铁蛋白免疫电镜技术

(一) 原理 免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体,再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查,观察到铁蛋白抗体所在的位置,即抗原所在。(二)材料与试剂1.马脾铁蛋白2.硫酸铵3.硫酸镉4.双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante XC)以0.30Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将XC配制成1%溶液。注意配制的水及容器必须特别清洁,配制后放置4℃数天,以不出现沉淀为准。如出现沉淀XC的多聚体形成,应重配。5.0.30Mol/L pH 9.5硼盐酸缓冲液6.0.1Mol/L硫酸铵液7.0.05Mol/L pH 7.4 PBS液(三)操作方法1.铁蛋白的提取⑴ 配制2%硫酸铵液,并以1Mol/L的NaOH或HCl调pH值,正好为5.85。取1g铁蛋白溶于100ml的2%硫酸铵液中。⑵ 加入20%硫酸镉,使最终浓度为5%,混匀,4℃过夜。⑶ 1 500g离心(4℃)2h......阅读全文

非标记抗体免疫电镜技术

一、原理 标记抗体法虽然具有许多优点,但也存在一些难以克服的问题,如标记抗体的分子增大,对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合,影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素,通过一系统的非标记抗体的免疫学反应,对组织

非标记抗体免疫电镜技术

(一)  原理标记抗体法虽然具有许多优点,但也存在一些难以克服的问题,如标记抗体的分子增大,对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合,影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素,通过一系统的非标记抗体的免疫学反应,对组

断裂—标记免疫电镜技术介绍

此法是先进行冷冻断裂,再做免疫标记,从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。(1)临界点干燥法①固定:1.0%~2.5%戊二醛PBS液4℃1~2h,PBS冲洗3min×3。如为细胞悬液,可加入30%BSA后加入1%戊二醛,使BSA凝胶化,将凝胶切成2mm左右的小块,用30%的甘油—PBS浸透

免疫学技术专题:非标记抗体免疫电镜技术

一、原理标记抗体法虽然具有许多优点,但也存在一些难以克服的问题,如标记抗体的分子增大,对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合,影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素,通过一系统的非标记抗体的免疫学反应,对组织中的

免疫铁蛋白技术的定义和应用

中文名称免疫铁蛋白技术英文名称immunoferritin technique定  义将抗体以共价键与铁蛋白连接,利用电子密度大的铁蛋白在电子显微镜下为相应的抗原定位提供标记的方法。铁蛋白也可以标记抗原或其他蛋白质。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术

冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术(1)新鲜或固定的细胞进行直接法或间接法免疫标记。(2)PBS(pH7.5)冲洗3min×2,加入1mmol/l MgCl2蒸馏水洗洗3min×3,离心沉集细胞。(3)将细胞团置于小纸板上,入液氮冷却的Freon中,取出入冷冻蚀刻仪中进行断裂操作,再于-100℃蚀刻1mi

免疫电镜术的技术特点

中文名称免疫电镜术英文名称immunoelectron microscopy;IEM定  义一种与免疫化学方法相结合的电镜法。样品先作免疫化学染色,再用电镜观察。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

非标记抗体免疫电镜实验技术

(一) 原理标记抗体法虽然具有许多优点,但也存在一些难以克服的问题,如标记抗体的分子增大,对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合,影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素,通过一系统的非标记抗体的免疫学反应,对组织

非标记抗体免疫电镜实验技术

实验概要本文介绍了非标记抗体免疫电镜实验技术的具体操作方法。实验原理标记抗体法虽然具有许多优点,但也存在一些难以克服的问题,如标记抗体的分子增大,对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合,影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的

免疫电镜术的技术特点

中文名称免疫电镜术英文名称immunoelectron microscopy;IEM定  义一种与免疫化学方法相结合的电镜法。样品先作免疫化学染色,再用电镜观察。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

免疫电镜技术(immunoelectronmicroscopy)的染色方法

免疫电镜技术与光镜免疫细胞化学染色方法的基本原理和试剂准备基本相同,相关内容可参考本书第四章,这里仅介绍免疫电镜的几种染色方法,包括包埋前染色、包埋后染色和冰冻超薄切片免疫染色三种。1.包埋前染色 包埋前染色即在进行常规电镜包埋处理前先行免疫组织化学染色,然后于解剖显微镜下将免疫反应阳性部位取出

非标记抗体免疫电镜实验技术

(一) 原理标记抗体法虽然具有许多优点,但也存在一些难以克服的问题,如标记抗体的分子增大,对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合,影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素,通过一系统的非标记抗体的免疫学反应,对组织

非标记抗体免疫电镜实验技术

实验概要本文介绍了非标记抗体免疫电镜实验技术的具体操作方法。实验原理标记抗体法虽然具有许多优点,但也存在一些难以克服的问题,如标记抗体的分子增大,对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合,影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的

免疫电镜术的技术特点

中文名称免疫电镜术英文名称immunoelectron microscopy;IEM定  义一种与免疫化学方法相结合的电镜法。样品先作免疫化学染色,再用电镜观察。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

免疫标记电镜技术标本制备的要求

  为保持组织的抗原性,固定剂不宜过强。  1.包埋前染色  优点是切片染色前不经过锇酸固定、脱水及树脂包埋等过程,抗原未被破坏,易于获得良好的免疫反应。特别适用于含抗原量较少的组织。  2.包埋后染色  优点是超微结构保存较好,方法简便,阳性结构有高度的可重复性,能在同一张切片上进行多重免疫染色。

冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术介绍

(1)新鲜或固定的细胞进行直接法或间接法免疫标记。(2)PBS(pH7.5)冲洗3min×2,加入1mmol/l MgCl2蒸馏水洗洗3min×3,离心沉集细胞。(3)将细胞团置于小纸板上,入液氮冷却的Freon中,取出入冷冻蚀刻仪中进行断裂操作,再于-100℃蚀刻1min 。(4)制做断裂面复型。

免疫电镜术的技术方法介绍

中文名称免疫电镜术英文名称immunoelectron microscopy;IEM定  义一种与免疫化学方法相结合的电镜法。样品先作免疫化学染色,再用电镜观察。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

免疫电镜技术关键的几个问题

免疫电镜技术关键的几个问题免疫电镜集电子显微技术与免疫细胞化学技术于一体,能显示抗原或抗体在细胞超微结构水平的位置,已成为当今生物医学领域的一项重要研究手段。由于免疫电镜制作过程长,操作程序烦锁,因此,要得到满意的免疫金染色切片,必须在关键环节上给予注意,以下我们就免疫电镜染色技术中的几个问题进行探

免疫电镜技术关键的几个问题

  免疫电镜技术关键的几个问题   免疫电镜集电子显微技术与免疫细胞化学技术于一体,能显示抗原或抗体在细胞超微结构水平的位置,已成为当今生物医学领域的一项重要研究手段。由于免疫电镜制作过程长,操作程序烦锁,因此,要得到满意的免疫金染色切片,必须在关键环节上给予注意,以下我们就免疫电镜染色技术中的几

电镜免疫胶体金―银法染色技术

免疫胶体金―银染色(immunogold-sliverstaining)技术系20世纪80年代Holgate将免疫 金染色和银显影方法结合而建立的一种新型检测技术,亦可用于电镜包埋前染色。其基本原理是先进行免疫胶体金染色标记抗原,使其结合在组织细胞抗原所在位置,然后进行物理显影,当显影剂中的对

酶免疫电镜技术原理、材料和操作方法

(一)原理酶免疫电镜技术是利用酶的高效率的催化作用对其底物的反应形成不同的电子密度,借助于电子显微镜观察,证明酶的存在,从而对抗原进行定位。(二)材料与试剂1.PBS液取NaCl 8.5g,Na2HPO40.85g,KH2PO40.54g,加水至1 000ml即可。2.DAB溶液取5mgDAB(3、

免疫电镜术

中文名称免疫电镜术英文名称immunoelectron microscopy;IEM定  义一种与免疫化学方法相结合的电镜法。样品先作免疫化学染色,再用电镜观察。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),方法与技术(二级学科)

酶免疫电镜试剂

  1.PBS液 取NaCl 8.5g,Na2HPO40.85g,KH2PO40.54g,加水至1 000ml即可。   2.DAB溶液 取5mgDAB(3、3二氨基联苯胺)加入10mlTris-HCl缓冲液(0.05mMol/L pH 7.6),加1%H2O20.5ml~1ml。配制时,避光进行,

酶免疫电镜试剂

  1.PBS液 取NaCl 8.5g,Na2HPO40.85g,KH2PO40.54g,加水至1 000ml即可。   2.DAB溶液 取5mgDAB(3、3二氨基联苯胺)加入10mlTris-HCl缓冲液(0.05mMol/L pH 7.6),加1%H2O20.5ml~1ml。配制时,避光进行

免疫电镜(Immune-electron-microscopy)原理

(一)  原理免疫电镜技术是免疫化学技术与电镜技术结合的产物,是在超微结构水平研究和观察抗原、抗体结合定位的一种方法学。它主要分为两大类:一类是免疫凝集电镜技术,即采用抗原抗体凝集反应后,再经负染色直接在电镜下观察;另一类则是免疫电镜定位技术。该项技术是利用带有特殊标记的抗体与相应抗原相结合,在电子

大鼠铁蛋白(Ferritin)酶联免疫分析

大鼠铁蛋白(Ferritin)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定大鼠血清,血浆,组织及相关液体样本中铁蛋白(Ferritin)的含量。实验原理:    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠铁蛋白(Ferritin)水平。用纯化的大鼠铁蛋白(Ferri

人铁蛋白(Ferritin)酶联免疫分析

人铁蛋白(Ferritin)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用       目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆,组织及相关液体样本中铁蛋白(Ferritin)的含量。实验原理:    本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人铁蛋白(Ferritin)水平。用纯化的人铁蛋白(Ferritin)

非标记抗体免疫电镜

原理 标记抗体法虽然具有许多优点,但也存在一些难以克服的问题,如标记抗体的分子增大,对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合,影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素,通过一系统的非标记抗体的免疫学反应,对组织中的抗

免疫电镜标本固定实验

实验步骤1. 血管灌注固定固定效果最好,能使超微结构得到很好的保存。灌注装置由加压气球、压力表、三通接头和连接管道组成。不同的组织器官必须选择合适的灌注压力,详见有关书籍。灌注固定一般维持 10~15 min。然后用相同的固定液继续浸泡固定 2~4 h。2. 浸泡固定组织块切小后立即投入到固定液中,

免疫电镜标本固定实验

实验方法原理 实验步骤 1. 血管灌注固定固定效果最好,能使超微结构得到很好的保存。灌注装置由加压气球、压力表、三通接头和连接管道组成。不同的组织器官必须选择合适的灌注压力,详见有关书籍。灌注固定一般维持 10~15 min。然后用相同的固定液继续浸泡固定 2~4 h。2. 浸泡固定组织块切小后立即