WesternBlottingProtocols
back to topProtocolStandard vs. Rapid Immunodetection ProceduresThere are two types of protocols for immunodetection: Standard and rapid.Standard vs. Rapid ImmunodetectionStepStandard ImmunodetectionRapid ImmunodetectionBlock the membrane1 hrNoneIncubate with primary antibody1 hr1 hrWash the membrane3 x 10 min3 x 5 minIncubate with second antibody1 hr30 minWash the membrane3 x 10 min3 x 5 minAdd substrate5 min5 minTo......阅读全文
western－blot显色方法有哪几种
有很多种显示方法，其中HRP、化学发光检测（ECL、SuperSignal）居多，DAB显色很少见。主要分为两大类，分别介绍如下： 化学发光Chemiluminescent：随着各大厂家努力开发研制灵敏度更高的发光底物，化学发光法的灵敏度已经达到pg级别，甚至还有 Femto级别的，灵敏度超过了同
western－blot中的一抗如何选择
一般选择的原则是去文献中找，看看别人做和你一样的目的蛋白的时候用的都是哪家得抗体，都有介绍的，看看图片效果怎么样。多找出一些文献，然后根据你掌握的信息选择一种最便宜，最高效，特异性最好的抗体。一般做科研的人都是这么选择抗体的，不能蒙着买，毕竟不便宜的。
Western－Blot实验相关试剂的配制（一）
30%(w/v)丙烯酰胺溶液 丙烯酰胺 29g甲叉双丙烯酰胺 1g加去离子水，定容至 100ml 调整溶液 pH 值不超过 7.0，置棕色瓶中贮存于室温或4℃。 10%SDS SDS 10g蒸馏水至
Western－Blot详解－常见的问题指南（二）
4. 滤纸、胶和膜的问题X. NC膜\ PVDF膜\ 尼龙膜怎样鉴别？解答：尼龙膜是较理想的核酸固相支持物，有多种类型；硝酸纤维素膜是目前应用最广的一种固相支持物，价格最便宜；PVDF膜介于二者之间。就结合能力而言：尼龙膜结合DNA和RNA能力可达480－600μg/cm2，可结合短至10bp的核酸
Western－Blot详解－常见的问题指南（三）
6. 染色的选择OO. Western Blot哪种染色好？解答：（1）阴离子染料是最常用的，特别是氨基黑，脱色快，背景低检测极限可达到1.5μg，考马虽然与氨基黑有相同的灵敏度，但脱色慢，背景高。丽春红S和快绿在检测后容易从蛋白质中除去 ，以便进行随后的氨基酸分析。缺点是：溶剂系统的甲醇会引起硝化
westernblot操作注意事项（一）
一．配胶1． 注意一定要将玻璃板洗净，最后用ddH2O冲洗，将与胶接触的一面向下倾斜置于干净的纸巾晾干。2． 分离胶及浓缩胶均可事先配好（除AP及TEMED外），过滤后作为储存液避光存放于4℃，可至少存放1个月，临用前取出室温平衡（否则凝胶过程产生的热量会使低温时溶解于储存液中的气体析出而导致气
在western－blot中loading－buffer的作用
1、指示剂，方便观察电泳进行的程度；2、密度大，携带你的样本沉到孔的底部；3、保持蛋白线性及携带过量负电荷的状态。 除此之外，里面最重要的是还有巯基乙醇还原剂来让蛋白质充分变性，同时保护-sh基团。
western－blot为什么出现两条带
Western blot出现两条带是经常会发生的情况具体原因可能是该蛋白出现了同源二聚体，故都可以被抗体识别出来或者改蛋白有部分降解，但是未降解部分依然可以和抗体结合另外抗体特异性不高，也会出现非特异性的结合，造成出现两条或者多条带所以Western blot会出现两条带
多重荧光western－blot注意事项
Azure Biosystems公司，我们非常相信荧光多重在Western印迹中的强大功能，这促使了我们的Azure C系列成像仪快速发展。 但是我们认识到，从标准的HRP /化学发光方法迈出来是有些艰巨的，所以我们提出了6个注意事项，使化学发光转换到荧光westernblot尽可能简单。
如何在Western－Blot中选择一抗？
说到免疫印迹最重要的就是抗体的选择了。在免疫印迹中我们会用到一抗和二抗等抗体，本文着重给大家介绍一下一抗的选择。一抗就是能和特异性抗原特异性结合的蛋白。种类包括单克隆抗体和多克隆抗体。抗体因其种属来源不同可以分为多种类型，如鼠抗，兔抗，羊抗等等，那么在使用时我们应该怎么选择呢？检测任何一种目的蛋白都
Western－Blot－(免疫印记法)常识问答
1. 什么是western blot? 答：WB又称免疫印记法.是将生物大分子物质通过不同途径转移到固相载体的过程。 2. western blot 有什么优点？ 答：灵敏，可达ng级，用Ecl显色法理论上可达pg 级。方便，特异性高。 3. western blot 的
western－blot－转移缓冲液的配方
5X电泳缓冲液：15.1g Tris+94.0g Gly+5.0g SDS 配成1L转移缓冲液：3.03g Tris+14.42g Gly+200mL CH3OH 配成1L
蛋白质的Western－blot印迹分析
一、原理 一个基因表达的最终产物是产生相应的蛋白，因此检测蛋白是测定基因表达的主要标志。 原理：Western Blotting 是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳，对不同分子量的蛋白质进行分离；并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物上，用抗靶蛋白的非标记抗体（
Western－Blot－(免疫印记法)常识问答
1. 什么是western blot? 答：WB又称免疫印记法.是将生物大分子物质通过不同途径转移到固相载体的过程。 2. western blot 有什么优点？ 答：灵敏，可达ng级，用Ecl显色法理论上可达pg 级。方便，特异性高。 3. western blot 的
电泳做Western－Blot实验的方法技巧
电泳做western blot的时候，大家往往会摸索一抗、二抗的浓度，封闭时间，曝光时间等等，而每次变换其中的一个条件就需要从新跑胶、转膜，甚至重新提蛋白，这样会浪费大量的时间。其实完全没有必要这样。一次转膜后，将PVDF膜晾干，裁减成小块，保存起来，用的时候取出一块，没有任何影响。这对于摸索条
Western－Blot－相关技术操作与原理1
【实验原理】： Western Blot 印迹方法，又称为免疫印记，是将获得的蛋白质样品通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，对不同分子量的蛋白质进行分离，并通过转移电泳将凝胶上分离到的蛋白质转印至固相支持物（NC膜或PVDF膜）上，用抗靶蛋白的非标记抗体（一抗）与转印后膜上的靶蛋白进行特异性结合，再与经
Western－Blot－实验试剂选购指南（一）
(一)蛋白质电泳1.请参照常规电泳操作.2.分子量标准:可选择普通分子量标准或预染的分子量标准.在选择预染的分子量标准时,要注意其优点和缺点:优点: 在电泳过程中可监控蛋白质分离状态; 可指示转印中蛋白质的转印效率.缺点: 染料影响蛋白质移动速度;分子量测定略欠精确;影响蛋白质与膜的结合力. 购
western－blot－一抗用什么溶剂溶解
western blot 一抗一般都是以原液的形式保存的，不需要用溶剂溶解western blot 一抗使用的时候一般只需要稀释，购买时厂家应该会提供一抗稀释液。如果没有一抗稀释液可以用TBST或者PBST稀释，这个要看具体使用的情况了
电泳做Western免疫印迹操作步骤
Western免疫印迹（Western Blot）是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。1、原理与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶
western－bolt封闭的作用是什么
PVDF膜在甲醇活化后是带电的，因而在转膜时将蛋白吸附。封闭的目的是将PVDF膜上无蛋白的部分空隙用奶粉填满，以免孵抗体的时候一抗二抗与之结合，产生非特异条带或者是背景杂乱
蛋白质印迹(westernblot)
实验原理印迹法一般由凝胶电泳；样品的印迹和固定化；各种灵敏的检测手段如抗体、抗原反应等三大实验部分组成。生物大分子凝胶电泳分离 蛋白质印迹法的第一步一般是将蛋白质进行SDS聚丙烯酰胺平板凝胶电泳，使待测蛋白质在电泳中按相对分子质量大小在板状胶上排列。2.分子区带的转移和固定 第二步就是反凝胶电泳已分
western－blot封闭时间过长会有什么影响
有可能把你想要的条带也给封闭了，最终获得的信号很弱或者没有
AzureSpot－软件分析－western－数据操作方法
AzureSpot分析软件介绍 AzureSpot提供分析凝胶和印迹的工具，使复杂分析成为一个简单的过程。AzureSpot软件分为全自动或手动分析，为您的数据分析提供了灵活性和准确性。 工具： AzureSpot包括： > 自动泳道和条带检测 > 自动PDF报
western－blot为什么出现两条带
Western blot出现两条带是经常会发生的情况具体原因可能是该蛋白出现了同源二聚体，故都可以被抗体识别出来或者改蛋白有部分降解，但是未降解部分依然可以和抗体结合另外抗体特异性不高，也会出现非特异性的结合，造成出现两条或者多条带所以Western blot会出现两条带
western－blot－步骤－70v跑多久
western blot有两处需要电压在SDS-PAGE电泳的时候需要电压在转膜的时候也需要电压如果是SDS-PAGE电泳的时候，70V的电压有些偏低，可能会需要较长时间才能完成。所以一般建议使用70V电压跑浓缩胶，当样品跑完浓缩胶后将电压提高到200V。这样一般需要30分钟跑完转膜的时候，如果是7
Western－Blot－相关技术操作与原理2
一、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 30%丙烯酰胺-双丙烯酰胺溶液 4 × 浓缩胶缓冲液 (Stacking gel Buffer, pH 6.8) 4 × 分离胶缓冲液 (Resolving gel buffer pH 8.8) 10 × SDS-PAGE电泳缓冲液 10 × 蛋白电转移缓冲液
如何抑制western中蛋白样的降解
Western在检测过程中，蛋白样一般是不会降解的。因为在SDS-PAGE的时候，蛋白样品已经被SDS分解成一级结构了，不具有高级结构的蛋白质一般就失去了生物学活性，很难再被降解了。如果Western检测出来蛋白有降解，那很大的可能也会在做检测之前就已经降解了。
远离噪音点：western－blot封闭那些事
Western blot封闭步骤为什么重要？样品从凝胶转印到膜上后，在抗体孵育之前都要进行封闭的步骤。 了解封闭的工作原理可提高western blot的质量，提高数据的特异性，灵敏度和信噪比。蛋白封闭液是如何工作的？通用的PVDF膜和NC膜具有很强的蛋白结合能力，如果跳过封闭步骤，一抗或二抗可能非
western－和ELISA－处理样本有何差别
western blot和ELISA的基本原理是一样的，都是免疫结合反应的原理。差别主要是技术方法，免疫结合的模式，检测的目的等 western blot需要先电泳后转膜，然后免疫结合，虽然操作复杂但不需要很高级的仪器设备 ELISA没有这么复杂的操作，但是需要酶标仪这样比较贵的仪器 western
western－blot为什么出现两条带
Western blot出现两条带是经常会发生的情况具体原因可能是该蛋白出现了同源二聚体，故都可以被抗体识别出来或者改蛋白有部分降解，但是未降解部分依然可以和抗体结合另外抗体特异性不高，也会出现非特异性的结合，造成出现两条或者多条带所以Western blot会出现两条带