Northernblot实验技术
一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳，因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H＋梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller，1987），但用含朋乙二醛－DMSO的凝胶对RNA进行分级离，通常Northern杂交所显示的RNA条带更为锐利。1、在灭菌的微理离心管内，混匀下列液体：6mol/L乙二醛 5.4μlDMSO 16.0μl0.1mol/L磷酸(pH7.0) 3.0μlRNA（多达10μl） 5.4μl市售乙二醛通常为40％溶液（6mol/L）。由于接触空气的后乙二醛易于氧化，所以使用前需通过混合床树脂（Bio-Rad AG 501-X8 对乙三醛溶液进行去离子处理，直至溶液pH值大于5.0为止，然后可分装在小份，用盖紧的小管贮存于－20℃。每小份......阅读全文
Northern杂交试验指导手册
Northern杂交试验指导手册DIG标记的Northern杂交试验指导一、 RNA提取方法一、改良异硫氰酸胍提取法试剂及其配制异硫氰酸胍变性液：贮存液－在含484ml 水（经DEPC处理）, 17.6ml 0.75mol/L柠檬酸钠（pH7.0）和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入25
Northern－protocol(RULES－FOR－RNA－WORK)
1. Wear gloves at all time including filling pipet tip in racks, filling jars with Eppendorf tubes, and weighing chemicals to prepare solution
组织印迹的Northern杂交
组织印迹的Northern杂交1）硝酸纤维素膜或尼龙膜上的组织印迹1．在塑料板上放置两层Whatman 1号滤纸，在滤纸上方放上一张普通纸，然后铺上一层尼龙膜。2．用双面刀片从植物组织如大豆的茎上切取一块切片（厚度约为1mm）。如果组织表面是湿的，则在Kimwipes纸上轻轻吸干或先用蒸馏水洗涤几秒
我作NORTHERN的心得
我们试验室作NORTHERN的一些总结，欢迎指正，谢谢。Northern杂交准备物品：50ml量筒1个 100ml量筒1个 300ml烧杯1个 250ml 烧杯1个 250ml的锥形瓶1个 10ml 离心管2个 大小盘各1个 镊子1把 剪刀1把 DEPC水500ml 2，瓶玻璃棒1根 电泳槽、转膜槽
Northern－Blotting反应方法步骤
Northern杂合反应的步骤主要包括：（1） 加入核酸探针，使与固定于尼龙膜上的特定RNA 进行杂合反应；（2） 待杂合反应结束后以含盐缓冲液与SDS 洗掉非专一性结合于尼龙膜上的核酸探针。 进行反应时应注意下列几个问题：a. 实验操作过程仍应尽可能避免RNase 的污染；b. 反应前应先进行杂合
Northern杂交分析操作步骤
【操作】1．RNA的提取见前。2．变性胶的制备：取琼脂糖0.2g，加入 DEPC H2O 12.4ml，加热熔化，冷却至 60℃时加入5×甲醛凝胶电泳缓冲溶液4.0 、37%甲醛3.6ml、混匀、制胶。待胶凝固后，置于1×甲醛凝胶电泳缓冲溶液中预电泳5min。3．样品制备 取总RNA4.5 ，加入5
Northern－Blotting－实验操作指南
实验概要本文介绍了Northern Blotting实验详细操作流程。实验材料1. 试剂盒提供NorthernMax (Formaldehyde-Based System for Northern Blots)[Catlog#1940]6ml -20℃ Formaldehyde Loa
Northern杂交步骤和过程
Northern杂交与Southern杂交很相似。主要区别是被检测对象为RNA,其电泳在变性条件下进行,以去除RNA中的二级结构,保证RNA完全按分子大小分离。变性电泳主要有3种:乙二醛变性电泳、甲醛变性电泳和羟甲基汞变性电泳。电泳后的琼脂糖凝胶用与Southern转移相同的方法将RNA转移到硝酸纤
Northern－blot实验方法
Northern blot 是一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法，通过northernblot的方法可以检测到细胞在生长发育特定阶段或者胁迫或病理环境下特定基因表达情况。Northern blot 首先通过电泳的方法将不同的RNA分子依据其分子量大小加以区分，然后通过与特定基因
Northern－Blot实验方法
[仪器、试剂、材料]（一）仪器恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶，等。 （二）材料总RNA样品或mRNA样品，探针模板DNA(25 ng)，尼龙膜（三）试剂N
分子杂交——Northern基因检测
实验概要Northern杂交采用琼脂糖凝胶电泳，将分子量大小不同的RNA分离开来，随后将其原位转移至固相支持物（如尼龙膜、硝酸纤维膜等）上，再用放射性（或非放射性）标记的DNA或RNA探针，依据其同源性进行杂交，最后进行放射自显影（或化学显影），以目标RNA所在位置表示其分子量的大小，而其显影强度则
Northern杂交试验指导手册(3)
试验程序1.在纯净工作台上将5ml含AP的LB液体培养基加入到一10~15ml通气良好的试管中，然后将前述经鉴定含有目的 DNA片断的转化细菌接种其中，37℃下振荡培养过夜。2.取1.5ml培养物置于一微量离心管中，在4℃下12000rpm离心2min.，弃去上清液，使细菌沉淀尽可能干燥。3.将细菌
Northern杂交试验指导手册（3）
A． 载体选择为了获得能够在体外转录RNA探针的DNA模板，其克隆载体必须带有可供选择的特异转录启动子，同时，为了获得理想的Northern杂交试验结果，载体选择带有两种不同类型而方向相反启动子的载体，以便在RNA探针制备时同时得到两条链的转录探针。常用的这类载体有：pGEM-3/pGEM-4 (
Northern杂交试验指导手册(1)
一、RNA提取方法一、改良异硫氰酸胍提取法试剂及其配制异硫氰酸胍变性液：贮存液－在含484ml 水（经DEPC处理）, 17.6ml 0.75mol/L柠檬酸钠（pH7.0）和26.4ml10%Sarkosyl的溶液中加入250g异硫氰酸胍，加热至60~65℃并持续搅拌使之充分溶解。贮存液室温保存备
Northern的杂交有哪些过程
Northern杂交的总体过程与Southern杂交相似，只不过在印迹（Blotting）过程中转移的是RNA而不是DNA，这种将RNA样品从凝胶转移滤膜的方法，其设计者为之起了一个与Southern：blotting对应的名称Northern：blotting。其分子杂交过程与Southern分子
Northern的杂交有哪些过程
Northern杂交的总体过程与Southern杂交相似，只不过在印迹（Blotting）过程中转移的是RNA而不是DNA，这种将RNA样品从凝胶转移滤膜的方法，其设计者为之起了一个与Southern：blotting对应的名称Northern：blotting。其分子杂交过程与Southern分子
Northern－blot实验操作步骤（1）
一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳这一方法原于McMaster和Carmichael（1977）。含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳，因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H+梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller
Northern－Blot实验方法步骤
实验概要本文介绍了Northern Blot实验仪器试剂和方法步骤。实验原理在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。主要试剂1. NorthernMax
Northern的杂交有哪些过程
Northern杂交的总体过程与Southern杂交相似，只不过在印迹（Blotting）过程中转移的是RNA而不是DNA，这种将RNA样品从凝胶转移滤膜的方法，其设计者为之起了一个与Southern：blotting对应的名称Northern：blotting。其分子杂交过程与Southern分子
Northern－blot实验操作步骤（2）
二、将变性RNA转移至硝酸纤维素滤膜电泳完毕后，可立即将乙醛酰RNA自琼脂糖凝胶转移至硝酸纤维素滤膜，有以下几种转移方法：毛细管洗脱法、真空转移法和电印迹法。毛细管洗脱法如下所述， 真空转移法和印迹法则按有关仪器生产厂家产品说明书进行。尽管有人认为在转移前对琼脂糖凝胶进行预处理实属不必（Th
Northern的杂交有哪些过程
Northern杂交的总体过程与Southern杂交相似，只不过在印迹（Blotting）过程中转移的是RNA而不是DNA，这种将RNA样品从凝胶转移滤膜的方法，其设计者为之起了一个与Southern：blotting对应的名称Northern：blotting。其分子杂交过程与Southern分子
Northern杂交试验指导手册(2)
RNA样品质量分析：完整的总RNA样品应呈现出三条条带，分别为28S rRNA、18S rRNA、5S rRNA。其中28S rRNA条带的亮度应约为18S rRNA条带亮度的2倍，这表明RNA样品比较完整，基本无降解。如果两条带的亮度反过来，则说明RNA样品已发生降解。如果在点样槽内或槽附近有
Northern杂交试验指导手册(4)
8.将样品测试条和对照测试条按下列顺序在上述准备的溶液中浸渍处理，两步骤直接让多余的溶液滴在吸水纸上。①. 封闭， 2min.→②. 抗体结合， 3min.→①. 封闭， 1min.→③. 洗膜, 1min. →④. 平衡， 1min. →⑤. 显色反应（黑暗），5－30min.9.显色反应30mi
Northern杂交试验指导手册(5)
E.杂交建议杂交条件：探针浓度50~100ng/ml，温度68℃过夜。1.将印迹膜置于装有预杂交液的杂交袋中（每100cm2膜20ml预杂交液），封好杂交袋，在设定的杂交温度下预杂交至少1小时。2.将探针在沸水浴中变性10min.(探针一经变性，立即使用)，用预杂交液稀释成设定浓度。3.将杂交袋中
总RNA提取与Northern杂交（2）
4、Loading buffer（10ul每个样） 总体积 100ul 200 ul 500ul 10×MOPS
Northern印迹和总RNA杂交实验
试剂、试剂盒 甲醛凝胶溶液RNA 电泳缓冲液仪器、耗材 凝胶模梳齿凝胶用具实验步骤 1. 用肥皂和水彻底清洗凝胶模，梳齿和凝胶用具。2. 准备甲醛凝胶溶液。甲醛凝胶溶液（300 ml 1％ 琼脂糖凝胶）：琼脂糖，3.0 g10x RNA 电泳缓冲液，30 ml Milli-Q 或用玻璃器皿蒸
培养细胞中RNA检测－Northern－Blot
培养细胞中RNA检测－Northern Blot1．制胶：（1％）琼脂糖 2.5g10×Mops缓冲液 25.0mlH2O 192.0ml2．在微波炉中加热煮沸使胶完全溶于水并灭菌。3．取出胶冷却到60℃，于通风柜中加45ml甲醛，混匀。
Multiple－Tissue－Northern－(MTN#8482;)Blots
人、小鼠和大鼠的多种组织来源的高质量mRNA,经电泳分离后预转于尼龙膜上预制的即用型Northern杂交膜，免去RNA电泳操作过程可检测范围：0.5-10kb可重复使用提供ExpressHybTM快速杂交液样品可靠的优良品质从1991年始，公司就向广大的生命科学研究者提供高质量的预制杂交膜。而MTN
Northern印迹和总RNA杂交实验
Northern印迹分析 杂交和放射自显影 试剂、试剂盒 甲醛凝胶溶液 RNA 电泳缓冲液
Northern印迹和总RNA杂交实验
Northern印迹分析杂交和放射自显影试剂、试剂盒甲醛凝胶溶液 RNA 电泳缓冲液