Northernblot实验技术
一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳，因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H＋梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller，1987），但用含朋乙二醛－DMSO的凝胶对RNA进行分级离，通常Northern杂交所显示的RNA条带更为锐利。1、在灭菌的微理离心管内，混匀下列液体：6mol/L乙二醛 5.4μlDMSO 16.0μl0.1mol/L磷酸(pH7.0) 3.0μlRNA（多达10μl） 5.4μl市售乙二醛通常为40％溶液（6mol/L）。由于接触空气的后乙二醛易于氧化，所以使用前需通过混合床树脂（Bio-Rad AG 501-X8 对乙三醛溶液进行去离子处理，直至溶液pH值大于5.0为止，然后可分装在小份，用盖紧的小管贮存于－20℃。每小份......阅读全文
southern杂交与northern杂交的区别
研究的对象不同。southern主要的对象是DNA，northern研究的对象是RNA。Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上。
总RNA提取与Northern杂交（2）
4、Loading buffer（10ul每个样） 总体积 100ul 200 ul 500ul 10×MOPS
Multiple－Tissue－Northern－(MTN#8482;)Blots
人、小鼠和大鼠的多种组织来源的高质量mRNA,经电泳分离后预转于尼龙膜上预制的即用型Northern杂交膜，免去RNA电泳操作过程可检测范围：0.5-10kb可重复使用提供ExpressHybTM快速杂交液样品可靠的优良品质从1991年始，公司就向广大的生命科学研究者提供高质量的预制杂交膜。而MTN
总RNA提取与Northern杂交（3）
第二天：将上述物品揭开，将胶正面朝下，膜正面朝上，用铅笔作好标记。将胶浸泡在EB中1-2分钟，用DEPC H2O清洗，将膜放在滤纸上面，夹好，4度下保存，或者直接进行预杂交。UV杂交（有助于RNA结合到膜上面）。五、预杂交和杂交预杂交和杂交 buffer： 100ul20×SSC 25ml （5×S
southern杂交与northern杂交的区别
研究的对象不同。southern主要的对象是DNA，northern研究的对象是RNA。Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上。
Northern杂交技术的方法和步骤
Northern杂交与Southern杂交很相似。主要区别是被检测对象为RNA,其电泳在变性条件下进行,以去除RNA中的二级结构,保证RNA完全按分子大小分离。变性电泳主要有3种:乙二醛变性电泳、甲醛变性电泳和羟甲基汞变性电泳。电泳后的琼脂糖凝胶用与Southern转移相同的方法将RNA转移到硝酸纤
northern,southern,western杂交的具体步骤
所用于分析的对象不同。 Northern杂交用于分析RNA； Southern杂交用于分析DNA； Western杂交用于分析蛋白质。大致过程如下： (1) 酶切DNA, 凝胶电泳分离各酶
southern\northern\eastern\western各是什么原理
southern：用DNA作为探针杂交DNA。检测目标DNA的存在与否northern：用DNA或RNA探针杂交RNA。检测目标RNA的存在与否western：用抗体和目的蛋白结合进行杂交。检测目标蛋白的存在与否。没有eastern杂交。少数人提议将IEF胶(即等电聚焦电泳)中的蛋白质转印到膜上的技
分子杂交技术Northern杂交的操作步骤
(1)RNA经变性电泳完毕后,可立即将乙醛酰RNA转移至硝酸纤维素滤膜上。转移方法与转移DNA的方法相似。 (2)转移完毕后 ,以6×SSC溶液于室温浸泡此膜5分钟,以除去琼脂糖碎片。 (3)将该杂交膜夹于两张滤纸中间,用真空烤箱于80℃干燥0.5-2小时。 (4) 用下列两种溶液之一进行
Northern杂交试验指导手册（1）－RNA提取
方法一、改良异硫氰酸胍提取法试剂及其配制异硫氰酸胍变性液：贮存液－在含484ml 水（经DEPC处理）, 17.6ml 0.75mol/L柠檬酸钠（pH7.0）和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入250g异硫氰酸胍，加热至60~65℃并持续搅拌使之充分溶解。贮存液室温保存备用（不超过3个
Northern杂交试验指导手册（5）－RNA探针制备
五、RNA探针制备（根据the DIG system user's guide）A． 地高辛标记的体外转录试剂及其配制（试剂盒提供）：10× NTP标记混合物：in Tris-HCl (pH 7.5)10mmol ATP10mmol CTP10mmol GTP6.5mmol UTP3.5mm
Northern杂交试验指导手册（2）－RNA质量检测
二、RNA质量检测提取的RNA需要对其质量和数量进行检测。实验室常用的方法有紫外吸收值检测和电泳检测两种。方法一、紫外吸收检测试剂：TE ( 10mmol/L Tris, 1mmol/LEDTA)。dH2O试验程序1．预热紫外分光光度计10～20min.。2．取两个1ml的狭缝石英杯，一个装入1ml
分子杂交技术Northern杂交的注意事项
(1)如果琼脂糖浓度高于1%，或凝胶厚度大于0.5cm，或待分析的RNA大于2.5kb,需用0.05mol/LNaOH浸泡凝胶20分钟,部分水解RNA并提高转移效率。浸泡后用经DEPC处理的水淋洗凝胶,并用20×SSC浸泡凝胶45分钟。然后再转移到滤膜上。 (2)在步骤(3)的操作中，如果滤膜
Northern杂交试验指导手册（4）－模板DNA的制备
A．质粒DNA的小量提取试剂及其配制含AP的LB液体培养基TE缓冲液：10mmol/L Tris-HCl (pH 8.0)1mmol/L EDTA (pH 8.0)溶液I： 25mmol/L Tris-Cl (pH 8.0)10mmol/L EDTA50mmol/L 葡萄糖高压灭菌15min.后，4
Northern－Blot实验仪器试剂和方法步骤（1）
[仪器、试剂、材料]（一）仪器恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶，等。（二）材料总RNA样品或mRNA样品，探针模板DNA(25 ng)，尼龙膜（三）试剂No
Northern杂交试验指导手册（7）－杂交结果检测
方法一、化学发光检测试剂及其配制：洗膜缓冲液：100mmol Maleic acid150mmol NaCl0.3%(v/v) Tween20pH 7.5Maleic acid缓冲液：100mmol Maleic acid150mmol NaClpH 7.5封闭液：5% (w/v) SDS17mmo
Northern－Blot实验仪器试剂和方法步骤（2）
7.探针的制备1.在1.5ml离心管中配制以下反应液：模板DNA(25 ng) 1ulRandom Primer 2ul灭菌水 11ul总体积：14ul2.95°C加热3分钟后，迅速放置于冰冷却5min。3.在离心管中按下列顺序加入以下溶液：10×Buffer 2.5uldNTP Mixtu
核酸杂交技术(Northern－Blot、Southern－Blot和探针标记）
（一）Southern Blot原理：将待检测的DNA分子用/不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进
Northern－Blotting转印实验（毛细管转移法）
要进行Northern杂合反应前，必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸（nitrocellulose membrane） 或尼龙膜 （nylon membrane） 上，这一个过程称为转印 （blotting）。 一般常用的方法包括毛细管转移法 （capillary transfer）、
Northern杂交、Southern杂交和Western杂交有什么区别
区别：研究的对象不同。southern主要的对象是DNA，northern研究的对象是RNA，而western研究的对象为蛋白质。1、Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段
Northern杂交、Southern杂交和Western杂交有什么区别
区别：研究的对象不同。southern主要的对象是DNA，northern研究的对象是RNA，而western研究的对象为蛋白质。1、Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段
Northern杂交、Southern杂交和Western杂交有什么区别
区别：研究的对象不同。southern主要的对象是DNA，northern研究的对象是RNA，而western研究的对象为蛋白质。1、Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段
核酸蛋白转移电泳及杂交（Southern－Blot、Northern－Blot和...1
一、DNA Southern Blot及杂交 本技术可用于基因组DNA特定序列定位，尤其可分析某些基因的限制性内切酶长度多态性，对遗传性疾病的早期基因诊断、产前诊断或基因变异等方面的研究有应用价值，其过程包括：样品DNA内切酶水解、水解片断的琼脂糖凝胶电泳分离、分离后水解片断的转移(固定)、特异
Northern杂交法对mRNA的检测、分析及定量的方法
方法：Northern杂交目标RNA的类型：mRNA同时定量的目标RNA的数量：通常为一个，最多几个。用途：主要用于估测不同组织、细胞中目标mRNA的分子质量，可用于mRNA的粗略定量。缺点：需要大量RNA；只可同时检测一个或最多几个mRNA；与PCR方法相比，灵敏度差、耗时。
核酸蛋白转移电泳及杂交（Southern－Blot、Northern－Blot和...2
(10)倒去预杂交液，加入含探针的杂交液封口，42℃ 6h或过夜。 (11)取出转移膜，按以下条件洗膜 1×SSC，0.1%SDS室温2×15分钟 0.25SSC，0.1%SDS,42℃ 2×15分钟，气中干燥。 (12)将杂交后的膜曝光于X光片，暗盒中放射自显影2～
Northern杂交操作步骤和DNA探针的制备与标记（1）
一．原理Northern 杂交是用来测量真核生物RNA的量和大小估计其丰度的实验方法，可以从大量的RNA样本同时获得这些信息。其基本步骤包括：1. 完整mRNA的分离2. 根据RNA的大小通过琼脂糖凝胶电泳对RNA进行分离3. 将RNA 转移到固相支持物上，在转移的过程中，要保持RNA 在凝胶中的相
Northern杂交操作步骤和DNA探针的制备与标记（2）
(4) 将1 ~ 2 μl RNA 上样缓冲液加到乙二醛化的RNA 样品中，然后马上把RNA样品加到凝胶加样孔中，留着两边最外面的两个孔不要加样。将RNA 相对分子质量标准参照物加到最外面的孔中。(5) 以5V/cm 的电压进行电泳，直到溴酚蓝迁移大约8 cm。(6) 将凝胶放在保鲜膜上，在紫外灯下
Northern印迹和总RNA杂交实验——杂交和放射自显影
实验材料mRNA试剂、试剂盒甲酰胺SSPEDenhardt 试剂SDS仪器、耗材滤膜实验步骤1. 滤膜进行 1~2 小时预杂交。在 42℃：50% 甲酰胺5x SSPE2 x Denhardt 试剂0.1% SDS或者在 68℃：6x SSC2x Denhardt 试剂0.1% SDS2. 把已变性
分子生物学里的Northern－Southern杂交的原理
①Southern印迹杂交：用于分析DNA,包括两个主要过程：一是印迹,即将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上；二是退火,与固定于膜上的同位素标记的探针进行分子杂交,并进行显影观察,这样即可查找所需DNA的位点.②Northern印迹杂交：将RNA从琼
牛津纳米孔收购加拿大Northern－Nanopore－扩张固态纳米孔领域
近日，牛津纳米孔技术公司（Oxford Nanopore）表示收购加拿大生物技术初创公司Northern Nanopore Instruments（NNi），这家公司开发了一种固态纳米孔制造技术。 本次收购没有披露财务条款。 据Oxford Nanopore介绍，NNi专门从事低成本、精确的