激光扫描共焦显微镜技术

l 样品要求:1.经荧光探剂标记(单标、双标、三标)2.固定的或活的组织3.固定的或活的贴壁培养细胞(Confocal专用小培养皿,盖玻片)4.悬浮细胞,甩片或滴片后,用盖玻片封一. 组成倒置或直立荧光显微镜、扫描头(照明针孔、探测针孔、荧光滤片系统、镜扫描系统和光电倍增管)、扫描头控制电路、计算机和图像输出设备二. 原理Confocal 利用放置在光源后的照明针孔和放置在检测器前的探测针孔实现点照明和点探测,来自光源的光通过照明针孔发射出的光聚焦在样品焦平面的某个点上,该点所发射的荧光成像在探测针孔上,该点以外的任何发射光均被探测针孔阻挡。照明针孔与探测针孔对被照射点或被探测点来说是共轭的,因此被探测点即共焦点,被探测点所在的平面即共焦平面。计算机以像点的方式将被探测点显示在计算机屏幕上,为了产生一幅完整的图像,由光路中的扫描系统在样品焦平面上扫描,从而产生一幅完整的共焦图像。只要载物台沿着Z轴上下移动,将样品新的一个层面移动......阅读全文

细胞骨架的荧光探针标记方法

细胞骨架主要有微管(micmtuble, MT),微丝(microfilament, MF),中间丝(intermediate filament, IF三种类型。它们分别由不同的蛋白单体组装而成,其中微管蛋白(tubulin)、肌动蛋白(actin)、波形蛋白(vimentin)等是细胞骨架的重要组

激光扫描共聚焦荧光显微镜的成像原理和基本结构

    激光扫描共聚焦荧光显微镜是一种利用计算机、激光和图像处理技术获得生物样品三维数据、先进的分子细胞生物学的分析仪器。主要用于观察活细胞结构及特定分子、离子的生物学变化,定量分析,以及实时定量测定等。   成像原理   采用点光源照射标本,在焦平面上形成一个轮廓分明的小的光点,该点被照射后发出的

激光扫描共聚焦显微镜的激光共聚焦显微镜结构

激光共聚焦扫描显微镜(Confocal laser scanning microscope,CLSM)用激光作扫描光源,逐点、逐行、逐面快速扫描成像,扫描的激光与荧光收集共用一个物镜,物镜的焦点即扫描激光的聚焦点,也是瞬时成像的物点。系统经一次调焦,扫描限制在样品的一个平面内。调焦深度不一样时,就可

光谱扫描型激光共聚焦显微镜的技术指标

  光谱扫描型激光共聚焦显微镜是一种用于生物学领域的分析仪器,于2017年12月20日启用。  1、电动正置荧光显微镜: 1.1、主机:具体粗/微/精三档调焦设置,可快速手动聚焦,也可精确地沿Z轴调节物镜,最小步距25nm; 1.2、镜筒及目镜:人机工程学双目镜筒,镜筒视角可调,观察和照相光路可通过

实验动物技术:激光扫描共聚焦显微镜操作步骤及注意...

实验动物技术:激光扫描共聚焦显微镜操作步骤及注意事项激光扫描共聚焦显微镜可测定的样品种类很多.包括生物材料、组织(切片)、细胞(亚细胞)结构等。样品中荧光的来源主要有如下几种:自发荧光(autofluorescence)、荧光染色、免疫荧光、荧光蛋白、诱发荧光(induced fluoresce

激光扫描共聚焦显微镜技术的主要应用范围有哪些

激光扫描聚焦扫描显微镜应用广泛,在生命科学、医学研究中日益受到重视。● 原位鉴定细胞或组织里的生物大分子、观察细胞或亚细胞形态结构原位检测核酸;检测蛋白质、抗体及其他大分子;检测细胞凋亡;细胞器的观察和测定(线粒体、溶酶体、内质网和高尔基体);检测细胞融合;观测细胞骨架;检测细胞间隙连接通讯;检测细

激光扫描共聚焦显微镜的光源设计和分光采集技术的改进

共焦显微镜从产生至今获得了巨大的发展,扫描方式从最初的狭缝扫描方式(扫描速度较快,图像分辨率不高),到阶梯式扫描技术(提高了图像分辨率,标本制备要求太高),再到驱动式光束扫描器(扫描速度较快,符合共聚焦原理)。另外,目前激光扫描共聚焦显微镜的光源设计和分光采集技术也有较大的改进,主要集中在如下几个方

激光扫描共聚焦显微镜操作步骤

观察步骤及仪器操作  根据实验要求制备样品完毕后。即可进行观察。基本步骤如下: (1)开启仪器电源及光源:一般先开启显微镜和激光器,再启动计算机,然后启动操作软件,设置荧光样品的激发光波长,选择相应的滤光镜组块。以便光电倍增管(photo multiplier tube,PMT)检测器能得到足够的信

首个超声诱导激光扫描显微镜面世

韩国科学家开发出世界上首个超声波诱导激光扫描显微镜,该技术能够利用超声波临时产生的气泡对生物组织进行更深入、更详细的观察,有望促进生物科学研究以及临床实践的发展。相关研究发表于最新一期《自然·光子学》杂志。光学成像和治疗技术广泛应用于生命科学研究和临床实践,但由于生物组织内存在光散射现象,使光传输率

首个超声诱导激光扫描显微镜面世

科技日报北京10月10日电 (记者刘霞)韩国科学家开发出世界上首个超声波诱导激光扫描显微镜,该技术能够利用超声波临时产生的气泡对生物组织进行更深入、更详细的观察,有望促进生物科学研究以及临床实践的发展。相关研究发表于最新一期《自然·光子学》杂志。光学成像和治疗技术广泛应用于生命科学研究和临床实践,但

Olympus-激光扫描共聚焦显微镜共享

仪器名称:激光扫描共聚焦显微镜仪器编号:A23000005产地:日本生产厂家:Olympus型号:FV3000RS出厂日期:20230216购置日期:20230216样品要求:共聚焦小皿、载玻片、玻璃底多孔板等所属单位:化学系>分析中心>光学显微成像放置地点:清华大学生命科学馆141固定电话:010

激光扫描共聚焦显微镜操作步骤

  1.观察步骤及仪器操作 根据实验要求制备样品完毕后。即可进行观察。基本步骤如下:  (1)开启仪器电源及光源:一般先开启显微镜和激光器,再启动计算机,然后启动操作软件,设置荧光样品的激发光波长,选择相应的滤光镜组块。以便光电倍增管(photo multiplier tube,PMT)检测器能得到

激光扫描共聚焦显微镜中检测装置

激光扫描共聚焦显微镜中检测装置激光扫描共聚焦显微镜中检测装置恢测器的主要作用是将接收到的光俏早转化戊电信l仪转视处理形成图像,所以彼则器的性能和类型对于提高图像质量也分关歪要。检测器图像质量产生的十要固累是给十效率(QH)和啪声水平。其他厅面处有允谱范闲、动想范附和线性等。臣子效率是指到达检测器的光

激光扫描共聚焦显微镜的问题

激光扫描共聚焦显微镜中各种样品串色的问题及其校正在图 5 中显示。图 5( a)中的纤维原细胞, Alexa Fluor488 绿色荧光串色进入 Mito Tracker 红色通道,当样品用 488 激光和 543 激光同时扫描时,会产生黄色的肌动蛋白丝。序列扫描和检测(图 5d)消除了串色影响。同

激光扫描共聚焦显微镜的应用

  应用功能  激光扫描共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope,CLSM)是近代最先进的细胞生物医学分析仪器之一。它是在荧光显微镜成像的基础上加装激光扫描装置,使用紫外光或可见光激光荧光探针,利用计算机进行图像处理,不仅可观察固定的细胞、组织切片,还可对活

激光共聚扫描显微镜的研发历史

  激光扫描共聚焦显微镜在荧光显微镜成像基础上加装了激光扫描装置,利用计算机进行图像处理,把光学成像的分辨率提高了30%--40%,使用紫外或可见光激发荧光探针,从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像,在亚细胞水平上观察诸如Ca2+ 、PH值,膜电位等生理信号及细胞形态的变化,成为形态学,分子生物

共聚焦激光扫描显微镜的应用

膜电位 以往测定膜电位多用微电极直接插入法测量,不仅操作麻烦,而且对细胞也是一种损伤。共聚焦激光扫描显微镜则可利用荧光探针在细胞膜内外分布的差异测出膜电位,不但可以观察细胞膜电位的变化结果,更重要的是可以用于连续监测膜电位的迅速变化。膜电位荧光探针根据其对膜电位变化反应速度的快慢分为快、慢两类探针,

生物显微镜激光扫描共聚焦显微镜概述

生物显微镜--激光扫描共聚焦显微镜概述激光扫描共聚焦显微镜(laser sconningconfocal microscope,LSCM)在生物医学领域的主要应用是通过一种或多种荧光探针标记后可对固定的组织或活体标本进行观察研究。当这些标本用普通荧光光学显微镜观察时,来自焦点以外的其他区域的荧光对结

生物显微镜激光扫描共聚焦显微镜概述

生物显微镜--激光扫描共聚焦显微镜概述激光扫描共聚焦显微镜(laser sconningconfocal microscope,LSCM)在生物医学领域的主要应用是通过一种或多种荧光探针标记后可对固定的组织或活体标本进行观察研究。当这些标本用普通荧光光学显微镜观察时,来自焦点以外的其他区域的荧光对结

简介激光显微共焦拉曼光谱仪的探测、放大和记录系统

  探测器又称检测器,在拉曼光谱仪中,被用于探测仪器收集到的拉曼散射光或经过变换的信号。传统的拉曼光谱仪一般采用光电倍增管或电子计数器作为检测器,用于对分光后的光谱逐点(即逐频率)扫描以得到完整的拉曼光谱。常用的探测器有硅CCD探测器、紫外强化CCD探测器、近红外(NIR)单元探测器和光电倍增管。C

激光共聚焦显微分析中是如何实现共焦的,有什么优点

  共聚焦显微镜的工作原理是样品中的点激发(衍射极限点)和所得荧光信号的点检测。探测器上的针孔提供了阻挡离焦荧光的物理屏障。仅记录通风盘的对焦或中心点。光栅一次扫描一个样本允许通过简单地改变z焦点来收集薄的光学部分。可以堆叠所得到的图像以产生样本的3D图像。  激光扫描共聚焦显微镜与传统宽场显微镜相

激光显微共焦拉曼光谱仪的外光路系统相关介绍

  外光路系统是指在激光器之后、单色仪之前的一套光学系统(包括样品池)。它的作用是为了有效地利用光源强度、分离出所需要的激光波长、减少光化学反应和减少杂散光、以及最大限度地收集拉曼散射光,还要适合于不同状态的试样在各种不同条件下(如高、低温)的测试。纯化后的激光经反射镜改变光路再由物镜准确地聚焦在样

光学显微镜技术的新发展以及各自的突出优点

  荧光显微镜,是在光镜水平上对细胞内特异的蛋白质、核酸、糖类、脂质以及某些离子等组分进行定性定位研究的有力工具。  激光扫描共焦显微镜,成像清晰,分辨率高,在研究亚细胞结构与组分的定位及动态变化等方面的应用越来越广泛,荧光共振能量转移技术、荧光漂白恢复技术以及单分子成像技术等都离不开激光扫描共焦显

共定位分析应通过获得薄的光学切片来进行

对于厚度小于 5μm 的样品,比如贴壁细胞或很薄的组织切片,在常规的宽场荧光显微镜下,定量的共定位分析一般是可以的。然而,对于厚样品,图像应以具有一定轴向尺寸的光学切片来记录,来分析看起来共定位的荧光团是否真正位于同一个侧向焦平面上,或在 Z 轴上他们是否彼此叠加。厚样品的荧光团共定位分析应通过获得

激光聚焦显微镜的原理

激光聚焦显微镜是一种高分辨率的显微成像技术。普通的荧光光学显微镜在对较厚的标本(例如细胞)进行观察时,来自观察点邻近区域的荧光会对结构的分辨率形成较大的干扰。共聚焦显微技术的关键点在于,每次只对空间上的一个点(焦点)进行成像,再通过计算机控制的一点一点的扫描形成标本的二维或者三维图象。在此过程中,来

激光共聚焦扫描显微技术原理

激光共聚焦扫描显微技术(Confocal laser scanning microscopy)是一种高分辨率的显微成像技术。普通的荧光光学显微镜在对较厚的标本进行观察时,来自观察点邻近区域的荧光会对结构的分辨率形成较大的干扰。共聚焦显微技术的关键点在于,每次只对空间上的一个点(焦点)进行成像,再通过

关于共聚焦激光扫描显微的不同类型介绍

  1、共聚焦激光扫描显微镜使用多个镜子(通常沿x轴和y轴线性扫描2或3个)来扫描样品上的激光,并通过固定的针孔和检测器“扫描”图像。  2、旋转盘(Nipkow盘)共焦显微镜在盘上使用一系列移动针孔来扫描光点。由于一系列针孔平行扫描一个区域,因此与激光扫描显微镜相比,允许每个针孔在特定区域上悬停更

共焦显微拉曼光谱仪

1. 共焦拉曼指的是空间滤波的能力和控制被分析样品的体积的能力。通常主要是利用显微镜系统来实现的。 仅仅是增加一个显微镜到拉曼光谱仪上不会起到控制被测样品体积的作用的—为达到这个目的需要一个空间滤波器。2.(1)、显微是利用了显微镜,可以观测并测量微量样品,zui小1微米左右(2)、共焦是样品在显微

荧光标记杂交信号的检测方法

由于荧光显微镜可以选择性地激发和探测样品中的混合荧光标记物,并具有很好的空间分辨率和热分辨率,特别是当荧光显微镜中使用了共焦激光扫描时,分辨能力在实际应用中可接近由数值孔径和光波长决定的空间分辨率,而在传统的显微镜是很难做到的,这便为DNA芯片进一步微型化提供了重要的检测方法的基础。大多数方法都是在

基因芯片检测原理(二)

1.荧光标记杂交信号的检测方法使用荧光标记物的研究者最多,因而相应的探测方法也就最多、最成熟。由于荧光显微镜可以选择性地激发和探测样品中的混合荧光标记物,并具有很好的空间分辨率和热分辨率,特别是当荧光显微镜中使用了共焦激光扫描时,分辨能力在实际应用中可接近由数值孔径和光波长决定的空间分辨率,而在传统