蛋白质组实验全套流程方案2
聚丙烯酰胺凝胶的配制表1 配制Tris-甘氨酸SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液溶液成分不同体积(ml)凝胶液中各成分所需体积(ml)5101520253040506% 水2.65.37.910.613.215.921.226.5 30%丙烯酰胺溶液123456810 1.5 mol/L Tris (pH8.8)1.32.53.856.37.51012.5 10% SDS0.050.10.150.20.250.30.40.5 10%过硫酸氨0.050.10.150.20.250.30.40.5 TEMED0.0040.0080.0120.0160.020.0240.0320.048% 水2.34.66.99.311.513.918.523.2&nbs......阅读全文
Southern-Blot-实验流程(包括原理/细节)2
)标记探针检测取标记产物和普通PCR扩增产物各1μl,1.0%的琼脂糖凝胶电泳。由于大分子量的DIG掺入,标记产物泳动速度比普通PCR产物要慢。所以根据电泳图就可以判断是否标记上和有没有非特异标记!其余标记产物-20℃保存。如果要准确检测标记效率(一般不必),取标记产物1μl和Dig标记的对照DNA
蛋白质组学研究的完整解决方案
人体内真正发挥作用的是蛋白质,蛋白质扮演着构筑生命大厦的“砖块”角色,随着破译生命密码的人类基因组计划进入尾声,一个以蛋白质和药物基因学为研究重点的后基因组时代已经拉开序幕,蛋白质将是今后的重点研究方向之一。然而,蛋白质的分离和鉴定非常费时,目前测定蛋白质的技术远远落后于破译基因组的工具,最好的实验
基本方案2-基因组-DNA-的扩增
实验材料基因组DNA试剂、试剂盒4dNTP 混合物10 X PCR 扩增缓冲液寡聚核苷酸引物Taq DNA 聚合酶矿物油筛(子)琼脂糖DNA 分子大小标准参照物仪器、耗材聚丙稀微量离心管循环变温加热器实验步骤
全套抗体标记工具全套抗体和蛋白质标记试剂盒的使用3
表2. ReadiLink™xtra快速抗体标记试剂盒 名称 Ex(nm) Em(nm) 规格 货号 ReadiLink™xtra Rapid iFluor™350抗体标记试剂盒 344 4
全套抗体标记工具全套抗体和蛋白质标记试剂盒的使用1
用特定标签标记抗体已成为生物科学和医学研究中的重要且常规程序,标签的范围从视觉标记(例如荧光染料)到半抗原分子(例如生物素),标签的作用有增强免疫复合物和蛋白质-蛋白质相互作用的可见性,以及用于蛋白质的分离和纯化。 在确定选择哪种标签类型时,应侧重于抗体的下游应用。荧光标
蛋白质组学实验技术大全
每一个领域的发展都是基于技术的进步和革新,蛋白质组学亦然。蛋白质的可变性和多样性等特殊性质导致了蛋白质研究技术远远比核酸技术要复杂和困难得多,但正是这些特性参与和影响着整个生命过程。在开始实验之前,先看看这篇技术简介吧。一 蛋白质与DNA相互作用在许多的细胞生命活动中,例如DNA复制、mRNA转录与
石蜡切片免疫组化染色实验操作流程
1.石蜡切片脱蜡至水:(石蜡切片染色前应置 60℃ 1 小时) 。① 二甲苯 、II,各 10 分钟。② 梯度酒精:100%,2 分钟 95%,2 分钟 80%,2 分钟 70% 2 分钟。③ 蒸馏水洗:5 分钟,2 次(置于摇床)。2.过氧化氢封闭内源性过氧化物酶:3%H2 O2 ,室温 10 分
免疫组化方法的具体实验流程步骤
实验流程简介一、SP三步法1)石蜡切片,常规脱蜡至水。2)0.3%或3%H2O2去离子水(无色液体)孵育10-30分钟,以灭活内源性过氧化物酶活性。3)蒸馏水冲洗,PBS浸泡5分钟4)候选步骤:采用抗原修复:微波(建议30分钟内4次中火)、高压、酶修复方法。自然冷却,再用3分钟×3次.5)血清封闭:
973蛋白质组草图项目预算安排初步方案公示
关于973计划蛋白质组草图项目预算安排初步方案的公示 经过中介机构评估、预算管理部门的综合审查,国家重点基础研究发展计划(973计划)2014年启动的蛋白质组草图项目前两年预算(见附件)方案初步确定。按照《国家重点基础研究发展计划专项经费管理办法》规定的程序,现予蛋白质组草图项目预算安排
Nature-Communications:尿液蛋白质组学研究新突破——标准操作流程(SOP)与全流程质控(QC)体系助力多平台尿液蛋白质组学研究
2025年1月26日,北京航空航天大学医学科学与工程学院刘超团队和中国医学科学院基础医学研究所孙伟团队联合北京理工大学、北京师范大学、中国科学院动物研究所、北京儿童医院、北京协和医院、国家蛋白质科学中心(北京)、中国科学院大连化学物理研究所、北京大学、昌平实验室、深圳湾实验室、广州国家实验室、The
拟南芥叶绿体蛋白质组学分析实验
试剂、试剂盒HEPES-KOH 山梨醇
拟南芥叶绿体蛋白质组学分析实验
试剂、试剂盒 HEPES-KOH山梨醇抗坏血酸维生素 C半胱氨酸PF-Percoll仪器、耗材 浓缩离心设备实验步骤 建议在短日照条件下培养材料以诱导营养生长,并在照光的早期收取材料以提高获得完整叶绿体的产率。所以试剂应在收集材料之前准备好,并连同其他一些设备,如离心机转头及离心管等在冰箱或冰上冷却
拟南芥叶绿体蛋白质组学分析实验
试剂、试剂盒HEPES-KOH山梨醇抗坏血酸维生素 C半胱氨酸PF-Percoll仪器、耗材浓缩离心设备实验步骤建议在短日照条件下培养材料以诱导营养生长,并在照光的早期收取材料以提高获得完整叶绿体的产率。所以试剂应在收集材料之前准备好,并连同其他一些设备,如离心机转头及离心管等在冰箱或冰上冷却至 0
石蜡切片免疫组化实验2
链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结SP法实验方法原理SP(streptavidin-perosidase)法,即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。SP法是最常使用的方法。试剂、试剂盒二甲苯酒精PBS双氧水枸橼酸缓冲液羊血清工作液辣根过氧化物酶链霉素卵白素苏木素DAB仪器、耗材冰箱显微镜烧杯玻璃缸
973计划蛋白质组草图项目预算安排初步方案公示
经过中介机构评估、预算管理部门的综合审查,国家重点基础研究发展计划(973计划)2014年启动的蛋白质组草图项目前两年预算(见附件)方案初步确定。按照《国家重点基础研究发展计划专项经费管理办法》规定的程序,现予公示。社会各界如对该批项目的预算有重大异议,请在2014年9月2
方案5-蛋白质的胰酶消化实验
实验材料冻干的目标蛋白质试剂、试剂盒CaCl2NH4HCO3苯甲基磺酰氟(PMSF)胰酶贮存液Tween-20仪器、耗材聚丙烯试管水浴箱实验步骤1.冻干的蛋白质底物溶解在 1% 的碳酸氢铵中,控制使用尽量少的溶液体积,以达到较高的底物浓度。当蛋白质底物很微量(如小于 1mg) 时,加入 Tween-
方案1-蛋白质的过甲酸氧化实验
实验材料冻干的纯化蛋白样品试剂、试剂盒甲酸氢溴酸过氧化氢NaOH 固体仪器、耗材旋转蒸发器小试管实验步骤1.加入 100ul 过氧化氢到 900ul 甲酸中,在室温下放置让,将反应产生过甲酸 (HCOOOH)。2.在冰上冷冻过甲酸至 0°C。3.在预冷的小试管中,将蛋白质溶解于 50ul 过甲酸中(
安捷伦在HPLC-2023上推出全套GPC/SEC解决方案
整合Polymer Standards Service产品,构成市面上完整的通用GPC/SEC产品组合 2023年6月20日,北京——安捷伦科技公司(纽约证交所:A)今日宣布在HPLC 2023年度会议上展示更加多元的InfinityLab GPC/SEC解决方案。HPLC 2023正于本月18日
免疫组化流程
实验步骤 第一天:1、组织切片置于60℃烘烤1hr2、二甲苯1、2 分别浸泡15min,脱蜡3、水化:100% Etoh 10min X 295% Etoh 5min X 185% Etoh 5min X 170% Etoh 5min X 1注:以下步骤切勿让组织处于干燥状态!4、将切片置于修复盒,
转录组测序流程步骤
以真核转录组测序为例,实验流程为总RNA提取-mRNA分离-建库试剂-定量-文库回收-桥式扩增-上机测序;项目分析流程为数据产出数据=数据去杂-转录组拼接-SSR分析及SNP分析-基因功能注释-基因表达差异分析-差异基因表达模式聚类-差异基因富集分析。
cDNA文库组标准流程六:电转化流程
1.电转化感受态细胞的制备1. 用枪头挑取单克隆菌落,投入盛有10ml LB液体培养基的50ml离心管中。(同时做培养基和枪头的空白对照)2. 37℃,220rpm,培养14-16个小时。3. 第二天,以1:100的比例将这10ml菌液倒入1000ml LB液体培养基中
蛋白质的微量测序分析实验2
测定N-末端封闭蛋白质的内部序列实验材料蛋白质试剂、试剂盒乙酸NaOH丽春红染料三氟乙酸仪器、耗材纤维素膜离心管滤膜实验步骤1. 电泳分离目标蛋白并转移到硝酸纤维素膜。 2. 将硝酸纤维素膜放入盛有50 ml 含0.1%丽春红S料的1%乙酸水溶液的经酸洗的petri 玻璃培养皿。轻轻摇动1 mi
用于蛋白质表达的标签实验2
三、标签的去除由于蛋白标签可能会干扰目标蛋白质的正常功能,所以在完成其促进溶解或亲和纯化的作用后,标签的去除对于生物学和功能研究很有帮助,对 GST 或 MBP 这样的大标签尤其如此,尽管有一些例子显示融合了标签的蛋白质更易结晶 (Smythetal.,2003)。大多数用来向目标蛋白质添加标签的商
蛋白质凝胶染色法实验2
2. 总蛋白质荧光法染色荧光染色法结合了检测灵敏度 (可与银染法媲美) 与染色流程简便性 (与考马斯亮蓝染 色 或 Z n 2+ 反染法相同),且其线性定量范围较比色法大 10〜100 倍 。检测依赖于仪器,需要一个单色激发光源、能将波长较长的发射光从波长较短 (也更亮)的激发光中分离出来的选择性光
蛋白质组数据的多元分析实验
仪器、耗材扫描仪图像分析软件Excel 程序多元数据分析的软件实验步骤用 Progenesis、Excel 和 The Unscrambler 对 2D 凝胶进行多元分析。3.1 确定研究方案后建立蛋白的 2D 凝胶在本章节中不再阐述,但要确定染色方法以便进行凝胶的定量分析(见注释 1 )。3.2
实质等同性(蛋白质组学)实验
实验材料ESI-MSMALDI - MS试剂、试剂盒提取缓冲液仪器、耗材SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验步骤众所周知,在实验室内和实验室间难以保证双向聚丙烯酰胺凝胶电泳的重复性。在我们实验室,强制性地要求严格遵守标准操作程序(sop ) , 以确保不同的操作者可以获得可重复的分离结果。小麦白面粉样品
蛋白质组数据的多元分析实验
仪器、耗材:扫描仪 图像分析软件 Exc
实质等同性(蛋白质组学)实验
实验材料ESI-MSMALDI - MS试剂、试剂盒提取缓冲液仪器、耗材SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验步骤众所周知,在实验室内和实验室间难以保证双向聚丙烯酰胺凝胶电泳的重复性。在我们实验室,强制性地要求严格遵守标准操作程序(sop ) , 以确保不同的操作者可以获得可重复的分离结果。小麦白面粉样品
蛋白质组数据的多元分析实验
仪器、耗材 扫描仪图像分析软件Excel 程序多元数据分析的软件实验步骤 用 Progenesis、Excel 和 The Unscrambler 对 2D 凝胶进行多元分析。3.1 确定研究方案后建立蛋白的 2D 凝胶在本章节中不再阐述,但要确定染色方法以便进行凝胶的定量分析(见注释 1 )。3
实质等同性(蛋白质组学)实验
实验材料:ESI-MS MALDI - MS 试剂、试剂盒:提取缓冲液仪器、耗材:SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳 实验步骤:众所周知,在实验室内和实验室间难