应用多重PCR方法鉴定RHD基因型的研究(2)
2结果 2.1多重PCR方法的反应结果应用多重PCR方法可以鉴定不同的RHD基因型(图2)。根据扩增条带判断结果，D/d型：目标条带为3条，分别为208bp、263bp和1920bp;d/d型：目标条带为2条，分别为208bp和1920bp;D/D型：目标条带为2条，分别为208bp和263bp;DEL/d：目标条带为4条，分别为102bp、208bp、263bp和1920bp;由图2可知，本实验室所建立的实验方法，具有简便直观，鉴定准确的特点，可以检测出人类RHD基因型，包括D/D、D/d、DEL、DEL/d和d/d基因型，适于大样本量的筛选和检测。图2多重PCR方法检测RHD基因型的电泳图 Fig.2 Electrophoretogram of RHD genotypes by the multiplex PCRM：Marker(DL2000)，购自TaKaRa公司;1、2：INNO-TRAIN公司的标准物，1为D/......阅读全文
多重PCR在遗传病诊断方面的应用遗传修饰生物中的应用
在遗传修饰生物( genetically modified organisms,GMO)中的应用近年来可见应用多重PCR技术在转基因成分定性和定量检测的报道。陈文炳等用多重PCR方法在反应体系中加入13对引物同时检测转基因矮牵牛与阳性对照质粒中的1~3个外源基因,包括花榔菜花叶病毒( caulif
多重PCR在遗传病诊断方面的应用用于遗传病的检测
用于其它遗传病的检测 Pici等人对囊性纤维化( cystic fibrosis,CF)基因突变进行了筛选研究,用4对外显子引物进行多重PCR扩增,然后用限制性内切酶消化PCR产物,再进行垂直聚丙烯酰胺凝胶电泳,检查15例发现有3例发生了基因突变。Pior等设计了8对引物同时检测DMD/BMD
多重等位基因特异性PCR芯片在听力筛查中的应用
1. Abstract We demonstrate a new method, using a universal array approach termed multiplex allele-specific PCR-based universal array (ASPUA),
多重PCR技术在多种病原体检测应用中具有三大特点:
①高效性:同一PCR反应管中可同时检测多个病原体基②系统性:对引起相同或类似症状疾病的不同病原微生物或具有相同感染途径的多种病原体等进行检测或鉴别。例如引起呼吸道疾病的病原体;通过血液传播的感染性病原体;导致脑炎脑膜炎症候群相关病原体等，都可使用多重PCR技术进行组合检测与鉴别。③经济性:相较于多个
超多重PCR技术及其在临床病原微生物检测的应用（一）
一超多重PCR技术简介1.1 PCR及多重PCR技术1.1.1 PCR技术聚合酶链式反应(PCR)是一种在体外是用已知寡核苷酸引物引导未知片段中微量待测基因片段进行扩增的技术。PCR反应体系主要包括待扩增样品模版、特异性引物、DNA聚合酶(polymerase)、扩增底物dNTPs以及含有Mg2+的
超多重PCR技术及其在临床病原微生物检测的应用（三）
2.2.2 基于分子的病原体检测技术2.2.2.1蛋白检测目前针对病原体蛋白的直接检测使用质谱技术，基于已建立的微生物胞膜蛋白质、脂多糖、核酸等的数据库对微生物进行精准鉴定和分析。质谱方法针对培养后浓度较高、品种较为单一的待测样品，通过获得其蛋白质图谱，再与已知微生物构建的数据库的参考图谱进行比对，
两种多重数字PCR试剂检测EGFR的活化和耐药位点
数字PCR应用文献---两种多重数字PCR试剂检测EGFR的活化和耐药位点NaicaTMcrystal数字PCR 通常生物学样本量有限，通过单次实验获得足够多的信息对于研究人员和诊断人员至关重要。NaicaTMcrystal数字PCR系统实现了单次实验中同时检测和定量多重生物标志物，并确保数据精准度
超多重PCR技术及其在临床病原微生物检测的应用（二）
1.3 靶向-NGS（tNGS）技术的应用超多重PCR兼具PCR对于特定微量DNA模板的特异性扩增性能以及多个片段同步扩增的能力，配合NGS测序，会拥有比普通宏基因组，全外显子组测序更为灵敏的特定基因检出率，此外前期建库流程更加简便易行并具有相当大的成本优势。目前tNGS技术的应用范围至少包括遗传疾
多重分裂峰
如果原子或离子的价壳有未成对电子存在，则内层芯能级电离后留下不成对电子，可与原来未成对电子进行耦合，从而发生能级分裂，导致光电子谱峰分裂成多个谱峰，称之为多重分裂。
PCR产物克隆方法
平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条 DNA链的3'末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'突出一个碱基的DNA分子。这种DNA分子的连接效率很低。由
PCR检测方法（二）
3.实验操作注意事项：尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意：（1）戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套。（2）使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不
pcr仪测温方法
PCR测温服务PCR是分子生物学领域的关键技术。不管是在基础研究还是临床诊断领域，PCR 的应用越来越广泛。一个稳定的温度循环是成功实现PCR所必须的，在PCR反应过程中对温度控制的要求很高，良好的温度控制是PCR仪质量好坏的关键。 为什么要对PCR仪进行测温1、PCR仪的温度条件和状态对于PCR
PCR检测方法（一）
PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性，但令人头痛的问题是易污染，极其微量的污染即可造成假阳性的产生。污染原因一、标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染；标本核酸模板在提取过程中，由于吸样枪污染导致
PCR产物纯化方法
Purification of PCR Products in Preparation for CloningJoseph SambrookPeter Maccallum Cancer Institute and The University of Melbourne, AustraliaDavid
PCR（RTPCR）反转录－定性检测方法
1、试剂 (1)10倍 RT 缓冲液:500mmol/L Tris·Cl(pH8.0),0.60 mmol/L MgCl2,400mmol/L KCl,10mmol/L DTT。 (2)10倍 PCR 缓冲液:100mmol/L Tris·Cl(pH8.3),500mmol/L kCl,15
新型PCR分析方法毛细管PCR技术
新型PCR分析方法毛细管PCR技术 常规PCR反应采用导热性较差的塑料管作为反应容器，对于100~1样品，样品温度要比槽板温度滞后2030s，加上槽板升降温度较慢（1C／s），因此30个循环反应通常需要2～6h，循环时间多浪费在常规PCR反应采用导热性较差的塑料管作为反应容器，对于100~1样品，样
新型PCR分析方法毛细管PCR技术
常规PCR反应采用导热性较差的塑料管作为反应容器，对于100~1样品，样品温度要比槽板温度滞后20—30s，加上槽板升降温度较慢(1’C／s)，因此30个循环反应通常需要2～6h，循环时间多浪费在加热和冷却样品过程中，不能满足临床快速诊断的需要。毛细管PCR由于采用导热性远强于塑料管的毛细管作为反应
多重PCR技术检测一次性使用纸质卫生品更快更准
11月19日，天津检验检疫局工业产品安全技术中心主持的国家质检总局科研项目“一次性使用纸质卫生品安全卫生项目快速检测技术的研究”通过专家组验收，该项目针对当前一次性使用纸质卫生品前处理过程冗长、操作不方便的现状，采用多重荧光PCR技术，解决了以往检测时间长、通关速率低等问题，为该类型产品大批量检
多重PCR在遗传病诊断方面的应用着床前胚胎遗传学诊断
着床前胚胎遗传学诊断( preimplantation genetic diagnosis,PGD) PGD产生于10多年前,主要目的是识别基因突变或染色体错误引起的遗传性疾病。临床上最早是用来检测夫妻X隐形连锁疾病,随后应用于不同的患者来达到优生优育的目的,主要包括:单基因病携带者,无论显性
多重PCR技术的应用一个反应中检测单个病原体多基因
多重PCR技术更多的时候用于单个病原体的检测，其中包括"内标+靶标基因"与"内标+多个靶标基因"的组合方法。试剂盒中添加内标，可使结果更加准确可靠，避免因试剂操作过程出现的假阴性。圣湘生物是"内标法"的国内率先应用者。 多家企业针对本次疫情开发的新型冠状病毒核酸检测试剂盒就属于"内标+多个靶标基因”
算法辅助的超多重PCR引物设计实现超低的引物二聚体水平
近日，专注于核酸分子杂交底层技术研发和应用转化的创新型分子诊断公司阅尔基因与同济大学附属上海肺科医院任胜祥教授合作在Nature Communications再次发表重磅研究，介绍了一种多重PCR引物设计的核心算法SADDLE，在大型扩增子法测序panel中首次实现了超低的引物二聚体水平。SADDL
知晓PCR，定量PCR与数字PCR的实验方法与选择
从1985年至今的30多年时间里，PCR分析经历了三代技术的发展。一代传统PCR技术，采用琼脂糖凝胶电泳的方法对PCR产物进行定性分析。第二代荧光定量PCR技术，通过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控PCR进程，最后用Cq值对基因进行定量分析。第三代数字PCR技术，通过将PC
酶多重性介绍
中文名称酶多重性英文名称enzyme multiplicity定 义催化同一个反应的酶不止一种，而是蛋白质结构和氨基酸组成不相同的几种同工酶的现象。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），酶（二级学科）
传统定量PCR方法简介
1）内参照法：在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。2）竞争法：选
原位PCR的基本方法
①固定组织或细胞:将组织细胞固定于预先用四氟乙烯包被的玻片上，并用多聚甲醛处理，再灭活除去细胞内源性过氧化物酶.②蛋白酶K消化处理:用60ug/ml的蛋白酶K将固定好的组织细胞片55℃消化处理2h后，96℃2min以灭活蛋白酶K.③PCR扩增:在组织细胞片上，加PCR反应液，覆盖并加液体石蜡后，直接
PCR仪使用方法
（一）试剂PCR仪 （1）引物：决定扩增的特异性。根据检测的DNA不同，选用不同引物，每种病原微生 物都有自己特异的引物。 （2）耐热的DNA聚合酶：此酶是从耐热细菌中分离出来的，能耐受高温90℃-100℃。 （3）10×PCR缓冲液：500mmol/l KCl;100mmol/L Tris
PCR污染的监测方法
1.阳性对照:在建立PCR反应实验室及一般的检验单位都应设有PCR阳性对照，它是PCR反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志。阳性对照要选择扩增度中等、重复性好，经各种鉴定是该产物的标本，如以重组质粒为阳性对照，其含量宜低不宜高(100个拷贝以下)，但阳性对照尤其是重组
PCR仪使用方法
（一）试剂PCR仪 （1）引物：决定扩增的特异性。根据检测的DNA不同，选用不同引物，每种病原微生 物都有自己特异的引物。 （2）耐热的DNA聚合酶：此酶是从耐热细菌中分离出来的，能耐受高温90℃-100℃。 （3）10×PCR缓冲液：500mmol/l KCl;100mmol/L Tr
PCR测序的方法过程
PCR测序根据标记的方式不同和循环的次数不同可分为直接测序法和循环测序法。
传统定量PCR方法简介
1）内参照法：在不同的PCR反应管中加入已定量的内标和引物，内标用基因工程方法合成。上游引物用荧光标记，下游引物不标记。在模板扩增的同时，内标也被扩增。在PCR产物中，由于内标与靶模板的长度不同，二者的扩增产物可用电泳或高效液相分离开来，分别测定其荧光强度，以内标为对照定量待检测模板。 2）竞