AffinityChromatography
（一）原理 亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。 此法具有高效、快速、简便等优点。 （二）载体的基本要求和选择 理想的载体应具有下列基本条件：①不溶于水，但高度亲水；②惰性物质，非特异性吸附少；③具有相当量的化学基团可供活化；④理化性质稳定；⑤机械性能好，具有一定的颗粒形式以保持一定的流速；⑥通透性好，最好为多孔的网状结构，使大分子能自由通过；⑦能抵抗微生物和醇的作用。 可以做为固相载体的有皂土、玻璃微球、石英微球、羟磷酸钙、氧化铝、聚丙烯酰胺凝胶、淀粉凝胶、葡聚糖凝胶、纤维素和琼脂糖。在这些载体中，皂土、玻璃微球等吸附能力弱，且不能防止非特异性吸附。纤维素的非特......阅读全文
Affinity－Chromatography
（一）原理 亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。 此法具有高效、快速、简便等优点
亲和层析(affinity－chromatography)技术
（一）原理亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。此法具有高效、快速、简便等优点。（
亲和层析(Affinity－Chromatography)(2)
⑵基质的活化基质的活化是指通过对基质进行一定的化学处理，使基质表面上的一些化学基团转变为易于和特定配体结合的活性基团。配体和基质的偶联，通常首先要进行基质的活化。①多糖基质的活化多糖基质尤其是琼脂糖是一种常用的基质。琼脂糖通常含有大量的羟基，通过一定的处理可以引入各种适宜的活性基团。琼脂糖的活化方法
亲和层析(Affinity－Chromatography)(1)
亲和层析(Affinity Chromatography)是利用生物分子间专一的亲和力而进行分离的一种层析技术。人们很早就认识到蛋白质、酶等生物大分子物质能和某些相对应的分子专一而可逆的结合，可以用于对生物分子的分离纯化。但由于技术上的限制，主要是没有合适的固定配体的方法，所以在实验中没有广泛的
亲和层析(Affinity－Chromatography)(3)
⑥元素分析：如果配体中含有某种特别的元素，通过元素分析就可以确定配体结合量。⑦放射性分析法：偶联中加入一定量带有同位素的配体，通过放射性分析确定配体结合量，这是一种非常灵敏的方法。影响配体结合量的因素很多，包括基质和配体的性质、基质的活化方法及条件、基质和配体偶联反应的条件等等。例如通常溴化氰活化的
亲和层析(affinity－chromatography)的应用
亲和层析的应用主要是生物大分子的分离、纯化。下面简单介绍一些亲和层析技术用于纯化各种生物大分子的情况。1.抗原和抗体利用抗原、抗体之间高特异的亲和力而进行分离的方法又称为免疫亲和层析。例如将抗原结合于亲和层析基质上,就可以从血清中分离其对应的抗体。在蛋白质工程菌发酵液中所需蛋白质的浓度通常较低,用离
亲和层析法(affinity－chromatography)纯化多克隆抗体
【实验原理】如图所示，亲和层析的高度选择性使得从某一初始材料中纯化，富集某一含量较低的目的蛋白成为可能，因此亲和层析是蛋白质分离纯化过程中最有效的方法之一。另外，如果配基与蛋白质的亲和能力很强，也可同时进行样品的浓缩。 虽然多数情况下不需要将抗体与其他血清蛋白分开，但如果一旦需要，蛋白A亲和层析
亲和层析(affinity－chromatography)实验方法：溴化氰活化
亲和层析的实验操作和一般柱层析类似，都包括：装柱、上样、洗脱、样品收集、结果处理等步骤。溴化氰活化琼脂糖用于配体固相化是实验室亲和层析最常用的技术之一，该方法简便廉价，并广泛应用于蛋白质、核酸、凝集素等。下面以此为例介绍亲和层析的实验方法：试剂与配制1.Sepharose 4B2.CNBr（剧毒）3
亲和层析法(affinity－chromatography)纯化胰蛋白酶2
本实验采用猪胰蛋白酶的天然抑制剂—鸡卵类粘蛋白作为配基．从猪胰脏的粗提液中分离纯化胰蛋白酶。鸡卵类粘蛋白是一种专一性很强的胰蛋白酶的抑制剂，对猪和牛的胶蛋白酶有很强的抑制作用。而对胰凝乳蛋白酶无抑制作用。在pH7.6~8.0的范围内，猪或牛胰蛋白酶能牢固地吸附在鸡卵类粘蛋白上，在 PH2.5
亲和层析(affinity－chromatography)过程中的注意事项
1.上样亲和层析纯化生物大分子通常采用柱层析的方法。亲和层析柱一般很短，通常10cm左右。上样时应注意选择适当的条件，包括上样流速、缓冲液种类、 pH、离子强度、温度等，以使待分离的物质能够充分结合在亲和吸附剂上。一般生物大分子和配体之间达到平衡的速度很慢，所以样品液的浓度不易过高，上样时流速应比较
亲和层析法(affinity－chromatography)纯化胰蛋白酶1
一、实验目的 1.熟悉亲和层析纯化蛋白质的的原理。 2.初步掌握亲和层析法纯化胰蛋白酶的方法步骤。 二、实验原理 亲和层析已经广泛应用于生物分子的分离和纯化，如结合蛋白、酶、抑制剂、抗原、抗体、激素、激素受体、糖蛋白、核酸及多糖类等，也可用于分离细胞
Antigen－Affinity－Purification－of－Antibodies
实验概要To acquire purified antibodies (This method typically yields >95% pure specific antibodies ).实验原理 Cytokines are signaling proteins necessary for
Thin－Layer－Chromatography
Reaction volume 100 ul5 ul NADPH (100 mM)x ul cell extract so you get 50 % conversion0.2 uM C14-Testosteroneadd Tris-Citrate Buffer pH 6 to an endvolu
抗体纯化
Antibody PurificatioinPurification of IgG Using Protein A- or Protein G-Agarose (KPL) Purifying Antibodies (Perkin-Elmer)Precipitation MethodsProtein
蛋白质的理化性质有哪些
蛋白质主要的理化性质以及对应的分离纯化方法如下： 电荷 Charge：等电聚焦 isoelectricfocussing离子交换 Ion-Exchange等电点沉淀 Isoelectric precipitation疏水性 Hydrophobicity：反相层析 Reverse phase chro
亲和色谱法（affinity－chromatograph）
一、基本理论（一）原理：在生物体内，许多大分子AKSJDHFKLSDFHKLSDJ具有与某些相对应的专一分子可逆结合的特性。例如抗原和抗体、酶和底物及辅酶、激素和受体、RNA和其互补的DNA等，都具有这种特性。生物分子之间这种特异的结合能力称为亲和力，根据生物分子间亲和吸附和解离的原理，建立起来的色
Analysis－of－Oligosaccharide－Ligands
Analysis of Oligosaccharide Ligands by High Performance Liquid Affinity ChromatographyAnalysis of Oligosaccharide Ligands by High Performance Liquid A
高效液相色谱的类型
1．吸附色谱法(Absorption Chromatography)2．分配色谱法(Partition Chromatography)3．离子色谱法(Ion Chromatography)4．分子排阻色谱法/凝胶色谱法(Size Exclusion Chromatography)5．键合相色谱法（b
简述高效液相色谱法的类型
1．吸附色谱法(Adsorption Chromatography) 2．分配色谱法(Partition Chromatography) 3．离子色谱法(Ion Chromatography) 4．分子排阻色谱法/凝胶色谱法(Size Exclusion Chromatography)
高效液相色谱法的主要类型
1．吸附色谱法(Adsorption Chromatography)2．分配色谱法(Partition Chromatography)3．离子色谱法(Ion Chromatography)4．分子排阻色谱法/凝胶色谱法(Size Exclusion Chromatography)5．键合相色谱法（b
高效液相色谱的类型
1．吸附色谱法(Absorption Chromatography)2．分配色谱法(Partition Chromatography)3．离子色谱法(Ion Chromatography)4．分子排阻色谱法/凝胶色谱法(Size Exclusion Chromatography)5．键合相色谱法（b
亲和吸附剂(Affinity－Absorbent,AA)1
选择并制备合适的亲和吸附剂是亲和层析的关键步骤之一。它包括基质和配体的选择、基质的活化、配体与基质的偶联等等。基质基质的性质基质构成固定相的骨架，亲和层析的基质应该具有以下一些性质：1.具有较好的物理化学稳定性。在与配体偶联、层析过程中配体与待分离物结合、以及洗脱时的pH、离子强度等条件下，基质的性
亲和吸附剂(Affinity－Absorbent,AA)3
2.配体与待分离的物质之间的亲和力要有较强的特异性，也就是说配体与待分离物质有适当的亲和力，而与样品中其它组分没有明显的亲和力，对其它组分没有非特异性吸附作用。这是保证亲和层析具有高分辨率的重要因素。3.配体要能够与基质稳定的共价结合，在实验过程中不易脱落，并且配体与基质偶联后，对其结构没有明显改变
Translating－Ribosome－Affinity－Purification－(TRAP)－for－CellSpecific－...
The development of a multicellular organism is accompanied by cell differentiation. In fact, many biological processes have cell specificity, such
亲和吸附剂(Affinity－Absorbent,AA)2
2.环氧乙烷基活化这类方法活化后的基质都含有环氧乙烷基。如在含有NaBH4的碱性条件下，1，4－丁二醇－双缩水甘油醚的一个环氧乙烷基可以与羟基反应，而将另一个环氧乙烷基结合在基质上。另外也可以用环氧氯丙烷活化，将环氧乙烷基结合在基质上。这种活化方法的优点是活化后不引入电荷基团，而且基质与配体形成的N
亲和色谱法
亲和色谱法（ affinity chromatography），将相互间具有高度特异亲和性的二种物质之一作为固定相，利用与固定相不同程度的亲和性，使成分与杂质分离的色谱法。中文名：亲和色谱法外文名：affinity chromatography所属学科：生物应用领域：实验例如利用酶与基质（或抑制剂）
色谱术语的常用中英文对照
液相色谱法 liquid chromatography，LC液液色谱法 liquid liquid chromatography，LLC液固色谱法 liquid solid chromatography，LSC正相液相色谱法 normal phase liquid chromatography反相液
胶囊色谱(Micellar－Chromatography,MC)介绍
又称拟相液相色谱或假相液相色谱(Pseudophase LC)，是一种新型的液相色谱技术。特点是应用含有高于临界胶囊浓度的表面活性剂溶液作为流动相。所谓“胶囊”就是表面活性剂溶液的浓度超过其临界胶囊浓度(Critical Micelle Concentration,CMC)时形成的分子聚合体。通常每
Purification－of－Antiserum－or－Ascites－by－Protein－A/G－Chromatography
1、Required Materials and Equipment(1) Protein A or G agarose gel column (10 ml or 5 ml of packed beads; see guidelines below for choice of protein A o
AntiDYKDDDDK－tag－(L5)－Affinity－Gel
实验概要Anti-DYKDDDDK tag (L5) affinity gel is a purified rat IgG2a, κ monoclonal antibody covalently attached to agarose by hydrazide linkage. It is us