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真菌的DNA和RNA提取方法

一、真菌DNA的提取(方法一)1.实验试剂(1)DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1%SDS(2)3M NaAc(3)TE:10 mmol/L Tris-HCl pH8.0,1 mmol/L EDTA(4)酚(pH8.0):氯仿:异戊醇(25:24:1)(5)氯仿:异戊醇(24:1)(6)异丙醇(7)无水乙醇(8)75%乙醇(9)RNaseA2.实验步骤(1)取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉(2)加入4mL提取液,快速振荡混匀(3)加入等体积的4mL的氯仿:异戊醇(24:1),涡旋3~5min(此处是粗提没有加酚,可以节约成本)(4)1000rpm,4℃,5min(5)上清用氯仿:异戊醇(24:1)再抽提一次(10,000rpm,4℃离心5min)(6)取上清,加入2/3倍体积的-20℃预冷异丙醇或2.5倍体积的无水乙醇沉淀, 混匀, 静置约30 min......阅读全文

分子杂交

一、杂交通过碱基对之间非共价键(主要是氢键)的形成即出现稳定的双链区,这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的

分子杂交技术(一)

一、概述  前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键(主要是氢键)的形成即出现稳定的双链区,这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交

分子杂交技术(一)

一、概述  前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键(主要是氢键)的形成即出现稳定的双链区,这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交

分子生物学常用实验技术(page 1)

第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定 第二章DNA 酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分

真菌DNA和RNA提取方法

真菌DNA和RNA提取方法一、真菌DNA的提取(方法一)实验试剂(1)DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1%SDS(2)3M NaAc(3)TE:10 mmol/L Tris-HCl pH8.0,1 mmol/L EDTA(4)酚(p

真菌的DNA和RNA提取方法

搞真菌基因功能研究的不可避免的总要涉及到DNA和RNA提取,由于真菌中有较多的多糖成分影响到所提DNA和RNA的质量和后续的分析。因此一个高质量的、实惠的提取方法是我们的优先选择,在此分享一下我一直在用的提取方法,供大家参考。真菌DNA的提取(方法一)1.取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉2

真菌的DNA和RNA提取方法

搞真菌基因功能研究的不可避免的总要涉及到DNA和RNA提取,由于真菌中有较多的多糖成分影响到所提DNA和RNA的质量和后续的分析。因此一个高质量的、实惠的提取方法是我们的优先选择,在此分享一下我一直在用的提取方法,供大家参考。真菌DNA的提取(方法一)1.取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉2

RNA提取与RT-PCR

 1.RNA的提取  RNA的提取其实原理很简单:通过变性剂破碎细胞或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA,再经过沉淀,洗涤,晾干,zui后溶解。但是由于RNA酶无处不在,随时可能将RNA降解,所以实验中有很多地方需要注意,稍有疏忽就会前功尽弃。  1.1分离高质量RNA  成功的cDNA合成来

RNA提取和RT-PCR

真核生物的基因组是DNA,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的,这些编码区叫做外元(exon)。真核生物的DNA转录成为RNA之后,经过剪切和拼接,去掉这些非编码区,才形成成熟

真菌的DNA和RNA提取方法

一、真菌DNA的提取(方法一)1.实验试剂(1)DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1%SDS(2)3M NaAc(3)TE:10 mmol/L Tris-HCl pH8.0,1 mmol/L EDTA(4)酚(pH8.0):氯仿:异戊

核酸分子杂交法介绍

这是最早用于性病诊断的重组DNA技术。基本原理是具有一定同源性的两条核酸单链在一定条件下(适宜的温度及离子强度等)可按碱基互补原则形成双链,此杂交过程是高度特异的。杂交的双方是待测核酸及探针。待测核酸序列为性病病原体基因组或质粒DNA。探针以放射核素或非放射性核素标记,以利于杂交信号的检测。  所谓

不同土壤类型采用何种研磨方案效果最佳

我们在产品研发过程中需要收集大量各种各样的样品,然后找出最佳的微生物DNA提取方法。所以当我们开发PowerLyer的操作流程的时候,希望能找到适合各种样品的一套方法。我们之前在研究均质研磨和研磨珠套管的时候就知道,根据土壤类型不同选择合适的研磨珠可以增加DNA的得率。所以我们决定使用PowerLy

土壤的分子生物学特性

在我们的实验室里,最难搞的样品类型之一就是土壤。在开发提取土壤中微生物DNA、RNA的试剂盒和构思提取方法的过程中,我们需要收集记录大量各种类型土壤的有机物含量、质地、pH以及采集地。这些因素与土壤微生物含量息息相关,同样地也影响着提取DNA、RNA的得率。下文,我将介绍一些影响土壤DNA、RNA提

DNA提取 I:土壤的分子生物学特性

在前面的文章(Soil molecular biology),围绕提取土壤样品DNA、RNA相关问题做了简单的引导介绍,比如PCR抑制因子、裂解注意事项等。今天将详细介绍土壤微生物DNA提取的细节,以及如何使用MO BIO PowerSoil® DNA Isolation Kit获得更好的提取效果。

2020年全球核酸提取仪市场情况及新品汇总

  分析测试百科网讯 2020年是不平凡的一年,新冠疫情的爆发导致全球活动受到阻碍。疫情不仅对人们的生活带来严重影响,同时也对分析检测行业带来了新的机遇。在全球新冠诊断标准中,核酸检测是公认的金标准,不仅检测速度快,准确率也能达到相关要求。  在核酸检测过程中,核酸提取作为其样品前处理过程,对最终分

PCR仪的用途及使用方法

 PCR的用途及使用方法真核生物的基因组是DNA,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的,这些编码区叫做外元(exon)。真核生物的DNA转录成为RNA之后,经过剪切和拼接,去掉

RNA提取和RT-PCR

在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA病毒基因时,会用到RNA提取和RT-PCR技术。真核生物的基因组是DNA,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋白的区段是

RNA提取与RT-PCR(1)

在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA病毒基因时,会用到RNA提取和RT-PCR技术。 真核生物的基因组是DNA,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋

PCR仪的用途及使用方法

PCR仪的用途及使用方法真核生物的基因组是DNA,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的,这些编码区叫做外元(exon)。真核生物的DNA转录成为RNA之后,经过剪切和拼接,去掉这些非编码

真菌感染的微生物学检查方法

 对真菌的诊断需要了解真菌寄生的部位,完整的病史,包括职业、业余爱好和旅游史。实验室检查一般采用直接镜检和真菌培养两种方法即可确诊。必要时再进行生化实验、血清学反应或动物接种等。  标本的采集 用无菌操作收集适宜部位的标本,可疑浅部真菌感染应取病变部位的毛发、指(趾)甲

隐球菌病分子生物学研究进展

一、核酸提取技术的改进进行分子生物学研究的前提是取得高数量和高质量的核酸,即DNA和RNA。由于隐球菌细胞壁外有一层厚厚的荚膜,为破除真菌细胞壁造成很大困难。可靠地提取隐球菌DNA的方法建立于20世纪80年代后期,研究者先后建立了玻璃珠方法、超声粉碎、液氮冷冻研磨等破壁技术。后来,发展酶学方法取代物

唾液DNA/RNA/外泌体等收集保存工具汇总

为什么有人吃东西总是那么“津津有味”,说话总能“津津乐道”?那是因为他们的唾液质量好,产生唾液的能力也好。您有仔细观察过自己舌头上的味蕾是什么样子吗?味蕾就像小触角在舌头上面飘着,如果没有唾液的滋润,舌头是干的,味蕾的功能就会退化,那么你吃什么东西都会是一个味儿:味同嚼蜡。我们吃东西觉得好吃,靠的是

分离植物总RNA

实验概要认识真核生物RNA的组成及分离的原理;学习RNA提取过程中抑制RNA酶活性的方法。实验原理真核生物的RNA包括rRNA、tRNA和mRNA。一个典型的真核细胞约含有10-5~10-6mg的RNA,其中80-85%为rRNA,其余15-20%主要由各种低分子量RNA组成(如tRNA、核内小分子

植物总RNA的分离

实验概要认识真核生物RNA的组成及分离的原理;学习RNA提取过程中抑制RNA酶活性的方法。实验原理真核生物的RNA包括rRNA、tRNA和mRNA。一个典型的真核细胞约含有10-5~10-6mg的RNA,其中80-85%为rRNA,其余15-20%主要由各种低分子量RNA组成(如tRNA、核内小分子

真菌RNA提取实验

真菌RNA的提取可以:(1)用于真菌RNA干扰机制研究;(2)用于cDNA文库构建等研究;(3)用于真菌分子生物学相应研究。实验方法原理液氮研磨可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成

样品前处理-细胞破碎

  细胞破碎技术是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁,使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术,由于细菌、酵母、真菌、植物都有细胞壁,但成分不同,且同类细胞结成的网状结构不同,因此其细胞壁的坚固程度不同,总体呈现递增态势。动物细胞虽没有细胞壁,但具有细胞膜,也需要一定的细胞破碎方法来破膜,达到提取产物的

植物RNA提取实验——直接研磨法

植物RNA提取可应用于:(1)进行植物分子生物学方面的研究;(2)进行Northern杂交分析、纯化mRNA以用于体外翻译或cNDA文库构建等研究。实验方法原理通过裂解液β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件

植物RNA提取实验

直接研磨法 液氮研磨法             实验方法原理 通过裂解液β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA

植物RNA提取实验

实验方法原理 独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,

研磨仪使用说明

高通量组织研磨仪产品描述:   Grinder系列高通量组织研磨仪是新一代特殊的、快速的、高效率的、多试管的研磨系统。它能将任何来源(包括土壤、植物和动物的组织/器官、细菌、酵母、真菌、孢子、古生物标本等)的原始DNA、RNA和蛋白质进行提取和纯化。与目前已有的其它样品制