光谱。若固定激发的波长和强度不变,测量不同波长处发射的荧光强度,绘制荧光强度随发射波长变化的关系曲线,便得到荧光发射光谱,简称荧光光谱。
如何选择荧光发射光谱的激发波长
以不同波长的入射光激发荧光物质,并在固定波长处测量激发出来的荧光强度,然后以激发波长为横坐标,荧光强度为纵坐标绘制关系曲线,便得到荧光激发光谱,简称激发光谱。若固定激发的波长和强度不变,测量不同波长处发射的荧光强度,绘制荧光强度随发射波长变化的关系曲线,便得到荧光发射光谱,简称荧光光谱。
荧光素标记抗体的操作步骤
FITC荧光素标记抗体的操作步骤 www.runwelltac.com当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时,主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖
免疫荧光标记的应用
半个多世纪以来,经过许多学者不断改进和发展,使此项技术成为微生物学、免疫学、病理学及免疫组织化学中常用的一种免疫学实验方法,在临床上得到了广泛的应用,使许多疑难肿瘤得到了明确诊断。
荧光素FITC标记抗体的方法
当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时,主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合,形成FITC-蛋白质结合物,即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基,一般zui多能结合15~20个,一个IgG分子可结合2~8个分子的FITC,其反应式如下FI
双重荧光定量PCR探针荧光基团该怎么选择
有干扰的话,在仪器上面就可以看出来,比如说,FAM和VIC,FAM有信号,单独看VIC也肯定有信号,只是低点而已
荧光western-Blot:选择可见荧光检测还是红外检测?
荧光western Blot:选择可见荧光检测还是红外检测? 荧光检测的主要优势之一是可以进行多重检测(2种甚至更多种蛋白)。当前的实验技术允许使用近红外检测两种蛋白也可以使用三色RGB可见荧光检测三种蛋白。 近红外检测的优势 同时检测三种蛋白要比两种好,为什么我们还要选择红外
荧光western-Blot-:选择可见荧光检测还是红外检测?
荧光western Blot:选择可见荧光检测还是红外检测?荧光检测的主要优势之一是可以进行多重检测(2种甚至更多种蛋白)。当前的实验技术允许使用近红外检测两种蛋白也可以使用三色RGB可见荧光检测三种蛋白。近红外检测的优势同时检测三种蛋白要比两种好,为什么我们还要选择红外成像呢?红外荧光检测印迹膜上
原装进口酶标各种荧光标记抗地高辛抗体
地高辛(Digoxin)是一种从洋地黄提取出的beta抑制剂性的药物,被广泛用于治疗高血压、瓣膜性心脏病、先天性心脏病等急性和慢性心功能不全的一种药物。由于地高辛的治疗指数狭窄,用药过量与用药不足时的症状相似,加之其个体差异大,故中毒的发生率高,是临床上最难掌握药物之一。目前解除地高辛毒性的最有效的
荧光分析法的荧光是如何产生的?
根据波兹曼 (Boltzmann)分布,分子在室温时基本上处于 电子能级的基态。当吸收了紫外-可见光后,基态分子中的电子只能跃迁到激发单重态的各个不同振动-转动能级,根据自旋禁阻选律, 不能直接跃迁到激发三重态的各个振动-转动能级。处于激发态的分子是不稳定的,通常以辐射跃迁和无辐射跃迁等方式释放多余
与透射荧光相比,反射激发荧光的优点
目前荧光显微镜使用二种激发照明方式,一为透射方法,另一为反射方法。透射激发是过去沿用下来的方法,往往只需在普通显微镜前方设置一个超高压汞灯作光源,灯前设置激发滤光片,在目镜处设置遏止滤光片,这样即可作一般透射荧光观察,比较经济实用,使用也很习惯。目前专用的透射荧光显微镜,其聚光镜用暗场聚光镜,暗场荧
蛋白质的内源荧光与荧光探针
利用荧光光谱法研究蛋白质一般有两种方法。一是测定蛋白质分子的自身荧光(内源荧光),另一种是当蛋白质本身不能发射荧光时,通过非共价吸附或共价作用向蛋白质分子的特殊部位引入外源荧光(也称荧光探针),然后测定外源荧光物质的荧光。 蛋白质的内源荧光 含有芳香族氨基酸(色氨酸(tryptophan ,Trp
活体成像中荧光染料的选择与成像
Cy5.5(Ex/Em:678/701 nm)和Cy7(Ex/Em:749/776 nm)是对分子标记的最优选择之一;DiD(Ex/Em:644/663 nm)、DiR(Ex/Em:748/780)染料则常用于活体成像实验中对细胞进行标记。 一、Cy5.5 、Cy7 Cy5.5 、Cy7避开了可见