WesternBlottingProtocols
back to topProtocolStandard vs. Rapid Immunodetection ProceduresThere are two types of protocols for immunodetection: Standard and rapid.Standard vs. Rapid ImmunodetectionStepStandard ImmunodetectionRapid ImmunodetectionBlock the membrane1 hrNoneIncubate with primary antibody1 hr1 hrWash the membrane3 x 10 min3 x 5 minIncubate with second antibody1 hr30 minWash the membrane3 x 10 min3 x 5 minAdd substrate5 min5 minTo......阅读全文
Western－Blot中抗体的选择
Western Blot又称为蛋白质印迹，是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的基于抗体抗原之间特异免疫反应的一种定量或定性检测蛋白的实验方法。基本原理：聚丙烯酰胺凝胶电泳将不同分子量的蛋白质样品分离，分离后的蛋白被转移到固相支撑物（杂交膜）上，抗体特异性识别目标蛋白，通过酶促反应或者化学发光等
DAPI－Nucleic－Acid－Stain
实验概要The blue-fluorescent DAPI nucleic acid stain preferentially stains dsDNA; it appears to associate with AT clusters in the minor groove. Binding
没有注明可以用来做Western－blot的一抗可以用来做Western－...
没有注明可以用来做Western blot的一抗，可以用来做Western blot吗？不一定，因为有的抗体是识别线性表位的，有的是识别构象型表位，识别构象型表位的抗体不能用于Western blot，因为在Western blot中抗体识别的是完全变性的蛋白质抗原，而蛋白质抗原的构象型表位变性时被
测测细胞与细胞之间的力？Nature－Protocols发布了新方法
一个活细胞或微生物能施加的力很小，通常不大于几纳米牛顿。相比之下，1纳米牛顿是一支巧克力棒重量的十亿分之一。然而，对生物体和微生物来说，这些力足以允许细胞贴附一个表面或让微生物推动自己朝营养方向发展。 芬兰和德国的科学家现在提出了一种高度适应性的技术——微型移液管力传感器（micropipet
以毛细管转移方式进行Northern－Blotting转印实验
要进行北方杂合反应前，必须先将RNA自洋菜胶体转移至硝化纤维纸（nitrocellulose membrane） 或尼龙膜 （nylon membrane） 上，这一个过程称为转印 （blotting）。 一般常用的方法包括毛细管转移法 （capillary transfer）、真空转移法 （vac
RNA干扰（RNAi）实验成功要素
基因和siRNA选择RNAi实验的通量可从沉默单个感兴趣的基因，到少量相关基因或同一个通路上的基因，到全基因组高通量筛选，取决于需要解决的生物学问题。siRNA的设计至关重要。转染优化用于RNAi实验的细胞应当有效转染siRNA。转染必须经过优化确保siRNA的浓度是最低的有效浓度以避免非特异性效应
双荧光素酶检测的原理和应用
一、荧光素酶报告基因的检测原理荧光素酶（Luciferase）是生物体内催化荧光素(luciferin)或脂肪醛(firefly aldehyde)氧化发光的一类酶的总称，来自于自然界能够发光的生物。自然界存在的荧光素酶来自萤火虫、发光细菌、发光海星、发光节虫、发光鱼、发光甲虫等。细菌荧光素酶对热敏
单细胞蛋白质定量技术解析干细胞异质性
干细胞是具有自我更新和多向分化潜能的未分化细胞。体内或体外研究表明, 干细胞具有表型及功能的异质性, 这一特性也决定了其不同的分化和再生能力。越来越多的证据表明, 干细胞自我更新及分化的分子机制以及与干细胞功能失调的相关疾病的产生都是在单细胞水平发生的, 基于异质性的干细胞群体的研究结果
蛋白示踪上样缓冲液（还原，5x）操作步骤
蛋白示踪上样缓冲液（还原，5×）适用于还原型SDS-PAGE 电泳前的蛋白样品处理。本产品含有两种示踪染料，分别是蓝色的溴酚蓝和红色的派洛宁γ，可实时监控蛋白样品的电泳进程。同时，在凝胶上显现的红色条带可伴随蛋白样品转移至印迹膜上，因此本产品具有检测WesternBlotting 转膜效率的作用
新技术助蛋白质转印法提速
在发明蛋白质印迹法（Western Blot）出现了30多年之后，这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。 有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法，但其中只有一人才算得上是“Western B
蛋白质印迹技术30年“进化”史
在发明蛋白质印迹法(Western Blot)出现了30多年之后，这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。 有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法，但其中只有一人才算得上是“Western
阐述新冠病毒感染机制，推进抗病毒药物研发
最近的预印本杂志bioRxiv发表了德国波恩大学，夏里特大学，德国马克斯·普朗克精神病研究所等单位联合研究成果，阐述了SARS-CoV-2病毒可以抑制自噬。亚精胺，MK-2206，氯硝柳胺等作用于自噬的小分子化合物，可以作为抗病毒潜在治疗药物。Analysis of SARS-CoV-2-contr
Wes：阐述新冠病毒感染机制，推进抗病毒药物研发
最近的预印本杂志bioRxiv发表了德国波恩大学，夏里特大学，德国马克斯·普朗克精神病研究所等单位联合研究成果，阐述了SARS-CoV-2病毒可以抑制自噬。亚精胺，MK-2206，氯硝柳胺等作用于自噬的小分子化合物，可以作为抗病毒潜在治疗药物。Analysis of SARS-CoV-2-con
期刊对Western－Blot数据要求的四大要点
2018年，PubMed 中共有194,262 篇蛋白相关的论文，其中有16,196（8.3%）篇用到了 WB。WB 的使用比例在过去30年中稳定在8%到9%左右，而更为现代和准确的蛋白质谱技术（MS），在过去十年中应用比例则稳定在4%，仅仅是WB的一半。四十年后的今天，WB依旧是应用率最高的蛋
期刊对Western－Blot数据要求的四大要点
则责任自负2018年，PubMed 中共有194,262 篇蛋白相关的论文，其中有16,196（8.3%）篇用到了 WB。WB 的使用比例在过去30年中稳定在8%到9%左右，而更为现代和准确的蛋白质谱技术（MS），在过去十年中应用比例则稳定在4%，仅仅是WB的一半。四十年后的今天，WB依旧是应用
常用试剂配制－2
Acetone / Formaldehyde FixativeAcrylamide Gel, denaturingAcrylamide Gel, nondenaturingAlkaline Phosphatase Buffer 1 (Glycine Buffer, 0.1 M, pH 10.4)Al
蛋白质分析法/免疫法检测金属硫蛋白的介绍
此类方法主要是通过蛋白质含量测定来计算金属硫蛋白浓度，免疫法是最主要的方法。它尤其适合于微量检测，具有灵敏、特异的特点，灵敏度在pg/ml级，对存在体液中含量甚微的MT具有较好的检测效果。在近些年，先后建立了Western Blotting法、放射性免疫检测法（RIA）和酶联免疫吸附法（ELIS
蛋白质分析法/免疫法检测金属硫蛋白的介绍
此类方法主要是通过蛋白质含量测定来计算MT浓度，免疫法是最主要的方法。它尤其适合于微量检测，具有灵敏、特异的特点，灵敏度在pg/ml级，对存在体液中含量甚微的MT具有较好的检测效果。在近些年，先后建立了Western Blotting法、放射性免疫检测法（RIA）和酶联免疫吸附法（ELISA）。
化学发光荧光成像系统
化学发光荧光成像系统是一种用于生物学、基础医学、临床医学、药学领域的分析仪器，于2017年6月27日启用。 技术指标 1.检测模式：荧光成像、数字化和化学发光成像； 2.激光波长：LD488、SHG532、LD635； 3.成像面积：40×46cm； 4.像素：10、25、50、100、20
蛋白质检测－Western－Blot
蛋白质检测－Western Blot1. 把聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质电泳转移到硝酸纤维膜上。1）转移缓冲液洗涤凝胶和硝酸纤维素膜，将硝酸纤维素膜铺在凝胶上，用5ml移液管在凝胶上来回滚动去除所有的气泡。2）在凝胶/滤膜外再包一张3mm滤纸（预先用转移缓冲液浸湿），将凝胶夹在中间，保持湿润和没有气泡。
Western－Blot－的注意事项1
1. 把聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白质电泳转移到硝酸纤维膜上。1）转移缓冲液洗涤凝胶和硝酸纤维素膜，将硝酸纤维素膜铺在凝胶上，用5ml移液管在凝胶上来回滚动去除所有的气泡。2）在凝胶/滤膜外再包一张3mm滤纸（预先用转移缓冲液浸湿），将凝胶夹在中间，保持湿润和没有气泡。3）将此滤纸/凝胶/薄膜滤纸按照厂家
western－blot中封闭起什么作用
我做了一次对封闭液的测试，在封闭之前用立春红染色，封闭之后再用立春红染色，然后用PBST洗三次，再用立春红染色。问题就一目了然，封闭后整个膜底色发红蛋白区略微更红，但是封闭前和封闭后PBST洗的膜只有蛋白区发红。所以你就知道封闭的原理就是防止一抗与膜的非的异性结合。
western－blot－二抗时间要多久
37度1h，二抗浓度不要过高，否则，背景颜色太深，还可能出现非特异条带。
western－blot－二抗时间要多久
37度1h，二抗浓度不要过高，否则，背景颜色太深，还可能出现非特异条带。
Western免疫印迹有哪些分类
western显色的方法主要有以下几种： i.放射自显影 ii.底物化学发光ECL iii.底物荧光ECF iv.底物DAB呈色 现常用的有底物化学发光ECL和底物DAB呈色，体同水平和实验条件的是用第一种方法，目前发表文章通常是用底物化学发光ECL。只要买现成的试剂盒就行，操作也比较
western－blot－二抗时间要多久
37度1h，二抗浓度不要过高，否则，背景颜色太深，还可能出现非特异条带。
western－blot－具体操作步骤
什么是Westernblot?最佳答案Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似，但Western
western－blot－二抗时间要多久
一般是室温下一个小时即可。也可适当长些时间！
荧光western－blot应注意些什么？
随着荧光检测的普及，许多研究人员正考虑将western blot的检测方法从化学发光转到多重荧光。这一趋势背后有多个推动力。最重要的是，荧光检测能够实现多重western blot分析，每次能够同时检测几个目标蛋白，而不再需要剥离和重新杂交。荧光的其他好处在于动态范围更宽、信号稳定性更好。荧
western－blot中封闭起什么作用
转膜后，膜上其他的空白位置需要用封闭液封闭。Western的灵敏度某种程度上受限于封闭做的好不好。在做Western blot实验中，会用到固相载体(如NC膜，PVDF膜)，在这些固相载体表面有很多洞洞，通过电转，胶上的蛋白被转移到膜上，蛋白以机械填补(堆积)和吸附的方式结合于表面。蛋白塞进了表面的