ATCC细胞培养方法
基本原理 通过在支持物（如盖玻片）上培养贴壁细胞，可以应用抗体检测细胞表面抗原的表达或进行酶细胞化学以及免疫细胞化学检测。该方法的优点是细胞贴壁牢固，能够维持细胞生长时的状态。 试剂和设备 细胞悬浮液； 6孔平底组织培养板，或φ60 mm培养皿； 18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸于75%乙醇中的盖玻片； 含血清培养基（通常为 RMPI 1640,含10% 小牛血清，100U/ml青霉素，100μg/ml链霉素）； 超净工作台； CO2孵箱； 盖片镊； 操作步骤 1．用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布； 2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）； 3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；&nbs......阅读全文
细胞培养的方法有哪些
轻轻吹打,可先离心（1000rpm. 2,如要高浓度或需更换新培养基,新鲜培养基重悬沉淀,置培养瓶内轻轻摇晃: 1,吸的越干净越好,(根据配制强度经验),镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后. 一,然后收集离心（1000rpm 5min左右）,50ml培养瓶加入消化液约0；也可复苏当时离心（1000rpm
平滑肌细胞培养方法
贴壁法原代培养1.1 细胞培养1.1.1 培养液配制 DMEM（美国Gibco公司），Hepes（15mmol/L），青霉素（100u/ml），链霉素（100mg/ml），优质胎牛血清（原代培养浓度20%，传代培养浓度10%，美国Hyclone）。1.1.2 培养器皿 25cm2塑料培养瓶（Cost
细胞伤口愈合实验所需材料和仪器
1.人MDA-MB-231cell(ATCC#HTB-26)2.DMEM培养基(Invitrogen#10313-021)3.胎牛血清(ATCC#30-2020)4.PBS(Invitrogen#14190-144)5.BD24孔细胞培养板(Fisher#08-772-1H;BD#353226)6.
常用原代动物细胞培养：肝星状细胞培养材料和方法
材料 相差显微镜，荧光显微镜，手术器械，雄性SD大鼠，体重250-450 g，戊巴比妥钠，200目尼龙网，小牛血清（或胎牛血清，则更好），DMEM，胰酶消化液（以HBSS配），Nycodenz（以GBSS配），D- Hanks'（KCl 0.4 g/L，KH2PO4 0.06 g
干细胞培养传统方法受质疑
人类干细胞通常是在一层饲养细胞上培养的，据认为，这可为细胞提供必需的营养物质，并有助于防止细胞分化。最近，一项新的研究对这种根深蒂固的做法提出了挑战。延伸阅读：更安全的干细胞培养新方法。 众所周知，干细胞是很难维持和培养。像所有的真核细胞一样，它们对养分的有效性、pH值、温度、氧气和二氧化碳的
PC12细胞培养方法步骤
PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株，具神经内分泌细胞的一般特征，因其具可传代特点，广泛应用于神经生理和神经药理学研究。1. PC12细胞有两种：未分化型和分化型。其中未分化型的PC12细胞贴壁能力强，传代时需要胰酶消化，形状不规则。分化型PC12细胞传代时不需要胰酶，直接可以吹下来，形
细胞培养污染拯救及预防方法
概论§ 污染是细胞培养的大敌。预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。§ 一开始就要十分重视，防止污染，否则会前功尽弃，不仅浪费时间，而且浪费人力、物力，甚至造成无法弥补的损失。（一）污染的类型§ 细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质
平滑肌细胞培养方法2
1 材料与方法1.1 材料 9~12d新生健康清洁级KM小鼠，雌雄不限，购自重庆医科大学实验动物中心。RPMI-1640干粉培养基，D-Hanks粉，标准胎牛血清，胰蛋白酶粉（1∶250）均购自Hy-Clone公司；青霉素钠、硫酸链霉素购自华北制药厂；鼠抗兔平滑肌α肌动蛋白单克隆抗体，购自Zymed
植物细胞培养的方法有哪些
植物组织培养一般分为以下几种：1、胚胎培养指以从胚珠中分离出来的成熟或未成熟胚为外植体的离体无菌培养。2、器官培养指以植物的根、茎、叶、花、果等器官为外植体的离体无菌培养，如根的根尖和切段，茎的茎尖、茎节和切段，叶的叶原基、叶片、叶柄、叶鞘和子叶，花器的花瓣、雄蕊（花药、花丝）、胚珠、子房、果实等的
细胞培养污染拯救及预防方法
（一）污染的类型细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和化学物质。1、细菌污染细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素，也可能因为操作不慎而引起污染。-常见的有革兰氏阳性菌，如枯草杆菌以及大肠杆菌、
单细胞培养的方法有哪些
1.转瓶培养这个比较老的工艺，在逐步淘汰，不过投资少，技术含量低，人员经少量培训就可以操作。2.悬浮培养非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。细胞悬浮于培养基中生长或维持。某些贴壁依赖性细胞经过适应和选择也可用此方法培养。增加悬浮培养规模相对比较简单，只要增加体积就可以子。深度超过5mm，需要搅动培养基，
平滑肌细胞培养方法3
2 结果2.1 体外培养的胎儿脐动脉血管平滑肌细胞的形态观察 实验中观察到脐动脉组织块贴壁后5~7d可见有细胞以垂直方向从组织块周围游走出来（见图1），但并不是所有的组织块周围都有细胞游出，离组织块较远的区域也可以看到细胞，此为平滑肌细胞的漂移性生长特性（见图2），细胞形态多样，大小不一，多为长梭形
干细胞培养器皿的清洗方法
干细胞离体条件下，有害物质可直接与细胞接触，细胞对任何有害甚至有益的物质十分敏感，极少量残留物就会对细胞产生毒性作用。因此，新的或重新使用的器皿都必须认真清洗，使其达到不含任何残留物的要求。因不同培养器皿的材料、结构、使用方法不同，清洗的方法也有区别．现分别介绍如下。1．玻璃器皿的清洗，玻璃器皿的清
细胞培养基的灭菌方法
培养基的灭菌方法主要有两种，高压除菌及过滤除菌。与过滤相比，高压灭菌的工作强度小，成本较低，但易造成营养成分的流失，而且在多次加样（无菌谷氨酰胺溶液，无菌碳酸氢钠溶液等）过程中容易造成二次污染。 大多数培养基采用0.1～0.2μm孔径的微孔滤膜进行过滤灭菌，并且已成为培养基除菌的发展方向，它可
平滑肌细胞培养方法4
动脉平滑肌细胞培养的几个问题组织块大小边缘密度翻面时间观察时间对原代细胞萌发的影响对于贴块法的原代培养来源，由于细胞并非直接获得，而是从组织块边缘长出，其中有一“突破过程”，且细胞萌发后尚需一定的细胞密度才能使其存活、增殖，故组织块大小、边缘、密度均影响细胞萌出与否及细胞存活、增殖。公认的方法是将
细胞生物基本方法：肿瘤细胞培养
肿瘤细胞培养特殊之处在于成纤维细胞的排除（成纤维细胞常与肿瘤细胞同时混杂生长，致难以纯化肿瘤组织）。有以下一些方法：1．机械刮除法2．反复帖壁法3．消化排除法4．胶原酶消化法 1） 机械刮除法1．标记：镜下观察，用不脱色笔在培养瓶皿的背面圈下生长肿瘤细胞的部位。2．刮除：弃掉培养液，把无菌胶刮伸入
STR细胞鉴定意义
导读：新买到的细胞，实验室传了几代的细胞，又或者储存于超低温冰箱几年不用的细胞，被污染了么？ 鉴定正确么？用它做研究会影响实验结果么？ 没有经过相应的细胞鉴定，使用了被污染的细胞，经过大量的实验，写出一篇论文，但是结论被推翻，论文被召回，大量的时间、物力和人力被浪费，一切都要从头再来。背景介绍应
STR基因分型应用于细胞鉴定的意义
新买到的细胞，实验室传了几代的细胞，又或者储存于超低温冰箱几年不用的细胞，被污染了么？ 鉴定正确么？用它做研究会影响实验结果么？ 没有经过相应的细胞鉴定，使用了被污染的细胞，经过大量的实验，写出一篇论文，但是结论被推翻，论文被召回，大量的时间、物力和人力被浪费，一切都要从头再来。 背景介绍应用于
STR细胞鉴定意义
导读： 新买到的细胞，实验室传了几代的细胞，又或者储存于超低温冰箱几年不用的细胞，被污染了么？ 鉴定正确么？用它做研究会影响实验结果么？ 没有经过相应的细胞鉴定，使用了被污染的细胞，经过大量的实验，写出一篇论文，但是结论被推翻，论文被召回，大量的时间、物力和人力被浪费，一切都要从头再来。
细胞培养中如何控制支原体的污染
在细胞培养工作中可采用以下几点来控制支原体的污染问题:(1)预防为主:细胞培养实验室应制定严格的管理制度,按照规范的实验程序操作。(2)从可靠来源引进、使用细胞,特别是知名的信誉,良好的专门机构,如ATCC、基础医学细胞中心等,这些机构对细胞质量进行一系列检测。(3)定期对实验室中的培养物进行支原体
细胞培养污染拯救及预防方法1
概论污染是细胞培养的大敌。预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。一开始就要十分重视，防止污染，否则会前功尽弃，不仅浪费时间，而且浪费人力、物力，甚至造成无法弥补的损失。（一）污染的类型细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物，而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质，包括生物和
减少造成细胞培养失败的处理方法
微生物污染是造成细胞培养失败的主要原因 （一）物理消毒法 1.紫外线消毒:紫外线是一种低能量的电磁辐射，可杀死多种微生物。革兰阴性菌最为敏感，其次是阳性菌，再次为芽孢，真菌孢子的抵抗力最强。紫外线的直接作用是通过破坏微生物的核酸及蛋白质等而使其灭活，间接作用是通过紫外线照射产生的臭氧杀死微生
支原体污染细胞培养的检测方法
由于支原体种类不同，应采取不同的方法进行检测，常用的方法有如下几种。1、观察细胞的形态和生长特征支原体污染比较严重时可出现生长减慢，有的培养基pH明显变酸，并出现细胞病变，其病变特征与病毒感染相似，因此不能准确诊断。2、分离培养法大多数支原体可出现特有的典型菌落。该方法准确、可靠，但时间长，敏感性不
人类干细胞培养又有新方法
人类多能干细胞（hPSCs）能够自我更新并转换成为体内其他任何类型的细胞，使其成为细胞移植疗法、药物开发、细胞分化和发育研究的一种很有前途的材料来源。然而，众所周知，干细胞是很难维持和培养。像所有的真核细胞一样，它们对养分的有效性、pH值、温度、氧气和二氧化碳的含量都很敏感，而且它们也易于分化，
动物细胞培养的概念和方法
动物细胞培养：从动物机体中取出相关的组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，生长，增殖。1、细胞或组织。2、常用方法物理：剪刀剪碎，化学法：胰蛋白酶，胶原蛋白酶3、制作细胞悬浮液，方法：加培养液。形成细胞悬浮液4、培养细胞株，原代培养，传代培养5、形成细胞系，传代培养，遗传物质的改变。
细胞培养细胞成长曲线制作方法
细胞成长曲线还有其他办法制作，除此以外还有相对计数的办法，该类办法首先要制作规范曲线，标定细胞数和某个变量的函数，然后我们只需要测定每天这个变量的值便能够核算出细胞数。常用的是 MTT、CCK8 等比色的办法。
细胞培养一般方法有哪些
细胞培养首先分为原代培养和传代培养.一、原代培养需要从组织中消化、分离、纯化出单细胞,然后继续进行传代、冻存；二、传代培养首先进行细胞复苏:1.应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-38度,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化.2.在无菌台内将完全培养基加入培养瓶内,然后用
细胞培养污染拯救及预防方法2
2、支原体污染的检测（1）相差显微镜观察直接取少许培养液滴在载物片上，再盖上盖片观察，支原体在镜下呈暗色微小颗粒，多位于细胞与细胞之间，有时可见类似于布朗运动的表现。应注意与细胞破碎溢出的内容物如线粒体等相区别。（2）荧光染色法观察用荧光染料Hoechst33258，此染料能与DNA特异地结合，可使
通道载玻片内细胞培养方法介绍
本应用简报说明了如何在细胞培养微通道内生长贴壁细胞。将描述细胞接种，培养基交换和光学性质。另外，显示了细胞培养通道和标准开放孔格式之间的主要差异。 为了显示细胞接种和μ-Slide处理，使用μ-Slide VI 0.4进行演示。像通常方法一样制备细胞悬液（例如3×105细胞/ ml）并将30μl加到
细胞培养传代培养的方法
1．悬浮生长细胞传代多采用离心法传代。1000转/分,20-30秒后去上清。沉淀细胞加新培养液后再混匀传代。亦有直接传代法，即悬浮细胞沉淀在瓶壁时，将上清培养液去除1/2-1/3，然后用吸管直接吹打形成细胞悬液再传代.2．半悬浮生长细胞传代（Hela细胞）此类细胞部分呈现贴壁生长现象，但贴壁不牢，可