McAb的制备方法
1、体外培养 在细胞培养过程中杂交瘤细胞能产生和分泌McAb，但是一般产生的抗体量很少，约10～100μg/ml。近年来发展了各种新型培养技术和装置，包括用无血清培养液作悬浮培养法，中空纤维培养系统，全自动气升式或深层培养罐以及微囊或粒珠培养系统等。为了大批量生产McAb，有的公司已建成体内外结合的牛淋巴液循环法，大大提高了抗体的生产量。 2、体内诱生法 在小鼠体内接种杂交瘤细胞，制备腹水或血清McAb。 (1)腹水型McAb的制备：选择适当的健康小鼠，先于小鼠腹腔注射0.3ml―0.5ml降植烷或石腊油，7～10d后于每只小鼠腹腔注射阳性克隆的杂交瘤细胞1～5×106 个。待小鼠腹部明显膨大到一定程度时，用9号针头抽取腹水或用16号针头放腹水，可反复收集数次。腹水经3000rpm/min离心后，取上清分装，置-20℃保存备用。腹水出现快慢与注射细胞类型及小鼠的质量有关。注射细胞少，腹水出现慢，......阅读全文
McAb的制备方法
1、体外培养 在细胞培养过程中杂交瘤细胞能产生和分泌McAb，但是一般产生的抗体量很少，约10～100μg/ml。近年来发展了各种新型培养技术和装置，包括用无血清培养液作悬浮培养法，中空纤维培养系统，全自动气升式或深层培养罐以及微囊或粒珠培养系统等。为了大批量生产McAb，有的公司已建成体内外
单克隆抗体(monoclonal－antibody,McAb)的生产
获得稳定的杂交瘤细胞系后，即可根据需要大量生产单抗，以用于不同目的。 一、单抗的大规模制备 目前大量制备单抗的方法主要有两大系统，一是动物体内生产法，这是国内外实验室所广泛采用；另一是体外培养法。 1、动物体内生产单抗的方法 迄今为止，通常情况下均采用动物体内生产单抗的方法，鉴于绝大多数动物用杂交瘤
单克隆抗体(McAb)亲和层析柱纯化
重组人α干扰素作为一种具有广谱抗病毒、抑制肿瘤细胞生长及免疫调节作用的细胞因子新型药物，已在国内外广泛投入临床应用，并取得了显著的疗效。国际上对用于临床的重组干扰素的纯度要求很高，美国NIH规定必须在90%以上，因此生产者普遍采用亲和层析纯化法。我们研制了rHuIFN-α2a的McAb 3F1，
McAb(单克隆抗体)亲和层析柱纯化
重组人α干扰素作为一种具有广谱抗病毒、抑制肿瘤细胞生长及免疫调节作用的细胞因子新型药物，已在国内外广泛投入临床应用，并取得了显著的疗效。国际上对用于临床的重组干扰素的纯度要求很高，美国NIH规定必须在90%以上，因此生产者普遍采用亲和层析纯化法。我们研制了rHuIFN-α2a的 McAb 3F1
单克隆抗体制备(McAb－production)的基本过程
抗原提纯与动物免疫 对抗原的要求是纯度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。如为细胞抗原，可取1×107个细胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经充分乳化，如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原，可将抗原所在的电泳条带切下，研磨后直接用以动物免疫。 选择与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小鼠，
免疫放射分析的应用
免疫放射分析是放射免疫分析的一种衍生技术，1968年首先由Miles和Hales提出用于生血浆胰岛素测定。在反应体系中用标记过量抗体来替代标记抗原的一种较灵敏的技术。只是因为免疫放射分析需要消耗大量抗体以及抗体必须固相化等，PcAb未能满足这一要求而不能推广。McAb有较高的特异性，杂交瘤技术提供了
血清脂蛋白α的原理
用聚苯乙烯微量反应板为固相载体，以apo（a）单克隆抗体（McAb）包被，加入待测标本，使其中的apo（a）与圃相化的McAb结合，洗涤除去未结合的标本中其他蛋白质，再加入酶标记的apo（a）McAb，与结合到固相抗体上的apo（a）作用，洗涤除去未结合的酶标记物。加入酶的相应底物产生颜色反应，
关于血清脂蛋白α的检查原理介绍
用聚苯乙烯微量反应板为固相载体，以apo（a）单克隆抗体（McAb）包被，加入待测标本，使其中的apo（a）与圃相化的McAb结合，洗涤除去未结合的标本中其他蛋白质，再加入酶标记的apo（a）McAb，与结合到固相抗体上的apo（a）作用，洗涤除去未结合的酶标记物。加入酶的相应底物产生颜色反应，
光镜下双/多重免疫标记实验——双重免疫荧光染色
实验步骤1. 古兹菲德-雅各氏病（CJD）病人的尸解脑组织，4％ 中性甲醛固定，石蜡包埋，连续切片，厚 5 μm（贴片前的载玻片应预涂不含有荧光色素的黏合剂）。2. 常规脱蜡，水化。3. 抗原修复（柠槺酸盐缓冲液 pH 6.0 中，高压灭菌器加热 100℃，20 min）及 96％ 甲酸孵育 2 m
免疫球蛋白标记技术_125I标记单克隆抗体技术
实验方法原理氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠，在水溶液中生成次氯酸，为一种温和氧化剂，当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中，可将I2氧化为I＋并结合到氨基酸上。如标记条件温和，标记后的McAb仍具有良好的结合活性，通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原的含量。实验材料McAb125I试剂、试剂盒磷酸缓冲液氯胺
125I标记单克隆抗体技术
同位素标记是一种重要的抗体标记技术，牨977年Yalow等在放射免疫测定法所作突出贡献而获得医学和生理学诺贝尔奖。McAb标记同位素后除应用于放射免疫测定外，还可用于竞争结合试验、体内肿瘤定位等。 (一) 原理 氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠，在水溶液中生成次氯酸，为一种温和氧化剂，当加入到有蛋白质和碘
双抗体夹心ELISA法检测待测样品sTNFα的含量
实验概要本实验利用双抗体夹心ELISA法检测了待测样品sTNF-α的含量。选用两株针对TNF-α分子不同位点的单克隆抗体，即McAb1(包被抗体)与McAb2(酶标抗体)。先用McAb1包被固相载体，使待测sTNF-α与之特异性结合，然后再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的McAb2，则形成McAb
双抗体夹心ELISA法检测待测样品sT...
实验概要本实验利用双抗体夹心ELISA法检测了待测样品sTNF-α的含量。选用两株针对TNF-α分子不同位点的单克隆抗体，即McAb1(包被抗体)与McAb2(酶标抗体)。先用McAb1包被固相载体，使待测sTNF-α与之特异性结合，然后再加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的McAb2，则形成McAb
双抗体夹心ELISA法检测待测样品sTNFα含量
【基本原理】 选用两株针对TNF-α分子不同位点的单克隆抗体，即McAb1（包被抗体）与McAb2（酶标抗体）。先用McAb1包被固相载体，使待测sTNF-α与之特异性结合，然后再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的McAb2，则形成McAb1-sTNF-α -HRP标记McAb2复合物，
双抗体夹心ELISA法检测待测样品sIL2R含量
【基本原理】 选用两株针对sIL-2R分子不同位点的单克隆抗体，即McAb1（包被抗体）与McAb2（酶标抗体）。先用McAb1包被固相载体，使待测sIL-2R与之特异性结合，然后再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的McAb2，则形成McAb1-sIL-2R-HRP标记McAb2复合物，再加入H
单克隆抗体的制备方法4
（5）在第7天换液，以后每2～3天换液1次。 （6）8～9天可见 细胞克隆形成，及时检测抗体活性。 （7）将阳性孔的细胞移至24孔板中扩大培养。 （8）每个克隆应尽快冻存。 2．软琼脂培养法克隆 （1）软琼脂的配制：含有20%NCS（小牛血清）的2倍浓缩的RPMI1640。
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体技术（二）
2. HAT选择杂交瘤 一般在融合24 小时后，加HAT选择培养液。HT和HAT均有商品化试剂50×贮存，用时1 ml加入50 ml20 ％小牛血清完全培养液中。 因为在培养板内已加入饲养细胞、融合后的细胞，200 μl/孔。所以在加选择培养液时应加3倍量的HAT。我们认为，融合后最初补加的量可用
淋巴细胞杂交瘤单克隆抗体制备技术2
检测抗体的方法应根据抗原的性质、抗体的类型不同，选择不同的筛选方法，一般以快速、简便、特异、敏感的方法为原则。 常用的方法有: 1. ELISA用于可溶性抗原蛋白质、细胞和病毒等McAb的检测。 2. RIA用于可溶性抗原、细胞McAb的检测。 3. FACS荧光激活细胞分类仪用于检查细胞
高效液相色谱(HPLC)纯化小鼠腹水中单克隆抗体
从小鼠腹水中纯化mcab的方法有盐析、离子交换层析、凝胶过滤和亲合层析等。应用tsk deae-spw离子交换层析柱从小鼠腹水中纯化mcab不仅纯化速度快，回收率和得率高，而且保持良好的生物学活性。 一、原理 根据离子交换原理，将经硫酸铵粗提的含mcabγ球蛋白上样结合于层析柱上，通过增加洗脱液中的
人α2a，α2b干扰素检测实验
实验方法原理 选用2种针对rHuIFN-α2a和rHuIFN-α2b分子不同表位的McAb，1种McAb作为包被抗体，另1种McAb标记辣根过氧化物酶（HRP）作为结合物，催化底物显色。根据标准品OD值绘制标准曲线，在标准曲线上查出待检标本的含量。实验材料 包被抗体酶标抗体标准品ABTS底物试剂、试
抗独特型抗体及其在医学研究中的应用（三）
(三)抗独特型抗体与肿瘤免疫 表达于肿瘤细胞的肿瘤相关抗原刺激小鼠产生相应的抗体(Ab1),用这种Ab1免疫另一小鼠可诱导产生针对Ab1的抗独型抗体,其中Ab2β（模拟肿瘤相关抗原)注入荷肿瘤的动物或病人可诱导出称之为抗-抗-独特型抗体的Ab3，由于这种Ab3与最初肿瘤相关抗原所诱导的Ab1具
用高效液相色谱纯化小鼠腹水中单克隆抗体
实验概要本实验介绍了高效液相色谱(HPLC)纯化小鼠腹水中单克隆抗体的原理及操作步骤。实验原理从小鼠腹水中纯化mcab的方法有盐析、离子交换层析、凝胶过滤和亲合层析等。应用tsk deae-spw离子交换层析柱从小鼠腹水中纯化mcab不仅纯化速度快，回收率和得率高，而且保持良好的生物学活性。根据离子
简述利什曼病循环抗原的检测
利什曼病循环抗原的检测不但可提示宿主的活动性感染，亦可反映感染度及用作疗效考核。常用的技术有以下3种。 1）酶标记单克隆抗体斑点-ELISA直接法：此法检测利什曼病现症患者血清中相应的CAg，阳性率为90.6%。直接法实验操作简便，全过程为4小时。单克隆抗体-抗原斑点试验（McAb-AST
人α2a，α2b干扰素检测实验——夹心法ELISA
重组人α2a/α2b干扰素生产流程中不可缺少的一环是产品的质量监控，通常采用的是HEp-2/VSV或Wish/VSV系统检测干扰素的生物活性。此系统常由于VSV或细胞的影响而不够稳定，且检测周期较长。（来源：医学基础免疫学实验指导，主编金伯泉李恩善，第1 版，北京：世界图书出版社，1990） 实验
抗体的制备方法与原理2
骨髓瘤细胞的培养可用一般的培养液，如RPMI1640，DMEM培养基。小牛血清的浓度一般在10%～20%，细胞浓度以104～5×105/ml为宜，最大浓度不得超过106/ml。当细胞处于对数生长的中期时，可按1：3～1：10的比例传代。每3～5天传代一次。细胞在传代过程中，部分细胞可能有返祖现象，
ELISA抗原竞争法检测样品中sIL...
实验概要本法是用纯化或重组的IL-2R(α链，P55，CD25，Tac抗原)蛋白包被96孔酶标反应板，同时加入已知量的抗IL-2RMcAb，再分别加入sIL-2R标准品与待测样品。则待测sIL-2R或者sIL-2R标准品与包被的纯化或重组的IL-2R蛋白竞争与抗IL-2R McAb结合。通过与标
标记抗体的应用技术——125I标记单克隆抗体竞争结合试验
实验方法原理125I标记的单克隆抗体能与具有相应抗原的细胞结合，有数百倍以上未标记的特异性抗体同时存在的条件下，则标记抗体的结合受到竞争性抑制。根据不同稀释度抗体分别与相同数量细胞结合后所测得的特异性计数值，可以计算出每个细胞表面的平均抗原密度以及抗原和抗体的亲和力。实验材料细胞McAb抗体试剂、试
ELISA抗原竞争法检测样品中sIL2R含量
实验概要本法是用纯化或重组的IL-2R(α链，P55，CD25，Tac抗原)蛋白包被96孔酶标反应板，同时加入已知量的抗IL-2RMcAb，再分别加入sIL-2R标准品与待测样品。则待测sIL-2R或者sIL-2R标准品与包被的纯化或重组的IL-2R蛋白竞争与抗IL-2R McAb结合。通过与标
用夹心法做白介素6试剂盒的检测实验
用夹心法做白介素6试剂盒的检测实验 ·试剂：包被缓冲液、洗涤液、稀释液、终止液配制同常规ELISA方法。Tac特异性单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的Tac特异性单克隆抗体,HUT-102B2细胞培养上清,PHA。·器材：聚苯乙烯塑料板，ELISA检测仪，37℃水浴箱，4℃冰箱，CO2孵箱。可调
免疫球蛋白纯化技术——纯化重组人α2a干扰素（rHuIFNα2a）
实验方法原理重组人α干扰素作为一种具有广谱抗病毒、抑制肿瘤细胞生长及免疫调节作用的细胞因子新型药物，已在国内外广泛投入临床应用，并取得了显著的疗效。国际上对用于临床的重组干扰素的纯度要求很高，美国NIH规定必须在90 ％以上，因此生产者普遍采用亲和层析纯化法。我们研制了rHuIFN-α2a的McAb