PCR污染与对策
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染. (二)PCR试剂的污染:主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染. (三)PCR扩增产物污染.这是PCR反应中最主要最常见的污染问题.因为PCR产物拷贝量大(一般为1013拷贝/ml)，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳就可形成假阳性. 还有一种容易忽视，最可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染；在空气与液体面摩擦时就可形成气溶胶，在操作时比较剧烈地......阅读全文
PCR污染与对策
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污
PCR污染与对策
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生. 一、污染原因 1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样
PCR实验污染与对策
PCR反应的zui大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。一、污染原因1、标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪
PCR的污染与对策
一、污染原因 （一）标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于 密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提 取过程中，由于吸样枪污染导致标本间污染;有些微生物标本尤其是病毒可随气溶胶 或形成气溶胶而扩散，导致彼此间的污染. （二）P
PCR技术（四）：PCR污染与对策
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污 染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生.一、污染原因 (一)标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于 密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染;标本核酸模板在提 取过程中，由
PCR污染及解决对策
聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法，在微生物感染的诊断中具有重要的价值。在PCR扩增过程中，扩增的DNA产量是呈指数上升的，经过n个循环的扩增，一个DNA分子的产量便达到2n个拷贝。PCR产物一般为1013拷贝/
PCR常见问题分析与对策
1.PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 2.假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白
浅谈PCR方法中常见的污染问题及对策
浅谈RT-PCR实验方法中常见污染问题及对策 河南出入境检验检疫局技术中心 李轲 反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以
PCR中常见问题分析与对策
PCR产物的电泳检测时间 一般认为PCR产物应在48h以内完成电泳检测，有些zui好于当日电泳检测，大于48h后带型就会出现不规则，甚至消失。 1 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节
河湖污染现状与治理对策
城市现代化建设脚步不断加快下， 社会生产生活中排放了大量的废水和污水，这些废水和污水如果未经充分处理直接排入到河湖中，将会导致河湖水环境污染，增加好氧有机物含量，甚至出现严重的黑臭问题。所以，需要根据实际情况，寻求合理的河湖治理对策，寻求科学合理的治理对策。通过河湖污染和治理相关研究，了解河湖
PCR技术（五）：常见问题分析与对策
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模
浅谈RTPCR实验方法中常见污染问题及对策
李轲反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技术被广泛应用于人和动物的多种传染病早期诊断。 笔者一直
浅谈RTPCR实验方法中常见污染问题及对策
李轲反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）是一种体外核酸扩增技术，它具有特异、敏感、快速、简便、重复性好、易自动化等突出优点，能在几个小时内完成从一根毛发、一滴血、甚至一个细胞中扩增出足量的目的产物供分析研究和检测鉴定，所以近年来RT-PCR技术被广泛应用于人和动物的多种传染病早期诊断。笔者一直从事实
火电大气污染面临的挑战与对策
尽管中国燃煤发电大气污染物控制技术处于世界领先水平，常规三大污染物（烟尘、SO2、NOx）实现了燃煤电厂与燃气电厂同等清洁，但未来火电发展仍然面临挑战，主要表现在以下6个方面。图片来源于网络 1.温室气体排放量巨大 燃煤发电机组单位发电量产生的CO2排放量约0.76~0.92kg/(kWh)
PCR常见问题及对策
PCR常见问题及对策（一）没有得到扩增产物（1）酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或运输不当而失活，往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。（2）模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸，造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。（3）变性温度是否准确：PCR
重金属污染防治环境标准的现状与对策
近几年来，我国重金属污染事件多发频发。这些事件中有不少排污企业达标排放，却同样引起所在地污染物总量超标，或者当地人体内重金属超过健康标准的现象，其中较为典型的是发生在陕西省凤翔县的铅污染事件。这其中暴露了我国重金属污染防治环境标准制定中存在的诸多问题。 标准制定存在的问题 第一，原则
PCR反应出现非特异性扩增带的原因与对策
PCR 扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带与非特异性扩增带。可能出现的原因有以下几点： 1)引物与靶序列不完全互补或引物聚合形成二聚体; 2)Mg2+离子浓度过高、退火温度过低及PCR循环次数过多有关; 3)其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特
细菌耐药与临床对策
近年来由于抗生素的广泛应用，细菌的耐药问题越来越严重。历史和现实的教训告诉我们：任何一种抗生素一旦问世，很快就会产生耐药株，产生耐药株的时间周期短则几年，长则十几年（表1）。目前，细菌的耐药问题已成为全球的严重问题，为此WHO专门发表了针对细菌耐药问题的专家建议(WHO／CDS／CS
细菌耐药与临床对策
近年来由于抗生素的广泛应用，细菌的耐药问题越来越严重。历史和现实的教训告诉我们：任何一种抗生素一旦问世，很快就会产生耐药株，产生耐药株的时间周期短则几年，长则十几年（表1）。目前，细菌的耐药问题已成为全球的严重问题，为此WHO专门发表了针对细菌耐药问题的专家建议(WHO／CDS／CS
细菌耐药与临床对策
近年来由于抗生素的广泛应用，细菌的耐药问题越来越严重。历史和现实的教训告诉我们：任何一种抗生素一旦问世，很快就会产生耐药株，产生耐药株的时间周期短则几年，长则十几年（表1）。目前，细菌的耐药问题已成为全球的严重问题，为此WHO专门发表了针对细菌耐药问题的专家建议(WHO／CDS／CSR／DRS／20
处理膜污染，有了自清洗对策
南京大学环境学院教授高冠道课题组开发了一种自清洁压电陶瓷滤膜(PiezoMem)，创建了一种利用膜过程中固有水压驱动压电陶瓷滤膜产生压电电压并用于免溶剂清洗膜污染的方法，实现了膜分离过程与抗膜污染过程的统一，为典型膜分离技术面临的共性挑战提供了新策略。近日，相关研究成果以《脉冲水压响应自清洗滤膜》，
水库水质检测污染分析及对策
一、概述水库是大型的水利枢纽工程，修建水库最主要的作用是防洪防汛抗旱，还有供水、灌溉、旅游等其他作用，其中供水也是水库至关重要的作用之一。如果要达到供水标准，就必须符合国家《地表水环境质量标准》中三类标准，如果要达到可供饮用就要达到二类标准。我国有湖北三峡、广西龙滩、青海龙羊峡等758 座大型水库，
PCR拖尾及假阳性的原因及对策
拖尾 现象：产物在凝胶上呈Smear状态。 原因： 1.模板不纯 2.Buffer不合适 3.退火温度偏低 4.酶量过多 5.dNTP、Mg2+浓度偏高 6.循环次数过多 对策： 1.纯化模板 2.更换Buffer 3.适当提高退火温度 4.适量用酶 5.适当降低dNTP
“我国土壤重金属污染问题与治理对策”总结会召开
4月18日，由傅家谟院士主持的中国科学院学部咨询项目“我国土壤重金属污染问题与治理对策”总结会在广州召开。来自中科院南京土壤所、广州地化所、烟台海岸带所以及广东省生态环境与土壤所的咨询项目组专家及成员参加了会议。 与会人员对我国土壤重金属污染的现状、成因与治理对策等进行了讨论，对前期所做大
细菌耐药与临床对策（一）
近年来由于抗生素的广泛应用，细菌的耐药问题越来越严重。历史和现实的教训告诉我们：任何一种抗生素一旦问世，很快就会产生耐药株，产生耐药株的时间周期短则几年，长则十几年（表1）。目前，细菌的耐药问题已成为全球的严重问题，为此WHO专门发表了针对细菌耐药问题的专家建议(WHO／CDS／CSR／DRS／
细菌耐药与临床对策（二）
1.2.2 DNA拓扑异构酶的改变引起喹诺酮类抗生素耐药 喹诺酮类药物的作用机制主要是通过抑制DNA拓扑异构酶而抑制DNA的合成，从而发挥抑菌和杀菌作用。细菌DNA拓扑异构酶有I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，喹诺酮类药物的主要作用靶位是拓扑异构酶Ⅱ和拓扑异构酶Ⅳ。拓扑异构酶Ⅱ又称DNA促旋酶，参与DNA超螺旋的形
PCR污染的监测
一个正规的实验室，要时刻注意监测实验室的污染情况。了解实验室有无污染，污染原因，污染程度，以便采取有效措施，防止和消除污染。一般通过阴阳性对照检测污染情况。1、阴性对照： 不将模板DNA或RNA加入到PCR试剂中，进行PCR扩增，对试剂是否污染进行监测。阴性水样参与核酸提取和扩增监测整个试验
PCR产物污染诱因
PCR反应的zui大特点是不仅具有较大扩增能力而且还有着极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。污染原因（1）标本间交叉污染:标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，
如何预防PCR污染？
进行 PCR 反应时，遵照下列规则有助于防止 PCR 的污染。（1）PCR 的前处理和后处理在不同的房间或不同的隔离工作台上进行。即整个 PCR 操作要在不同的隔离区（标本处理区，PCR 扩增区，产物分析区）进行，特别是阳性对照需在另一个隔离环境中贮存、加入。（2）试剂要分装，每次取完试剂后盖紧
如何避免支原体污染的应对策略
培养细胞时，发现细胞增殖变慢、形态渐渐改变，是血清或培养基的问题吗？很有可能是你的细胞污染了~~~~~支 原 体 污 染细胞污染可分为细菌、霉菌、酵母菌、支原体污染，其中支原体污染发生的概率>50%。支原体(Mycoplasma) 是最小的原核生物，约0.1-0.3μm，可穿透0.22-0.45 μ