免疫细胞化学染色操作规程
一、材料和试剂1、玻片:须用免疫组化专用玻片,或用2%多聚赖氨酸包被处理玻片。2、5-10%正常山羊血清封闭液,用PBS配。3、3%牛血清白蛋白(BSA),用PBS配。4、0.01M PH7.4 PBS5、1% BSA-PBS(含0.05% Tween20)6、AEC底物(1)底物缓冲液(20X) PH 4.6醋酸(分子量60.6) 30.6mlTriton -100醋酸钠 3H2O(分子量136.1)66.68克加蒸馏水到960ml,调PH到4.6,最后加蒸馏水到总体积1000ml(2)AEC(20X)AEC 15mg/ml,溶在DMF(二甲基甲酰胺,分子式HCOH(CH3)2 分子量73.10中)(3)0.6% H2O2(20X)临用时,(1)(2)(3)各50ul,在1ml双蒸馏水中混匀30分钟内有效。7、DAB(即DAB-4HCL)(......阅读全文
免疫细胞化学染色操作规程
一、材料和试剂1、玻片:须用免疫组化专用玻片,或用2%多聚赖氨酸包被处理玻片。2、5-10%正常山羊血清封闭液,用PBS配。3、3%牛血清白蛋白(BSA),用PBS配。4、0.01M PH7.4 PBS5、1% BSA-PBS(含0.05% Tween20)6、AEC底物(1)底物缓冲液(20X
酶免疫细胞化学染色操作指南2
2、加3% H2O2,细胞片20ul/孔,培养板100ul/孔,使充分覆盖住细胞。3、室温10分钟后,甩掉 H2O2,用PBS轻轻淋洗2分钟。用滤纸吸干细胞周围水份,96孔在滤水纸上扣干,但注意保持细胞湿润。三、封闭细胞片用5-10%正常山羊血清(20ml/孔),细胞板用2-5%BSA(PBS配制)
酶免疫细胞化学染色操作指南1
一、材料和试剂1、玻片:须用免疫组化专用玻片,或用2%多聚赖氨酸包被处理玻片。2、5-10%正常山羊血清封闭液,用PBS配。3、3%牛血清白蛋白(BSA),用PBS配。4、0.01M pH7.4 PBS5、1% BSA-PBS(含0.05% Tween20)6、AEC底物(1)底物缓冲液(20X)
糖原染色标准操作规程
1. 实验原理过碘酸是氧化剂,使含有乙二醇基(-CHOH—CHOH)的多糖类物质(糖原粘多糖、粘蛋白、糖蛋白及糖脂等)氧化,形成双醛基(—CHO—CHO)。醛基与雪夫试剂中的无色品红结合,使无色的品红变成紫红色化合物,定位于含有多糖类的细胞内。2. 标本采集2.1 病人准备:了解病人是否对局麻药有过
免疫细胞化学染色和免疫荧光有什么区别
同志这不是化学范畴的immunofluorescence technic又名免疫荧光种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术(fluorescentantibodytechnique)。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法;用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称
免疫细胞化学染色和免疫荧光有什么区别
同志这不是化学范畴的immunofluorescence technic又名免疫荧光种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术(fluorescentantibodytechnique)。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法;用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称
免疫细胞化学
Introduction to Immunocytochemistry (House Ear Institute)A brief overview of common available methods. BrDU Immunocytochemistry using peroxidase and
免疫细胞化学术
免疫细胞化学(immunocytochemistry),是将免疫学基本原理与细胞化学技术相结合所建立起来的新技术,根据抗原与抗体特异性结合的点,检测细胞内某种多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子物质的存在与分布。肽类与蛋白质种类繁多,均具有抗原性,当将人或动物的某种肽或蛋白质作为抗原注入另一种
免疫细胞化学-(ICC)
实验概要免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测
免疫细胞化学法
免疫细胞化学是将免疫学基本原理与细胞化学技术相结合所建立起来的新技术,根据抗原与抗体特异性结合的特点,检测细胞内某种多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子物质的存在与分布。
免疫细胞化学法
①直接法:用标记抗体与抗体中的相应抗原直接结合,操作方法简便,特异性高,但敏感性较差,此法可用于检定未知抗原;②间接法:先用未标记的具有特异性的第一抗体与样品中的相应抗原结合,然后再以标记的第二抗体与特异性的第一抗体结合;第二抗体是用第一抗体作为抗原注入另一动物体内诱导产生的抗体,然后再结合以标记物
免疫细胞化学-(ICC)
实验概要免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测
免疫细胞化学方法
1、细胞爬片;2、PBS洗3次×5min;3、4%多聚甲醛固定30min(4度冰箱中);4、3%H2O2 封闭内源性过氧化物酶,室温下10min;5、PBS洗3次×5min;6、10%动物血清封闭,室温下10min;7、甩去血清(不洗),一抗4℃ ;细胞8、PBS洗3次×5min;9、二抗室温下1h
免疫细胞化学常用试剂
一、固定剂 1、4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.3) 2、4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 3、Bouin's液及改良Bouin’s液 4、Zamboni’s(Stefanini‘s)液 5、PLP液 6、Karnovsky's液(pH7.3) 7、0
免疫细胞化学常用试剂
一、固定剂大多数神经激素、肽类物质为水溶性,在用于免疫细胞化学研究之前,常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同,因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此,在进行免疫细胞化学研究之前,很有必要了解所要研究的物质(蛋白质或肽类)
免疫细胞化学常用试剂介绍
一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性,在用于免疫细胞化学研究之前,常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同,因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此,在进行免疫细胞化学研究之前,很有必要了解所要研究的物质(蛋白质或肽
免疫细胞化学法的简介
肽类与蛋白质种类繁多,均具有抗原性,当将人或动物的某种肽或蛋白质作为抗原注入另一种动物体内,则产生与该抗原相应的特异性抗体(免疫球蛋白);将抗体从血清中提出后,结合上某种标记物,即成为标记抗体。用标记抗体与组织切片标本孵育,抗体则与细胞中相应抗原发生特异性结合,结合部位被标记物显示,则在显微镜下
分泌肿瘤免疫细胞化学(3)
三、甲状腺髓样癌 由甲状腺滤泡旁细胞(C细胞)产生的恶性肿瘤。此瘤在光镜下与甲状腺非典型腺瘤、未分化癌及转移癌有时难以鉴别。免疫细胞化学染色可见瘤细胞降钙素阳性反应,降钙素免疫反应物常聚积于瘤细胞核周胞浆中,此项检查具有诊断意义。电镜下,瘤细胞中可见二种分泌颗粒,I型颗粒直径约280nm,含有
免疫细胞化学与图像分析
在细胞生物学中,一个常见的问题是如何获取与细胞功能相关的各种定量测量信息。在免疫细胞化学中也存在同样的问题。制作免疫细胞化学标本环节 较多,只要有一个环节 失误就会影响实验结果,除了需要精制的药品外,还需要熟练的技术。那么,做成了理想的标本后,如何进行观察,才能获得尽量多的的各种定量信息,而且使这些
免疫细胞化学与图像分析
在细胞生物学中,一个常见的问题是如何获取与细胞功能相关的各种定量测量信息。在免疫细胞化学中也存在同样的问题。制作免疫细胞化学标本环节 较多,只要有一个环节 失误就会影响实验结果,除了需要精制的药品外,还需要熟练的技术。那么,做成了理想的标本后,如何进行观察,才能获得尽量多的的各种定量信息,而且使这些
免疫细胞化学常用试剂介绍
一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性,在用于免疫细胞化学研究之前,常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同,因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此,在进行免疫细胞化学研究之前,很有必要了解所要研究的物质(蛋白质或肽
免疫细胞化学法的分类
①直接法:用标记抗体与抗体中的相应抗原直接结合,操作方法简便,特异性高,但敏感性较差,此法可用于检定未知抗原;②间接法:先用未标记的具有特异性的第一抗体与样品中的相应抗原结合,然后再以标记的第二抗体与特异性的第一抗体结合;第二抗体是用第一抗体作为抗原注入另一动物体内诱导产生的抗体,然后再结合以标
中性粒细胞碱性磷酸酶染色标准操作规程
1. 实验原理在PH9.2-9.8的缓冲溶液中,细胞中的碱性磷酸酶能将底物磷酸苯酚钠水解,生成 α-苯酚和磷酸钠,再以稳定的重氮盐与酚偶联成不溶性有色偶氮染料沉淀于胞浆中。2. 标本采集2.1 病人准备:了解病人是否对局麻药有过敏史,凝血因子严重缺陷引起的出血性疾病,穿刺部位有炎症或有畸形,晚期妊娠
UDS流式全自动染色尿沉渣仪操作规程
1. 实验原理通过仪器自动实现取样、染色、清洗、混匀、稀释等动作,显微镜下的图象信息显示在计算机显示器上,可直接进行尿液有形成分的识别工作,并且计算机将尿分析定量板中已统计各有形成分数量自动换算成标准状态下数据,最后把干化学分析和尿沉渣分析的完整系统用真彩色图文报告。2. 标本采集及运送2.1 标本
免疫细胞化学法的技术特点
免疫细胞化学是将免疫学基本原理与细胞化学技术相结合所建立起来的新技术,根据抗原与抗体特异性结合的特点,检测细胞内某种多肽、蛋白质及膜表面抗原和受体等大分子物质的存在与分布。
免疫细胞化学法的技术分类
①直接法:用标记抗体与抗体中的相应抗原直接结合,操作方法简便,特异性高,但敏感性较差,此法可用于检定未知抗原;②间接法:先用未标记的具有特异性的第一抗体与样品中的相应抗原结合,然后再以标记的第二抗体与特异性的第一抗体结合;第二抗体是用第一抗体作为抗原注入另一动物体内诱导产生的抗体,然后再结合以标记物
免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术的分类
1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。 2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。 3)按结合方式
免疫细胞化学常用试剂介绍2
三、显色液 免疫细胞化学中,由于抗原-抗体反应所形成的复合物本身无色,无法直接观察,因而需借助于某些化学基团的呈色作用,使其得以显示,以利于在显微镜下观察。常用的显色液有: 1.DAB(Diaminobenzidine)显色液 DAB即3,3-二氨基苯联胺 试剂:DAB(常用四盐酸盐) 50
免疫细胞化学与图像分析2
六、实例介绍 因为将免疫细胞化学方法与图像分析结合起来进行研究的论文在国内国外都还不多。在第六届国际学术会议上发表的90多篇论文中只有1篇,因此在实例介绍中,包括一部分不是免疫细胞化学方法,而是用其他组织学方法与图像分析结合起来研究,但这种方法对研究免疫细胞化学标本也可借鉴,从中可得到一些启发的
过氧化物酶染色(Washburn法)标准操作规程
1. 实验原理:粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有过氧化物酶,pox能分解H2O2释放出新生氧,使四甲基联苯胺氧化成联苯胺蓝,后者与亚硝基铁氰化钠结合,再进一步氧化形成稳定的蓝色物质,沉淀于酶活性的细胞质内。 2. 标本采集 2.1 病人准备:了解病人是否对局麻药有