免疫学技术专题：非标记抗体免疫电镜技术
一、原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的抗原进行定位检测。不标记抗体法又可分为用标记物显示和不同标记物显示两种方法。前者利用基因工程方法制备双特异性抗体的F(ab′)2，一个Fab片段与标本中的抗原结合，一个Fab是抗体蛋白的结合片段。在抗体与标本作用后，再加入铁蛋白与抗体结合，从而显示组织内抗原的所在部位。后者则用磷酸钨负染后，直接电镜观察。二、材料及试剂1．待检病毒材料 如粪便，气管分泌物、脑脊髓液、组织培养液等。2．高速离心机3．已知抗体4．磷钨酸5．琼脂糖6．其它三、操作方法1．经典法① 将被检病毒材料0.9ml，加1︰5～1︰10稀释的特异性免疫血清0......阅读全文
免疫学技术专题：非标记抗体免疫电镜技术
一、原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织中的
非标记抗体免疫电镜技术
（一） 原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应
非标记抗体免疫电镜技术
一、原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
非标记抗体免疫电镜实验技术
实验概要 本文介绍了非标记抗体免疫电镜实验技术的具体操作方法。 实验原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法
非标记抗体免疫电镜实验技术
（一） 原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
非标记抗体免疫电镜实验技术
(一) 原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱;化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响;结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
非标记抗体免疫电镜实验技术
实验概要本文介绍了非标记抗体免疫电镜实验技术的具体操作方法。实验原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的
免疫电镜相关技术实验——酶标记免疫电镜技术
实验方法原理该技术是以酶为抗原—抗体反应的标记物，在不改变抗原抗体的免疫反应特异性，亦不降低酶活性条件下，与相应底物作用后形成不溶性的反应物。在电镜下形成为电子散射力强的终末产物。用于免疫电镜标记的酶有辣根过氧化物酶 (HRP)碱性磷酸酶 (AKP 或 ALP)葡萄糖氧化酶(GOP) 等。目前常用的
免疫学技术：铁蛋白免疫电镜技术
一、 原理免疫铁蛋白技术是以铁蛋白标记抗体，再以铁蛋白抗体与待检抗原作用。通过电镜检查，观察到铁蛋白抗体所在的位置，即抗原所在。二、材料与试剂1．马脾铁蛋白2．硫酸铵3．硫酸镉4．双异氰酸镉二甲苯(Metaxylene dlisocyante XC)以0.30Mol/L pH 9.5硼酸盐缓冲液将
免疫电镜相关技术实验——胶体金标记免疫电镜技术
实验材料病毒试剂、试剂盒胶体金仪器、耗材电子显微镜实验步骤免疫胶体金标记技术又称免疫金染色技术 (immunogold staining technique), 是 Faulk 和Taylor 于 1971 年发现直径为 5~50nm 的胶体金 (colloidal gold) 在电镜下具有很高的电
断裂标记免疫电镜技术（2）
)超薄切片法步骤:①至⑤同临界点干燥法。⑥1%锇酸，室温固定2h，系列酒精或丙酮脱水，常规电镜包埋。⑦切半薄片，光镜定位合适的断裂部位，再切超薄切片，铀铅染色，透射电镜观察。断裂标记法目前文献报告应用较多的是植物凝集素-胶体金免疫标记技术，常用的如刀豆球蛋白(Con A)-- 胶体金免疫标记技术.C
断裂标记免疫电镜技术（1）
断裂-标记免疫电镜技术此法是先进行冷冻断裂，再做免疫标记，从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。(1)临界点干燥法①固定:1.0%~2.5%戊二醛PBS液4℃1~2h，PBS冲洗3min×3。如为细胞悬液，可加入30%BSA后加入1%戊二醛，使BSA凝胶化，将凝胶切成2mm左右的小块，用3
断裂—标记免疫电镜技术介绍
此法是先进行冷冻断裂，再做免疫标记，从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。（1）临界点干燥法①固定：1.0%～2.5%戊二醛PBS液4℃1～2h，PBS冲洗3min×3。如为细胞悬液，可加入30%BSA后加入1%戊二醛，使BSA凝胶化，将凝胶切成2mm左右的小块，用30%的甘油—PBS浸透
非标记抗体免疫电镜
原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对
免疫学技术专题：组织病理实验（二）
（7）切成的蜡带到20~30 cm 长时，右手用另一支毛笔轻轻将蜡带挑起，以免卷曲，并牵引成带，平放在蜡带盒上，靠刀面的一面较光滑，朝下，较皱的一面朝上。（8）用单面刀片切取蜡片一小段，放在载玻上加水一滴，置于放大镜或显微镜下观察切片是否良好。（9）切片工作结束后，应将切片刀取下用氯仿擦去刀上沾着的
免疫学技术专题：组织病理实验（一）
标签： 组织病理组织学技术包括、组织学制片技术、胚胎学制片技术、组织化学技术、荧光组化及免疫组化技术、组织培养技术、各种特殊显微技术、电镜组织学技术。组织学技术不但应用于组织学本学科，并且广泛应用于其他多学科，如生物学、解剖学、病理学、肿瘤学、法医学、临床诊断学等。实验方法石蜡切片法冰冻切片实验方法
冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术
冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术(1)新鲜或固定的细胞进行直接法或间接法免疫标记。(2)PBS(pH7.5)冲洗3min×2，加入1mmol/l MgCl2蒸馏水洗洗3min×3，离心沉集细胞。(3)将细胞团置于小纸板上，入液氮冷却的Freon中，取出入冷冻蚀刻仪中进行断裂操作，再于-100℃蚀刻1mi
非标记抗体免疫电镜技术原理、材料和操作方法
（一） 原理标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组织
非标记抗体免疫电镜实验
实验方法原理 标记抗体法虽然具有许多优点，但也存在一些难以克服的问题，如标记抗体的分子增大，对细胞膜和组织的穿透力减弱；化学交联反应对抗体和酶的活性有所影响；结合物中未标记的抗体可与抗原竞争结合，影响检测方法的敏感性等。不标记抗体法可以避免上述的不利影响因素，通过一系统的非标记抗体的免疫学反应，对组
免疫球蛋白标记技术_荧光素标记抗体技术
实验方法原理目前用于抗体标记的荧光素主要有异硫氰酸荧光素（Fluorescein isothiocynate，FITC）或罗达明（Lissamine rhodamine B200，RB200）。在碱性条件下FITC的碳酰胺键可与抗体赖氨酸的ε氨基共价结合，标记后的抗体仍保持与相应抗原结合的能力。在荧
冷冻蚀刻表面标记免疫电镜技术介绍
（1）新鲜或固定的细胞进行直接法或间接法免疫标记。（2）PBS（pH7.5）冲洗3min×2，加入1mmol/l MgCl2蒸馏水洗洗3min×3，离心沉集细胞。（3）将细胞团置于小纸板上，入液氮冷却的Freon中，取出入冷冻蚀刻仪中进行断裂操作，再于-100℃蚀刻1min 。（4）制做断裂面复型。
免疫标记电镜技术标本制备的要求
为保持组织的抗原性，固定剂不宜过强。 1.包埋前染色 优点是切片染色前不经过锇酸固定、脱水及树脂包埋等过程，抗原未被破坏，易于获得良好的免疫反应。特别适用于含抗原量较少的组织。 2.包埋后染色 优点是超微结构保存较好，方法简便，阳性结构有高度的可重复性，能在同一张切片上进行多重免疫染色。
免疫球蛋白标记技术_酶标记抗体
免疫标记技术是用特定的物质标记抗原或抗体进行的抗原抗体反应。可借助各种仪器观察结果或进行自动化测定，可在细胞、亚细胞、超微结构及分子水平上，对抗原抗体反应进行定性和定位研究；或应用各种液相和固相免疫分析方法，对液体中的抗原、半抗原或抗体进行定性和定量测定。实验方法原理酶标记物包括酶标记抗原、酶标记抗
非标记抗体免疫电镜操作步骤
1．经典法（1）将被检病毒材料0.9ml，加1︰5～1︰10稀释的特异性免疫血清0.1ml充分混合。（2）置37℃作用1h或37℃1h后再置4℃过夜。（3）以17 000r/min～23 000r/min离心90min。（4）吸去上清，将离心管口倒置于滤纸上，吸去残留液体。（5）沉淀物中加少量H2
免疫学技术专题：斑点金免疫渗滤测定法（DIGFA）
基本原理斑点金免疫渗滤测定法是在斑点免疫渗滤测定法基础上，改用胶体金标记物代替酶，省去底物显色的步骤。试验方法是以硝酸纤维素膜（NC膜）为载体，将试剂及标本滴加在膜上，通过渗滤而逐步反应。全过程可于数分钟内完成，阳性结果在膜上呈红色斑点。试剂及材料1. 渗滤装置：为一塑料小盒（4x3x0.6cm
标记抗体的免疫放射技术(IRMA)
（一）原理 IRMA是采用过量的标记抗体与待测抗原的非竞争性结合反应，然后加入固相的抗原吸附剂以结合游离的标记抗体，离心去沉淀，测定上清液中的放射性强度，从而推算出待测样品的抗原含量。 见表1。表1 IRMA与RIA的区别IRMARIA标记物质抗体抗原标记物用量过量限量反应方式直接结合竞争
标记抗体的免疫放射技术(IRMA)
（一）原理 IRMA是采用过量的标记抗体与待测抗原的非竞争性结合反应，然后加入固相的抗原吸附剂以结合游离的标记抗体，离心去沉淀，测定上清液中的放射性强度，从而推算出待测样品的抗原含量。（二）放射免疫检测与免疫放射检测(即IRMA与RIA)的区别见表13－4。表13－4 IRMA与RIA的区别
标记抗体的免疫放射技术(IRMA)
（一）原理 IRMA是采用过量的标记抗体与待测抗原的非竞争性结合反应，然后加入固相的抗原吸附剂以结合游离的标记抗体，离心去沉淀，测定上清液中的放射性强度，从而推算出待测样品的抗原含量。 （二）放射免疫检测与免疫放射检测(即IRMA与RIA)的区别 见表13－4。 表13－
酶免疫技术抗体的酶标记方法
用于酶免疫技术的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。目前酶免疫技术检测中常用的酶为辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(AP),其次还有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶和苹果酸脱氢酶等。由于辣根过氧化
非标记抗体免疫电镜的操作步骤
1．经典法 （1）将被检病毒材料0.9ml，加1︰5～1︰10稀释的特异性免疫 血清0.1ml充分混合。（2）置37℃作用1h或37℃1h后再置4℃过夜。（3）以17 000r/min～23 000r/min离心90min。（4）吸去上清，将离心管口倒置于滤纸上，吸去残留液体。（5）沉淀物中加少量H