基因定点突变stepbystep
本贴先讲最简单的一个点的定点突变技术，其它较长片段的突变，删除，插入技术以后会慢慢奉上：在做实验之前，我们首先要搞清楚实验的目的和实验的原理。实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做：第一：我们吊出来的基因有点突变，相信这可能是大家经常会遇到的问题。基因好不容易吊出来，并装进了自己的载体，却发现有一两个碱基跟自己的预期序列或所有的公共数据库不匹配，然后暴昏。大家实验室里面还是用Taq酶为主吧，Pfu这样的高保真酶大家应该用得不多吧，Taq酶的优点和缺点都很明显：优点就是扩增效能强，缺点就是保真性差，其错配机率是比较高的，相关数字忘了，大家可以去网上查那个数字，不过感觉如果是2000bp的基因，如果扩四五十个循环的话，很大机率会出现点突变，当然这也跟具体PCR体系里的Buffer有很大关系，详细情况这里就不讨论了。第二：要研究基因的功能，在基因上自己选......阅读全文
光化学法诱导脑缺血（MCAO）动物模型的建立（二）
1.3.7其他辅助设备和耗材（生产厂家：瑞沃德公司）2.实验方法STEP1:动物麻醉和头部固定：动物经麻醉机诱导进入麻醉，移到定位仪装置进行头部固定和麻醉维持，稳定一会后，使用镊子夹足，测试麻醉的深度，当呼吸平缓，无压足缩回反应时，说明进入实验麻醉中期。另外开启体温维持仪进行实验期动物体温的维持（如
通过RNAi使基因特异性沉默
RNA interference (RNAi) is a phenomenon in which the introduction of double-stranded RNA (dsRNA) into a diverse range of organisms and cell types caus
血气分析报告的重点
Step1：判断患者是否存在酸中毒或碱中毒。方法：看PH，PH≥7.45初步判定为失代偿性碱中毒；PH≤7.35初步判定为失代偿性酸中毒。PaCO2和HCO3-明显异常同时伴PH正常，应考虑混合性酸碱失衡的可能。Step2：判断是酸碱平衡紊乱是呼吸性还是代谢性的。方法：看PH与PaCO2的改变方向。
体外荧光法检测核内体早期动力学5
Leave tubes on ice and repeat Steps 13–15 for the next 6–12 plates of cells.When all cells are collected, centrifuge all tubes at 250g for 5 min at 4
体外荧光法检测核内体早期动力学6
Critical step Be careful to thaw PNS and cytosol slowly on ice to avoid unwanted protein degradation or breaking of organelles. This might require up
A－simple,－rapid－procedure－for－the－isolation－of－DNA－for－PCR
The polymerase chain reaction (PCR) is a method for amplifying specific segments of DNA defined by the small primers used to start the reaction. Using
体外荧光法检测核内体早期动力学4
Top of pageProcedureOverviewSteps 1 - 8 Preparation of rat brain cytosolSteps 9 - 10 Culture of PC12 cellsSteps 11 - 30 Preparation of postnuclear sup
测定水中微生物（包括细菌真菌等）数量的方法
器材及培养 材料和试剂蒸馏水, 自来水, 取自儿童公园的湖水, 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基.仪器或其他用具灭菌三角烧瓶, 灭菌带玻璃塞瓶, 灭菌培养皿, 灭菌吸管, 灭菌量筒. 研究方法采用平板菌落记数技术测定水中细菌总数. 水样的采取 自来水先将自来水水龙头用火焰灼烧3 min 灭菌, 再开放水龙头5
FLIPRTETRA系统检测Gi和Gs偶联GPCR介导的第二信使cA...（一）
FLIPRTETRA系统检测Gi-和Gs偶联GPCR介导的第二信使cAMP信号变化简介在这篇应用文献中我们展示了基于Promega公司 GloSensor. cAMP 实验中的修改后的发光萤火虫荧光素酶的应用。在FLIPR.Tetra高通量筛选系统进行cAMP水平的检测以保证在动力学模式下精确检测G
英国向全球首座核聚变电站迈进
12月2日，英国政府邀请全国各地的社区自愿为核聚变反应堆原型选址，这将是第一个将电力投入电网的反应堆。 这个名为“能源生产球形托卡马克”（STEP）的项目于去年启动，最初5年投入2.22亿英镑用于设计开发。负责监督这项工作的英国原子能管理局（UKAEA）表示，STEP最早可能在2032年开始
GST融合蛋白的准备
Preparation of Glutathione-S-Transferase (GST) Fusion ProteinsMargret B. Einarson and Elena N. Pugacheva Foxx Chase Cancer Center, Philadelphia, PA 19
Crosslinking－chromatin－immunoprecipitation－(XChIP)－protocol
实验概要ChIP is a powerful tool that allows the specific identification of proteins or histone modifications to regions of the genome. Chromatin is isol
Biosynthesis－of－isoleucine
Isoleucine is an essential amino acid, only synthesized in plants and bacteria, and required in the diet by animals. In proteins, the hydrophobic isol
A－simple,－rapid－procedure－for－the－isolation－of－DNA－for－PCR
N.M. DuTeau and J.F. Leslie - Department of Plant Pathology, Throckmorton Hall, Kansas State University, Manhattan, KS 66506-5502 The polymerase cha
Purification－of－MBP－(maLTosebinding－proteins)－Fused－Proteins
Express fusion proteins as per the GST-fused protocol up to Step 7 (Day 3). All steps in protein purification should be done at 4° C unless otherwise
环境领域一站式服务土壤样品制备
关于土十条2016年5月28日，继“气十条”（2013），“水十条”（2015）出台之后，《土壤污染防治行动计划》历经50余次修改后终于问世，共十条。2016年12月，环保部、国土资源部和农业部联合发布《关于组织做好全国土壤污染状况详查实验室筛选工作的通知》根据《通知》要求，详查实验室包括检测实验室
E.Z.N.A.TM－Yeast－RNA－Kit－Spin－Protocol
实验概要The E.Z.N.A.® Yeast RNA Kit allows convenient isolation of high-quality total RNA from a wide variety of yeast species. Up to 2 x 107 log-phase cu
怎样设计不规则形状的PCB？（二）
虽然 DXF 格式包含电路板尺寸和厚度，但是 IDF 格式使用元件的 X 和 Y 位置、元件位号以及元件的 Z 轴高度。这种格式大大改善了在三维视图中可视化 PCB 的功能。IDF 文件中可能还会纳入有关禁布区的其他信息，例如电路板顶部和底部的高度限制。 系统需要能够以与 DXF 参数
E.Z.N.Z.TM－MicroElute－RNA－Desalting－and－Concentration－protocol
实验概要This protocol is designed to clean up and concentrate RNA from various sources such as RNA isolated with RNA-solv® Reagent and other phenol involv
Basic－ELISA－Protocol
实验概要 There are many different types of ELISAs, which can detect the presence of protein in serum or supernatent. One of the most common typ
E.Z.N.A.®－Plasmid－Maxi－Kit－Spin－Protocol
实验概要This Protocol is designed to isolate 500-1200 ug of high Copy-Number plasmids or 50-400 ug of low Copy-Number Plasmids from 200 ml overnight c
Transposonmediated－Mutagenesis
Transposon-mediated Mutagenesis Step 1 - Amplify ORF from MG1655 1.0 ul genomic DNA (30ng/ul) 5.0 ul gene specific primer m
Mapping－Protein－Distributions－on－Polytene－Chromosomes－by－Immunostaining1
INTRODUCTIONThe formidable size and structure of polytene chromosomes allowmapping of chromosomal protein distributions at very high resolution.This p
红细胞裂解的实验方法步骤
IntroductionPrior to using lymphoid tissue cell suspensions for flow cytometric analysis and/or for in vitro functional assays, it is recommended to r
E.Z.N.Z.TM－MicroElute－RNA－Cleanup－Protocol
实验概要 This protocol is designed to recovery RNA from enzymatic reactions such as DNase I digestion, In vitro transcription, etc. For RNA desaltin
Sitedirected－Mutagenesis－using－PCR
Site-directed Mutagenesis using PCRMichael P. Weiner, Tim Gackstetter, Gina L. Costa, John C. Bauer, and Keith A. KretzFrom: Molecular Biology: Curren
动脉血气分析六步法
动脉血气分析常用于判断机体是否存在酸碱平衡失调以及缺氧和缺氧程度等的检验手段。是判断呼吸衰竭的最客观指标。 Step 1： 根据 Henderseon-Hasselbach 公式评估血气数值的内在一致性 [ H+ ] = 24 x ( PaCO2 ) / [ HCO3- ] 如果
HP－Tissue－DNA－Midi－Protocol
实验概要The E.Z.N.A.® HP Tissue DNA Midi Kit is designed for efficient recovery of genomic DNA up to 60 kb in size from up to 500mg of tissue samples.
Protocol－for－Isolating－DNA－from－Blood－with－Nucleated－Red－blood－Cells
实验概要DNA isolation from fish or avian blood sample can be difficult because it contains nucleated red blood cells. E.Z.N.A. NRBC Blood DNA Kit is de
噬粒（phagemid）
Phagemid Related Protocol (Erik)provides procedures for phagemid lysate preparation, titering phagemid, determining uracil incorperation and SS DNA pr