AffinityChromatography
（一）原理 亲和层析是一种吸附层析，抗原（或抗体）和相应的抗体（或抗原）发生特异性结合，而这种结合在一定的条件下又是可逆的。所以将抗原（或抗体）固相化后，就可以使存在液相中的相应抗体（或抗原）选择性地结合在固相载体上，借以与液相中的其他蛋白质分开，达到分离提纯的目的。 此法具有高效、快速、简便等优点。 （二）载体的基本要求和选择 理想的载体应具有下列基本条件：①不溶于水，但高度亲水；②惰性物质，非特异性吸附少；③具有相当量的化学基团可供活化；④理化性质稳定；⑤机械性能好，具有一定的颗粒形式以保持一定的流速；⑥通透性好，最好为多孔的网状结构，使大分子能自由通过；⑦能抵抗微生物和醇的作用。 可以做为固相载体的有皂土、玻璃微球、石英微球、羟磷酸钙、氧化铝、聚丙烯酰胺凝胶、淀粉凝胶、葡聚糖凝胶、纤维素和琼脂糖。在这些载体中，皂土、玻璃微球等吸附能力弱，且不能防止非特异性吸附。纤维素的非特......阅读全文
关于离子对色谱法(Ion－Pair－Chromatography)的简介
离子对色谱法是将一种 ( 或多种 ) 与溶质分子电荷相反的离子 ( 称为对离子或反离子) 加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成疏水型离子对化合物，从而控制溶质离子的保留行为。其原理可用下式表示： X+水相+ Y-水相=== X+Y-有机相 式中：X+水相--流动相中待分离的有机离子（
层析技术(色谱法,Chromatography)概念、分类和操作(1)
层析技术概述引言层析法又称色层分析法或色谱法(Chromatography)，它是在 1903~1906年由俄国植物学家M. Tswett首先提出来的。他将叶绿素的石油醚溶液通过CaCO3管柱，并继续以石油醚淋洗，由于CaCO3对叶绿素中各种色素的吸附能力不同，色素被逐渐分离，在管柱中出现了不同
凝胶层析法(gel－chromatography)测定蛋白质分子量
一、实验目的1. 了解凝胶层析的原理及其应用。2. 通过测定蛋白质分子量的训练，初步掌握凝胶层析技术。 二、实验原理 凝胶层析又称排阻层析，凝胶过滤，渗透层析或分子筛层析等。它广泛地应用于分离、提纯、浓缩生物大分子及脱盐、去热源等，而测定蛋白质的分子量也是它的重要应用之一。凝胶是一种具有立体
离子色谱(ion－chromatography,IC)分离方式和检测方式的选择
分析者对待测离子应有一些一般信息，首先应了解待测化合物的分子结构和性质以及样品的基体情况，如无机还是有机离子，离子的电荷数，是酸还是碱，亲水还是疏水，是否为表面活性化合物等。待测离子的疏水性和水合能是决定选用何种分离方式的主要因素。水合能高和疏水性弱的离子，如Cl-或K+，最好用HPIC分离。水合能
用纸层析法(Paper－Chromatography)鉴定转氨酶的转氨基作用
【基本原理】转氨基作用广泛地存在于机体各组织器官中，是体内氨基酸代谢的重要途径。氨基酸反应时均由专一的转氨酶催化，此酶催化氨基酸的α－氨基转移到另一α－酮基酸上。各种转氨酶的活性不同，其中肝脏的谷丙转氨酶（Glutamic Pyruvic Transaminase ,GPT）活性较高，它催化如下
层析技术(色谱法,Chromatography)概念、分类和操作(2)
3)采用适当的流速，也可使理论塔板的高度降低，增大理论塔板数。太高或太低的流速都是不可取的。对于一个层析柱，它有一个最佳的流速。特别是对于气相色谱，流速影响相当大。②改变容量因子D(固定相与流动相中溶质量的分布比)。一般是加大D，但D 的数值通常不超过10，再大对提高Rs 不明显，反而使洗脱的时
凝胶层析法(gel－chromatography)脱盐和分离蛋白质3
灌注凝胶时要求将均匀的凝胶一直加到所需柱床高度，不能时断时续，否则将出现分层或“纹路”等毛病。若中途出现这些现象，可以用玻璃棒将已形成的柱床逐步搅起，直至出毛病的部分再让凝胶重新沉降或继续加入搅匀的凝胶悬液。若在灌好胶后才发现“纹路”、分层等现象时，要重新装柱，以免影响层析效果。在做大型的凝胶柱时，
离子交换层析法(ion－exchange－chromatography)分离氨基酸
实验原理离子交换层析法主要是根据物质的解离性质的差异而选用不同的离子交换剂进行分离的方法。各种氨基酸分子的结构不同，在同一pH时与离子交换树脂的亲和力有差异，因此可依据亲和力从小到大的顺序被洗脱液洗脱下来，达到分离的效果。试剂和器材一、试剂与材料苯乙烯磺酸钠型树脂（强酸1×8，100—200目）；2
碳水化合物分析
Carbohydrate Assay (Hancock Laboratory) (Accessible only by IE)This protocol is used to determine the relative amounts of LPS CHO present in a given s
Gradiflow－技术在蛋白质分离研究中的应用（一）
电泳是现代蛋白质研究常用和有效的工具，但是电泳过程中所产生的热量对蛋白质结构的破坏，以及目的蛋白从蛋白胶或其他介质中低的回收效率等等问题，常常让蛋白质更深入的研究戛然而止，而Gradiflow 技术的应用解决了研究者头疼的难题 ！ Gradiflow 技术要点可以简单概括为如下几点：1. 应用不同孔
凝胶层析法（gel－chromatography）测定蛋白质相对分子质量
实验目的掌握凝胶层析的基本原理。学习利用凝胶层析法测定蛋白质相对分子质量的实验技能。实验原理凝胶层析法也称分子筛层析法，是利用具有一定孔径大小的多孔凝胶作固定相的层析技术。当混合物随流动相经过凝胶层析柱时，其中各组分按其分子大小不同而被分离的技术。该法设备简单、操作方便、重复性好、样品回收率高。凝胶
离子交换柱层析(ionexchange－chromatography)分离核苷酸
一、目的：学习离子交换柱层析法分离核苷酸的原理及方法。二、原理：离子交换作用一般指在固相和液相之间发生的可逆的离子交换反应，它可用于分离各种可解离的物质。通常离子交换剂是在一种高分子的不溶性母体上引入若干活性基团。这样人工会成的离子交换剂具有各种各样的性能。作为不溶性母体的离分子有树脂、纤维素、葡聚
链亲和素的性状
链亲和素的性状描述级别：Biotechnology grade活力：≥17 units/mg proteinDnase,Rnase&protease activity：None detectedElectrophoresis （One Band）：Pass产品描述：Streptomyces av
《生物化学》――名词解释
氨基酸（amino acids）: 是含有一个碱性氨基和一个酸性羧基的有机化合物，氨基一般连接在α-碳上。氨基酸是肽和蛋白质的构件分子。 必需氨基酸（essential amino acids）： 指人（或其它脊椎动物）自己不能合成，需要从饮食中获得的氨基酸，例如赖氨酸、苏氨酸等
高效液相色谱的信噪比怎么算
信噪比的意思，就是信号和噪声之间的比值。例如：一针样品，然后观察基线噪声的数值，其噪声是0.1mAu（或者0.1mV），峰高可以读取为10mAu。那么这个浓度就是信噪比的100倍。如果做检测限或者定量限，就按照比例稀释样品就可以了。噪声又称作基线噪声。这个是可以目测出来的。跑一段平稳的基线，然后把纵
高效液相色谱的信噪比怎么算
信噪比的意思，就是信号和噪声之间的比值。例如：一针样品，然后观察基线噪声的数值，其噪声是0.1mAu（或者0.1mV），峰高可以读取为10mAu。那么这个浓度就是信噪比的100倍。如果做检测限或者定量限，就按照比例稀释样品就可以了。噪声又称作基线噪声。这个是可以目测出来的。跑一段平稳的基线，然后把纵
蛋白质与多肽提取分离方法2
1.1.7 灌注层析（Perfusion Chromatography，PC）PC是一种基于分子筛原理与高速流动的流动相的层析分离方法，固定相孔径大小及流动相速度直接影响分离效果。试验证明其在生产、制备过程中具有低投入、高产出的特性。目前市场上可供应的PC固定相种类较多，适合于不同分子量的多肽分离
Comprehensive－identification－of－novel－proteins－and－Nglycosylation－sites一
Comprehensive identification of novel proteins and N-glycosylation sites in royal jellyLan Zhang1,2†, Bin Han1†, Rongli Li1, Xiaoshan Lu1,3, Aiying Ni
分配色谱是什么？
以流动相为气体、液体不同，可以区分为气相色谱(GC)、液相色谱(LC)。高效液相色谱(HPLC)与液相色谱(LC)的区别：高效液相色谱(HPLC)以经典的气相色谱法和液相色谱法为基础，发展起来的分离分析技术。 经典的液相色谱(LC)：使用粗粒多孔固定相，装填在大口径、长玻璃柱管内，流动相仅靠重
蛋白质纯化技术—亲和色谱法的基本信息介绍
许多生物大分子物质具有与其结构相对应的专一分子发生可逆性结合的特征，如酶与底物及辅助因子、酶与抑制剂、抗原与抗体、激素与受体、核酸片段与其互补的核酸序列、生物素与亲合素等，分子间的这种结合能力叫作亲和力。 亲和色谱（affinity chromatography）是利用生物大分子间所具有的特异
细菌细胞壁糖的薄层层析(thin－layer－chromatography,TLC)(1)
一、实验目的1.熟悉薄层层析的操作步骤。2.掌握薄层层析法分析细菌细胞壁糖的原理和方法。二、实验原理簿层层析是一种微量而快速的层析方法。该方法是把吸附剂或支持剂(例如硅胶或硅藻土)涂在玻璃板上成为一簿层，将要分析的样品滴加到薄层上，然后用合适的溶剂进行展开，使样品中各个成分分离，最后进行定性鉴定和定
氨基酸纤维素薄层层析(cellulose－thinlayer－chromatography)
一、目的学习纤维素薄层层析的操作方法，掌握分配层析的原理。二、原理以纤维素作为支持物，把它均匀地涂布在玻璃板上成一薄层，然后在此薄层上进行层析即为纤维素薄层层析。纤维素是一种惰性支持物，它与水有较强的亲和力而与有机溶剂亲和力较弱。层析时吸着在纤维素上的水是固定相，而展层溶剂是流动相。当欲被分离的各种
可溶性糖的硅胶G薄层层析(thin－layer－chromatography,TLC)
一、实验目的1.了解薄层层析测定可溶性糖的原理。2.掌握硅胶G 薄层层析的操作方法。二、实验原理薄层层析(简称TLC)是一种微量而快速的层析方法，是在吸附剂或支持剂均匀涂布的薄层上进行的，故称薄层层析。为了使所要分析的样品各组分得到分离，必须选择合适的吸附剂。硅胶、氧化铝和聚酰胺是广泛采用的吸附剂，
细菌细胞壁糖的薄层层析(thin－layer－chromatography,TLC)(2)
四、操作步骤(一)菌体培养及样品的准备1.菌体培养：以枯草芽孢杆菌为例。培养基成分为：1％蛋白胨，0.5％氯化纳，1％牛肉汁，调pH 至7.2。将培养基装入500mL 三角瓶内，每瓶100mL，灭菌，5.52×10Pa，30分钟。灭菌后的培养基冷至约30℃，用接种环取菌株一环，接种于培养基内。摇床培
金属螯合层析(metal－chelate－chromatography)分离纯化超氧化物歧
[原理] 金属螯合层析是利用固定相偶联的配基——亚氨基二乙酸(IDA)及金属离子发生螯合作用，该金属离子又与蛋白分子中的某些含有巯基或咪唑基的氨基酸结合。 金属螯合层析主要分为3个阶段：第一阶段是螯合介质与二价金属离子作用生成金属螯合介质；第二阶段是在一定的条件下金属螯合介质与被
Antibody－Purification
This protocol includes an ammonium sulfate cut, affigel blue chromatography and affinity chromatography.1. Solutions(1) Affigel Blue Prewash0.1 M acet
Aethlon血液过滤系统获FDA突破性设备认定
今日，Aethlon Medical公司宣布，该公司的Hemopurifier技术获得美国FDA授予的突破性设备（Breakthrough Device）认定，用于治疗癌症。Hemopurifier是一种“first-in-class”技术，它能够迅速从血液中清除促进癌症发展的外泌体和危及生命的
关于分离纯化多肽、蛋白质的分析方法亲和层析的介绍
AC 是利用连接在固定相基质上的配基与可以和其特异性产生作用的配体之间的特异亲和性而分离物质的层析方法。自1968 年Cuatrecasas 提出亲和层析概念以来，在寻找特异亲和作用物质上发现了许多组合，如抗原-抗体、酶-催化底物、凝集素-多糖、寡核苷酸与其互补链等等。对多肽类物质分离目前主要应
蛋白质纯化亲和层析法
若表达蛋白质上含有一段六个His 的片段，而亲和吸附胶上接有镍离子，此蛋白质会特异性地结合到吸着胶体；洗去杂质后可imidazole 洗脱目标蛋白质。（Pharmacia 操作手册， Affinity Chromatography）。仪器设备：亲和层析管柱 （Bio-Rad 731-1550 Pol
磷酸化蛋白质组学研究获进展
中科院大连化物所生物技术部1809组封顺、叶明亮、邹汉法等人关于新型金属离子固定化亲和色谱固定相应用于磷酸化蛋白质组学的研究成果(Immobilized Zirconium Ion Affinity Chromatography for Specific Enrichment of Phosphop