应用多重PCR方法鉴定RHD基因型的研究(2)
2结果 2.1多重PCR方法的反应结果应用多重PCR方法可以鉴定不同的RHD基因型(图2)。根据扩增条带判断结果，D/d型：目标条带为3条，分别为208bp、263bp和1920bp;d/d型：目标条带为2条，分别为208bp和1920bp;D/D型：目标条带为2条，分别为208bp和263bp;DEL/d：目标条带为4条，分别为102bp、208bp、263bp和1920bp;由图2可知，本实验室所建立的实验方法，具有简便直观，鉴定准确的特点，可以检测出人类RHD基因型，包括D/D、D/d、DEL、DEL/d和d/d基因型，适于大样本量的筛选和检测。图2多重PCR方法检测RHD基因型的电泳图 Fig.2 Electrophoretogram of RHD genotypes by the multiplex PCRM：Marker(DL2000)，购自TaKaRa公司;1、2：INNO-TRAIN公司的标准物，1为D/......阅读全文
多重PCR反应中关键因素和实验步骤
多重 PCR反应的基本原理DNA 引物（步骤 1 和 2 ） . 引物的选择遵从简单的规则：引物长度为 18-24bp 或更长， GC 含量为 35%-60% ，退火温度 55 ℃ -58 ℃或更高。长些的引物（如 DMD 基因的引物， 28-30bp ）使反应在更高的退火温度下进行并产生较少的非特
多重PCR反应的优化方向反应条件的优化
由于在一个多重PCR反应体系中有多对引物,而且扩增的模板片段长度也不尽相同,所以各对引物的扩增效率和扩增速度也不相同。由于多重PCR反应总是遵循较小片段优先扩增的原则,各对引物所要求最佳PCR条件也不尽相同(设计多对引物进行多重PCR时,应使各引物所需PCR扩增条件尽可能一致),因此在选择多重PCR
运用多重－PCR－检测营养不良基因缺失实验
实验材料 反应混合物A、B 和 C 试剂、试剂盒 Taq DNA 聚合酶 DNA 模板 石蜡油
多重PCR反应中关键因素和实验步骤（1）
O. Henegariu, N.A. Heerema, S.R. Dlouhy, G.H. Vance and P.H. VogtIndiana University, Indianapoils, IN, USA and Heidelberg University, Heidelberg, Germ
运用多重－PCR－检测营养不良基因缺失实验
本单元所讲的是用来诊断营养不良基因缺失的一种多重 PCR 方法。许多缺失末端能被确定，依据翻译可读框的结果来预测疾病（如 DMD 与 BMD) 的严重程度。实验材料反应混合物A、B 和 C试剂、试剂盒Taq DNA 聚合酶DNA 模板石蜡油溴化乙锭的微型琼脂糖胶电泳缓冲液10 X 胶用载样缓冲液仪器
多重PCR反应中关键因素和实验步骤（3）
多重 PCR反应循环条件的优化延伸温度（步骤 5 ， A-C ） . Figure 2c 展示了当加入相等量 (0.4 μM each) 的四种用于扩增 Y 染色体上不同基因的引物进行多重 PCR 时，用程序 A 和程序 B 扩增得到的结果 (Table 2) ，程序 B 有更高的延伸温度 (72
多重PCR反应中关键因素和实验步骤（二）
多重 PCR反应的基本原理DNA 引物（步骤 1 和 2 ） . 引物的选择遵从简单的规则：引物长度为 18-24bp 或更长， GC 含量为 35%-60% ，退火温度 55 ℃ -58 ℃或更高。长些的引物（如 DMD 基因的引物， 28-30bp ）使反应在更高的退火温度下进行并产生较
多重PCR反应中关键因素和实验步骤（2）
多重 PCR反应的基本原理DNA 引物（步骤 1 和 2 ） . 引物的选择遵从简单的规则：引物长度为 18-24bp 或更长， GC 含量为 35%-60% ，退火温度 55 ℃ -58 ℃或更高。长些的引物（如 DMD 基因的引物， 28-30bp ）使反应在更高的退火温度下进行并产生较少的非特
多重PCR反应中关键因素和实验步骤（4）
琼脂糖凝胶与聚丙烯酰胺凝胶琼脂糖 . 长度彼此相差 30–40bp 的多重 PCR 产物在通常使用的 SeaKem 或 NuSieve(FMC BioProducts) 3% 的琼脂糖凝胶可以很好的区分开。在低电场强度下过夜电泳可以优化每个 PCR 产物条带的电泳效果，特别是当 PCR 产物小于 4
Luminex－MultiCode－RTx－技术解析——如何进行多重PCR检测？
本周 Diasorin 索灵18亿美金收购Luminex的确引起蛮大轰动和反响，luminex自身老牌企业科研和诊断通吃，免疫和分子通吃。四大技术加持，今天我们先看看MultiCode®，如何实现独家ZL的多重PCR检测！Luminex的 MultiCode® 产品为基于实时PCR和多重 PCR 的
多重PCR反应中关键因素和实验步骤（三）
dNTP和MgCl 2 的浓度（步骤 5D）.dNTP. 用引物混合物 Y-4 检测了多重 PCR 反应中 dNTP 浓度的影响。氯化镁浓度保持恒定 (3 mM) ，而 dNTP 的浓度从每种 50 μ M 逐渐增加到每种 1200 μ M(Figure 4b) 。当 dNTP 浓度为每种
多重PCR反应中关键因素和实验步骤（一）
O. Henegariu, N.A. Heerema, S.R. Dlouhy, G.H. Vance and P.H. VogtIndiana University, Indianapoils, IN, USA and Heidelberg University, Heidelberg, Germ
第二章：4－分钟教你学会多重－PCR－引物设计
多元 PCR (多重PCR，Multiplex PCR，MPCR) 是指在一个 PCR 反应中使用一个模板和几对引物同时扩增多个目的片段的 PCR 反应。这项技术非常有用，他不仅可以提高 PCR 的产率还能提高 DNA 样品的利用率。另一种形式的 MPCR 是组合 PCR, 组合 PCR 是在同一
多重PCR在遗传病诊断方面的应用基因重排
免疫球蛋白( immunoglobulin,Ig)和T细胞受体( T cell receptor,TCR)位点包含很多不同的V、D、J基因片段,参与早期白细胞分化的重排过程。VDJ片段重排由重组酶复合体介导,其中RAG1和RAG2蛋白通过识别、切割DNA重组信号序列( recombinatio
菌落PCR（Colony－PCR）方法
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。建议使用载体上的通用引物。通常利用此方法进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用引物之间的插入片断大小。具体方法：1、PCR混合物的制备T
多重PCR在遗传病诊断方面的应用抗性基因检测
抗生素的广泛使用导致具有耐药性微生物的增多,比如耐甲氧西林金黄色葡萄球菌( methi-cillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)、万古霉素抗性肠球菌( vancomycin resistant enterococcl)和多重耐药结核分枝杆菌( mu
其它PCR方法
· Standard PCR Protocol (Molecular Biology Techniques Manual)The followings are described in detailRecommended Reagent ConcentrationsRecommend
PCR检测方法
PCR反应的zui大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。污染原因一、标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染
PCR技术（十）：PCR产物克隆方法
平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效 率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能 在两6条DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为 3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由于PCR
菌落PCR（Colony－PCR）具体方法
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。建议使用载体上的通用引物。通常利用此方法进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用引物之间的插入片断大小。具体方法：1、PCR混合物的制
基于－PCR－的基因分型实验——无放射性的多重分析SSLP
实验材料模板DNA试剂、试剂盒10XPCR扩增缓冲液混合引物Taq DNA 聚合酶轻矿物油Qiaex Gel Extraction Kit (Qiagen）2X 甲酰胺载样缓冲液M13序列泳道内标TBE 缓冲液预杂交液地高辛标记的探针Oligo 清洗缓冲液阻滞液碱性磷酸盐连接的抗地高辛Fab片段检测
多重PCR中的常见问题长片段产物条带较弱如何处理？
①增加延伸时间; ②增加退火和/或延伸温度 ；③增加弱条带相对应的引物浓度;④降低缓冲液浓度至0.7×~0.8×,同时保持MgCl2浓度1.5~2mmol/1L不变; ⑤同时应用以上4种策略
多重PCR中的常见问题出现非特异产物如何处理？
①若非特异产物是长片段,增加缓冲液浓度至1.4×~2.0×;②若是短片段,降低缓冲液浓度至0.7×~0.9×; ③逐渐增加退火温度；④减少模板和聚合酶的用量; ⑤增加Mg2至3mmol/L、6mmol/L、9mmol/L、12mmol/L-,同时保持dNTP浓度恒定在200umol/L: ⑥同时应
多重PCR技术的应用一个反应中检测多个病原体
本次新冠疫情防控工作中，多次强调了呼吸道病原体鉴别检测的重要性。近期，圣湘生物利用多重PCR技术开发的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)、甲型流感病毒、乙型流感病毒多重核酸检测试剂盒(荧光PCR法)已获得欧盟认证机构颁发的CE认证证书。另外，还有六项呼吸道病原体核酸检测试剂盒以及七项呼吸
多重PCR中的常见问题短片段产物条带较弱如何处理？
①缓冲液浓度从1×增加至1.5×或2×; ②降低退火或延伸温度; ③增加弱条带相对应的引物量; ④同时应用以上3种策略。
多重PCR在遗传病诊断方面的应用DMD和BMD的检测
Duchenne型肌营养不良症( Duchenne muscular dystrophy,DMI)是一种很常见的人类遗传病,为X性染色体隐性遗传性肌肉变性疾病,50%的病例由基因缺失引起,大约每3500个男婴就有一个发病,1/3的病例由新的突变所致,肌营养不良基因长200kb,至少有70个外显子,被
多重同晶置换的原理和方法特点
中文名称多重同晶置换英文名称multiple isomorphous replacement;MIR定 义在蛋白质的X射线衍射研究中，为解决衍射相问题，将多个具有同晶性质而不改变蛋白质构象的重原子引入蛋白质，比较引入重原子前后的衍射图，即能从多个相角所测的数据解释衍射图。应用学科生物化学与分子生物
一文知晓PCR，定量PCR，数字PCR方法选择
从1985年至今的30多年时间里，PCR分析经历了三代技术的发展。diyi代传统PCR技术，采用琼脂糖凝胶电泳的方法对PCR产物进行定性分析。第二代荧光定量PCR技术，通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控PCR进程，最后用Cq值对基因进行定量分析。第三代数字PCR技术，通过
直接原位PCR（In－situ－PCR）操作方法
原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。1．组织切片和细胞样品的制备【试剂与配置】10%福尔马林二甲苯PBS【
多重PCR中的常见问题所有产物条带都很弱如何处理？
①增加延伸时间; ②降低延伸温度至62~68℃; ③逐步降低退火温度; ④调整 Taq DNA聚合酶的浓度; ⑤同时应用以上4种策略。