蛋白浓缩方法

蛋白浓缩方法基本有: 丙酮沉淀法;免疫沉淀法;三氯醋酸沉淀法;硫酸铵沉淀法;(低温)有机溶剂沉淀法;聚乙二醇沉淀法;超滤法;透析法;离子交换层析和冷冻干燥法…… 1,丙酮沉淀法;三氯醋酸沉淀法 试验要求的仪器简单,但是常常导致蛋白质变性。 2,免疫沉淀法:得有特异性抗体! 3,硫酸铵沉淀法:利用高浓度盐将蛋白质析出(盐析) 选择硫酸按是因为:盐析有效性,pH范围广,溶解度高,溶液散热少,经济! 4,(低温)有机溶剂沉淀法:强调低温(0-4度以下)是因为10度时蛋白会在有机溶剂中变性,可用乙醇,丙酮……注意:Mg2+离子,pH值 5,聚乙二醇沉淀法:使用PEG时旨在个别情况下才会是蛋白质稍有变性!他溶解是散热低,形成沉淀的平衡时间短,通常达到30%时蛋白质就会达到最大量的沉淀! 6,超滤法:主要针对小体积蛋白质溶液(几ml)此法更不易引起变性......阅读全文

批量层析法浓缩蛋白质实验

实验方法原理 批量层析的特点在于层析用树脂不放在柱中,而是放在烧杯或瓶子的容器中;通过搅拌或摇动而混内层析;以过滤或离心的办法分出层析液。实验材料 蛋白质溶液仪器、耗材 离子交换层析装置实验步骤 1. 在烧杯或锥形瓶中平衡树脂,不断搅拌以促进平衡;2. 倾泻掉大部分溶液,保留的溶液置要使树脂能轻松的

离子交换层析法浓缩蛋白实验

实验方法原理离子交換层析可用于浓缩蛋白质溶液。因为大多数蛋白质的等电点均低于 8, 所以它们可在 pH 值为 8 的弱离子强度溶液中被阴离子交换树脂吸附。用离子强度大的溶液可简单的将它们洗脱下来,达到浓缩的目的。实验材料蛋白质溶液仪器、耗材离子交换树脂层析柱实验步骤1. 准备离子交换树脂,装配层析柱

超滤法浓缩蛋白质溶液实验

超滤法             实验方法原理 超滤浓缩蛋白质是通过外力使蛋白质溶液通过滤膜而仍保留目的蛋白质的方法。实验室超滤主要是针对小体积蛋白质溶液(几毫升),用离心力的方法使溶

离子交换层析法浓缩蛋白实验

            实验方法原理 离子交換层析可用于浓缩蛋白质溶液。因为大多数蛋白质的等电点均低于 8, 所以它们可在 pH 值为 8 的弱离子强度溶液中被阴离子交换树脂吸附。用离子强度大的溶液可简单的将它们洗脱下来,达到浓缩的目的。

透析法浓缩蛋白质溶液

实验方法原理透析法主要用于更换蛋白质的缓冲溶液,如果在真空或吸湿环境中也可作为浓缩蛋白质溶液的一种方法(例如 PEG、Sephadex)。将蛋白质溶液盛在一个半透膜袋内,此膜能防止蛋白质丢失而无论在常压或减压下可与周围的缓冲溶液进行溶质交换。除小体积样品之外,根据扩散原理进行的透析法非常耗时,因此蛋

离子交换层析法浓缩蛋白实验

实验方法原理 离子交換层析可用于浓缩蛋白质溶液。因为大多数蛋白质的等电点均低于 8, 所以它们可在 pH 值为 8 的弱离子强度溶液中被阴离子交换树脂吸附。用离子强度大的溶液可简单的将它们洗脱下来,达到浓缩的目的。实验材料 蛋白质溶液仪器、耗材 离子交换树脂层析柱实验步骤 1. 准备离子交换树脂,装

透析法浓缩蛋白质溶液

实验方法原理 透析法主要用于更换蛋白质的缓冲溶液,如果在真空或吸湿环境中也可作为浓缩蛋白质溶液的一种方法(例如 PEG、Sephadex)。将蛋白质溶液盛在一个半透膜袋内,此膜能防止蛋白质丢失而无论在常压或减压下可与周围的缓冲溶液进行溶质交换。除小体积样品之外,根据扩散原理进行的透析法非常耗时,因此

超滤法浓缩蛋白质溶液实验

实验方法原理 超滤浓缩蛋白质是通过外力使蛋白质溶液通过滤膜而仍保留目的蛋白质的方法。实验室超滤主要是针对小体积蛋白质溶液(几毫升),用离心力的方法使溶液很容易通过滤膜。我们以 Amicon 系作为超滤的实例进行描述。这个方法不易引起蛋白质变性。微型浓缩器初始容量有 2 ml 以及更小的,2 mg

超滤法浓缩蛋白质溶液实验

实验方法原理超滤浓缩蛋白质是通过外力使蛋白质溶液通过滤膜而仍保留目的蛋白质的方法。实验室超滤主要是针对小体积蛋白质溶液(几毫升),用离心力的方法使溶液很容易通过滤膜。我们以 Amicon 系作为超滤的实例进行描述。这个方法不易引起蛋白质变性。微型浓缩器初始容量有 2 ml 以及更小的,2 mg/ml

透析法浓缩蛋白质溶液

透析法             实验方法原理 透析法主要用于更换蛋白质的缓冲溶液,如果在真空或吸湿环境中也可作为浓缩蛋白质溶液的一种方法(例如 PEG、Sephadex)。将蛋白质溶

样品前处理方法样品浓缩

引言色谱分析样品制备是一个非常重要和复杂的过程,因为色谱分析技术涉及的样品种类繁多、样品组成及其浓度复杂多变。样品物理形态范围广泛,对采用分析方法进行直接分析测定构成的干扰因素特别多,所以需要选择并实施科学有效的处理方法及其技术,达到分析测定或评价和调查的目的。现代色谱仪器对一个样品的分析测定所需要

样品前处理方法样品浓缩

色谱分析样品制备是一个非常重要和复杂的过程,因为色谱分析技术涉及的样品种类繁多、样品组成及其浓度复杂多变。样品物理形态范围广泛,对采用分析方法进行直接分析测定构成的干扰因素特别多,所以需要选择并实施科学有效的处理方法及其技术,达到分析测定或评价和调查的目的。现代色谱仪器对一个样品的分析测定所需要的时

常用的浓缩方法有哪些

常用的浓缩方法就是加热蒸发法,使水分蒸发,使溶液浓缩

水样富集与浓缩的方法

(一)湿式消解法 利用各种酸或碱进行消解1、硝酸消解法适用水样:较清洁水样2、硝酸-高氯酸消解法适用水样:含难氧化有机物的水样注:高氯酸能与羟基化合物反应生成不稳定的高氯酸酯,有发生爆炸的危险,故先加入硝酸,氧化水中的羟基化合物,稍冷后再加高氯酸处理.3、硝酸-硫酸(5∶2)消解法不适用水样:易生成

样品前处理方法——样品浓缩

引言色谱分析样品制备是一个非常重要和复杂的过程,因为色谱分析技术涉及的样品种类繁多、样品组成及其浓度复杂多变。样品物理形态范围广泛,对采用分析方法进行直接分析测定构成的干扰因素特别多,所以需要选择并实施科学有效的处理方法及其技术,达到分析测定或评价和调查的目的。现代色谱仪器对一个样品的分析测定所需要

Spectra/Gel浓缩剂使蛋白质溶液的浓缩过程及使用步骤

 Spectra/Gel浓缩剂使蛋白质溶液的浓缩过程及使用步骤:  1、Spectra/Gel使蛋白质溶液的浓缩过程变得快捷,其以聚丙烯酸酯-多元醇制成,高亲水性,吸水后膨胀,吸水力强。  2、这种高分子聚合物可与截留分子量(MWCO)从100到1,000,000道尔顿的透析膜配用,且不会污染样品。

蛋白电泳10倍浓缩运行缓冲液

  蛋白电泳10倍浓缩运行缓冲液产品说明书   主要用途   蛋白电泳10倍浓缩运行缓冲液(pH 8.3)是一种旨在用于常规变性蛋白电泳运行的辅助溶液。产品即到即用,无蛋白酶污染,性能稳定,高纯均一,重复性好,简化操作,建立标准化体系。   产品成分   Triza Base,Glycine

蛋白电泳10倍浓缩运行缓冲液

蛋白电泳10倍浓缩运行缓冲液产品说明书主要用途蛋白电泳10倍浓缩运行缓冲液(pH 8.3)是一种旨在用于常规变性蛋白电泳运行的辅助溶液。产品即到即用,无蛋白酶污染,性能稳定,高纯均一,重复性好,简化操作,建立标准化体系。产品成分Triza Base,Glycine,SDS,Deionized Wat

蛋白质浓缩和溶质的去除实验

预计在新奇的一级分子和生物仿制药实体方面将会有突出的增长。一些进步的是改良的分析、开发和相互作用。现在已有许多用于去除關的方法,包括冻干、反向萃取、溶质析出,precipitation、透析(溶剂交换) 、超滤和层析技术。值得注意的是,在众多微和设备发展的支持下,小型化和高通量的蛋白质分析取得了极大

蛋白质浓缩和溶质的去除实验

蛋白质浓缩和溶质的去除实验             实验步骤 一、层析 在过去的 2 0 年中,蛋白质组学技术的日益

如何利用透析法进行脱盐浓缩蛋白

二、蛋白质的分离纯化蛋白质的分离纯化方法很多,主要有:(一)根据蛋白质溶解度不同的分离方法1、蛋白质的盐析中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响,一般在低盐浓度下随着盐浓度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶;当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出,这种现象称盐析,将大量盐加到蛋白质溶液中

实验室常用蒸发浓缩方法

氮吹仪氮吹仪原理:将氮气快速、连续、可控地吹向加热样品的表面,使待处理样品中的水分迅速蒸发、分离,实现样品无氧浓缩。应用:农残分析,药物筛选,液相、气相、质谱分析前处理。优点:干燥速度快缺点:样品温度高样品处理量少存在将样品中物质吹到实验室中的风险,必须在通风橱中操作需要消耗氮气,增加额外成本可燃溶

实验室常用蒸发浓缩方法

氮吹仪氮吹仪原理:将氮气快速、连续、可控地吹向加热样品的表面,使待处理样品中的水分迅速蒸发、分离,实现样品无氧浓缩。应用:农残分析,药物筛选,液相、气相、质谱分析前处理。优点:干燥速度快缺点:样品温度高样品处理量少存在将样品中物质吹到实验室中的风险,必须在通风橱中操作需要消耗氮气,增加额外成本可燃溶

气体样品的动态预浓缩方法

见《色谱》2001年1期P71.                                 气体样品的动态预浓缩方法                             苗  虹,  关亚风,  王涵文,  朱道乾                        (中国科学院大连化学物理研究

真空浓缩仪的操作方法

    真空浓缩仪主要用于浓缩液体或干燥样品,利用真空时溶剂可在低温中沸腾蒸发的原理达到快速浓缩的目的。由冷阱、泵、冷凝分离器、电磁阀、外置真空系统等部分组成。   操作前   1.操作时的环境温度应保持在 15-35 ℃之间   2.打开电源,浓缩仪盖子解锁,显示屏显示上次运行的参数   3.安装

酶液的浓缩方法和步骤

提取的酶液为减少纯化操作容积,通常先进行浓缩。工业上可用真空减压浓缩、薄膜浓缩、冷冻浓缩和逆向渗透作用进行浓缩。对于少量酶液下述方法浓缩更合适:用葡聚糖凝胶(分子筛)浓缩:取相当于酶液量1/5的干葡聚糖凝胶G15或G25,分次加入酶液中,搅拌30 min,使凝胶吸水膨胀,进行吸滤。经重复数次操作即可

免疫沉淀法浓缩蛋白质实验

实验方法原理通过免疫沉淀,用蛋白质特异性抗体能够定量分离目的蛋白。免疫沉淀法由三个步骤组成。首先将特异性抗体加入细胞提取物,第二步加入经化学固定的金黄色葡萄球菌,以确保形成大量沉淀。这些细菌通过蛋白质 A 和抗体形成复合物,蛋白质 A 与免疫球蛋白的 Fe 部分有高度的亲和性。或者说,纯化的蛋白质

蛋白质浓缩和溶质的去除实验(二)

5 生 产 规 模 的 层 析类似于分析用的小规模提取,制备规模和生产规模的蛋白质回收往往包括浓缩和脱盐 。柱层析仍然是蛋白质纯化的核心技术,这归因于其可实现的高选择性,同时具有方便耐用的填充树脂床,原料在树脂中通过流动而进行传送。商业化生产酶和生物药品通常需要加工数千升的初始原料。为了尽量

蛋白质浓缩和溶质的去除实验(四)

1.超滤膜一 般 情 况 下 ,大 多 数 超 滤 膜 包 含 一 个 坚 固 的 支 撑 结 构 (如 T y v e k ® ) ,并 在 这 一 基 础 上附加了一个非常薄的聚合物层。实际上正是这一薄层提供了选择性通透膜所需的性质,并决定了流阻。用于超滤的膜的生产技术在过去几十年里都没

蛋白质浓缩和溶质的去除实验(一)

一、层析在过去的 2 0 年中,蛋白质组学技术的日益广泛应用,使蛋白质浓缩和脱盐的层析技术得到不断革新。蛋白质组学通常需要从少量复杂的混合物中富集蛋白质,包括选择性地浓缩特定种类的蛋白质。由于质谱 (M S ) 和基于抗体检测技术的高灵敏度及可提供详细生化特征的性质,它们在临床诊断、