SelfcircularizationofLinearDNA
In a microcentrifuge tube prepare a solution of linear DNA (25-50ng) in deionized water or TE buffer (10-35µl).Add:10X ligation buffer 5µl,50% PEG 4000 solution (for blunt ends only) 5µl,deionized water to 50µl,T4 DNA Ligase 5u.Vortex the tube and spin down in a microcentrifuge for 3-5 seconds.Incubate the mixture for 1 hour at 22°C .Inactivate T4 DNA Ligase by heating reaction mixture at 65°C fo......阅读全文
Selfcircularization－of－Linear－DNA
In a microcentrifuge tube prepare a solution of linear DNA (25-50ng) in deionized water or TE buffer (10-35µl).Add:10X ligation buffer 5µl,50% PEG 400
离子阱的线性离子阱(Linear－Ion－Trap)
线性离子阱，结构与四级杆质谱非常相似，由两组双曲线形级杆和两端的两个极板组成。两组级杆中，其中一组施加一个交变电压，另一组施加两个交变电压。在其中一组级杆上开有窄缝，通过改变三组交变电压驱动离子从窄缝射出。线性离子阱的工作原理源自四级杆质谱仪。四级杆质谱仪中，加在两组级杆上的电场表达可以大致的写为：
线性离子阱Linear－Ion－Trap－－的优缺点
传统3D离子阱的增强版本优点：相对于传统3D离子阱，灵敏度高10倍以上多级串级质谱缺点：相对于QQQ，还是不能做MRM、中性丢失等特征基团筛选功能
HPLC的线性动态范围(Linear－Dynanic－RangeLDR)及其测试方法
1)线性动态范围的定义 国际上科技工作者对HPLC的线性动态范围的定义是：最大线性区(保证1%相对误差的线性区域)的吸光度值Amax，除以最小线性区(保证1%相对误差的线性区域)的吸光度值Amin。即LDR=Amax/Amin;或最大线性区的浓度Cmax除以最小线性区的浓度Cmin，即LDR=C
关于三坐标测量仪的开线扫描(Open－Linear－Scan)方式介绍
开线扫描是三坐标测量仪最基本的扫描方式。测头从起始点开始，沿一定方向并按预定步长进行扫描，直至终止点。开线扫描可分为有、无CAD模型两种情况。 (1)无CAD模型 如被测工件无CAD模型，首先输入边界点(Boundary Points)的名义值。打开对话框中的“边界点”选项后，先点击“1”，
关于三坐标测量仪的闭线扫描(Closed－Linear－Scan)方式介绍
三坐标测量仪闭线扫描方式允许扫描内表面或外表面，它只需“起点”和“方向点”两个值(PC DMIS程序将起点也作为终点)。 (1)数据输入操作 双击边界点“1”，在编辑对话框中输入位置；双击方向点“D”，输入坐标值；选择扫描类型(“线性”或“变量”)，输入步长，定义触测类型(“矢量”、“表面”
Transfection－with－PEI
实验概要Use PEI (Linear 25 kDa Reagent) to transfect in HEK293T cells.主要试剂PEI is polyethyleimine, a 25 kDa linear from Polysciences Inc. Make up solutio
分子遗传学词汇线状DNA
中文名称：线状DNA英文名称：linear DNA定 义：DNA的一种构象。同时具有游离3`端和5`端的线性长链DNA分子。应用学科：遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
线状DNA的定义
中文名称线状DNA英文名称linear DNA定 义DNA的一种构象。同时具有游离3`端和5`端的线性长链DNA分子。应用学科遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
线状DNA的结构特点
中文名称线状DNA英文名称linear DNA定 义DNA的一种构象。同时具有游离3`端和5`端的线性长链DNA分子。应用学科遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
细胞化学词汇线状DNA
中文名称：线状DNA英文名称：linear DNA定 义：DNA的一种构象。同时具有游离3`端和5`端的线性长链DNA分子。应用学科：遗传学（一级学科），分子遗传学（二级学科）
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定2
目前应用的两种快速序列测定技术是Sanger等（1977）提出的酶法（双脱氧链终止法）和Maxam（1977）提出的化学降解法。虽然其原理大相径庭，但这两种方法都同样生成相互独立的若干组带放射性标记的寡核苷酸，每组核苷酸都有共同的起点，却随机终止于一种（或多种）特定的残基，形成一系列以某一特定核苷酸
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定3
2．利用末端转移酶和α-32P-ddNTP标记DNA的3ˊ-末端 在二价阳离子存在下，末端转移酶催化dNTP加入DNA分子的3ˊ-羟基末端，如果作为底物的核苷酸经过修饰（如ddNTP），则可以在DNA的3ˊ-OH上仅加入一个核苷酸。对于双链DNA片段，亦存在DNA的两侧均被标记问题，可通过上述同
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA序列测定1
㈣ DNA聚合酶 如前所述，选用合适的DNA聚合酶进行测序反应也是保证测序质量的重要因素之一。常用于双脱氧末端终止法测序的有几种不同的酶： 1．大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ大片段（Klenow片段） 此酶是最早用于建立Sanger测序的酶。但通常会有两个问题：①Klenow片段的持续合成能力较
DNA重组技术(DNA－Recombination)
一、DNA 的酶切与连接（1）酶切反应：同质粒DNA 的鉴定，只不过是质粒DNA 换为载体DNA 。若大量酶切，则成比例增加。（2）加2倍体积的预冷无水乙醇和1/10体积的3mol/l NaAc混匀，-20℃2h以上。（3）15000rpm离心15min，弃上清。（4）加入75%乙醇洗涤2次，离心弃
关于核酸和蛋白的一些换算
一，Spectrophotometric Conversions1 A260 unit of double-stranded DNA=50 µg/ml1 A260 unit of single-stranded DNA=33 µg/ml1 A260 unit of single-stranded R
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体2
二、噬菌体载体作为细菌寄生物的噬菌体，大多数具有编码多种蛋白质的基因，能利用宿主细胞的蛋白质合成体系，进行生长和增殖。构建的噬菌体载体，以λ噬菌体、M13和粘粒最为常用。㈠ λ噬菌体载体野生型λDNA是一种基因组为4.8 kb的线性双链DNA，全部序列已知，共编码50多个基因。其中约一半基因参与
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定2
（1）CaCl2处理以后的转化: 当细菌处于0℃、二价阳离子（如Ca2+、Mg2+等）低渗溶液中时，细菌细胞膨胀成球形，处于感受态；此时转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙磷酸复合物粘附于细胞表面，重组DNA在42℃短时间热冲击后吸附在细胞表面，在丰富培养基中生长数小时后，球状细胞恢复原
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体3
在作为载体时，这些噬菌体有一个很大的优点，即克隆到M13mp载体的外源DNA片段（双链），在子代噬菌体便成为了单链形式。故应用M13mp进行克隆，可方便地分离到大量含有外源DNA某一单链的DNA分子。这种单链DNA可在下列工作中作模板：①主要用作双脱氧链终止法进行DNA序列测定的模板；②制备仅有一条
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组的载体1
载体（vector）是携带靶DNA（目的DNA）片段进入宿主细胞进行扩增和表达的运载工具。常用的载体是通过改造天然的细菌质粒、噬菌体和病毒等构建而成。目前已构建成的载体主要有质粒载体、噬菌体载体、病毒载体和人工染色体等多种类型，亦可根据其用途不同分为克隆载体和表达载体二类。载体的构建和选择应考虑以下
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定1
重组DNA是在体外用限制性内切酶，将不同来源的DNA分子进行特异地切割，获得的目的基因或DNA片段与载体重新连接，从而组成一个新的DNA杂合分子。重组的DNA分子能够通过一定的方式进入相应的宿主细胞，在宿主细胞中进行无性增殖，获得大量的目的基因或DNA片段，此过程称基因克隆。重组的DNA分子也能够在
DNA重组（DNA－recombination）技术：DNA重组与鉴定3
当多克隆位点有外源DNA片段插入时，破坏此酶的N端阅读框架，产生无α互补功能的N端片段，因此在带有外源DNA片段的细菌在含有IPTG/X-gal的培养基上呈白色，见图7-11 。如果外源DNA插入片段相当短，不破坏β-半乳糖苷酶的氨基端氨基酸序列的阅读框，有时产生的重组体菌落不呈白色而是呈浅蓝色。4
General－Reference
Units1 mg = 10-3 g1 ug = 10-6 g1 ng = 10-9 g1 pg = 10-12 g1 kb of double stranded DNA = 660 kD 1 kb of single stranded DNA = 330 kD 1 kb of single str
DNA合成（DNA－synthesis－）技术介绍
蛋白质概念提出：DNA多肽合成（DNA synthesis ）：按照预定核苷酸的顺序，将脱氧核苷酸逐个进行人工连接合成DNA链的方法。目前多是采用固相合成法，即是在多聚体支持物上从3′端延伸核苷酸，可自动化操作。)目前，oligo DNA合成一般都采用固相亚磷酰胺三酯法合成DNA片段，此方法具有高效
Sitedirected－Mutagenesis－using－PCR
Site-directed Mutagenesis using PCRMichael P. Weiner, Tim Gackstetter, Gina L. Costa, John C. Bauer, and Keith A. KretzFrom: Molecular Biology: Curren
T载体的制作和应用
Also see DNA Cloning§ Making TA Vector (Crawford Lab)T-vectors are linear-blunt-ended plasmids with a few dT's added on by Taq polymerase.
荧光测DNA浓度
Steve HahnLast updated 9/30/98This Dye measures DNA concentration using a fluorescent dye which binds only double stranded DNA. The fluorescence of th
DNA－指纹的概念高变区DNA与DNA指纹
人的卫星DNA 或称随体DNA 是由一些短的DNA 片段（10bp 左右）多次重复所构成的。重复片段的组成和拷贝数在不同的个体及基因组的不同位置上不一样。提取不同个体的基因组DNA 后，用其切点能识别序列为4 个碱基而又不切割该重复片段的限制性内切酶在重复片段的两侧切割基因组DNA ，然后将样品进行
DNA微序列技术
· Protocols for Making Drosophila Arrays (Stanford U.)Detailed protocol for making arrays including PCR Amplification of cDNAs for Printing,
光法测定DNA浓度
Measurement of DNA concentration using PanVera fluorescence assaySteve HahnLast updated 9/30/98This Dye measures DNA concentration using a fluorescent