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真菌菌丝的总RNA的提取的操作方法

试剂:RNA提取缓冲液(CTAB):2% CTAB(W/V),2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP(W/V),100 mM Tris-HCl(pH8.0,DEPC处理的水配置),25mM EDTA, 0.5g/L 亚精胺Spermidine,2.0M NaCl,2%巯基乙醇(V/V,使用前加入)。由于在高温灭菌条件下,Tris-HCl要和DEPC发生反应,所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC 处理的水配制即可。SSTE:1 M NaCl,0.5% SDS(W/V),10 mM Tris-HCl pH8.0,1.0 mM EDTA10M LiCl 直接用蒸馏水配10M LiCl,加1‰的DEPC过夜后,高温灭菌。3M NaAc氯仿:异戊醇(24:1)酚(pH4.5):氯仿:异戊醇(25:24:1)DEPC处理水 用1‰的DEPC处理蒸馏水过夜,高温灭菌无水乙醇70%酒精方法1. 实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离......阅读全文

真菌的DNA和RNA提取方法

搞真菌基因功能研究的不可避免的总要涉及到DNA和RNA提取,由于真菌中有较多的多糖成分影响到所提DNA和RNA的质量和后续的分析。因此一个高质量的、实惠的提取方法是我们的优先选择,在此分享一下我一直在用的提取方法,供大家参考。真菌DNA的提取(方法一)1.取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉2

真菌的DNA和RNA提取方法

搞真菌基因功能研究的不可避免的总要涉及到DNA和RNA提取,由于真菌中有较多的多糖成分影响到所提DNA和RNA的质量和后续的分析。因此一个高质量的、实惠的提取方法是我们的优先选择,在此分享一下我一直在用的提取方法,供大家参考。真菌DNA的提取(方法一)1.取真菌菌丝0.5g, 在液氮中迅速研磨成粉2

真菌DNA和RNA提取方法

真菌DNA和RNA提取方法一、真菌DNA的提取(方法一)实验试剂(1)DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1%SDS(2)3M NaAc(3)TE:10 mmol/L Tris-HCl pH8.0,1 mmol/L EDTA(4)酚(p

真菌的DNA和RNA提取方法

一、真菌DNA的提取(方法一)1.实验试剂(1)DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1%SDS(2)3M NaAc(3)TE:10 mmol/L Tris-HCl pH8.0,1 mmol/L EDTA(4)酚(pH8.0):氯仿:异戊

真菌的DNA和RNA提取方法

一、真菌DNA的提取(方法一)1.实验试剂(1)DNA提取液:0.2M Tris-HCl(pH 7.5),0.5M NaCl,0.01M EDTA,1%SDS(2)3M NaAc(3)TE:10 mmol/L Tris-HCl pH8.0,1 mmol/L EDTA(4)酚(pH8.0):氯仿:异戊

真菌RNA提取实验

真菌RNA的提取可以:(1)用于真菌RNA干扰机制研究;(2)用于cDNA文库构建等研究;(3)用于真菌分子生物学相应研究。实验方法原理液氮研磨可裂解细胞,促使核蛋白体的解离,使RNA与蛋白质分离,并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA进入水相,离心后可形成

真菌感染的微生物学检查方法

 对真菌的诊断需要了解真菌寄生的部位,完整的病史,包括职业、业余爱好和旅游史。实验室检查一般采用直接镜检和真菌培养两种方法即可确诊。必要时再进行生化实验、血清学反应或动物接种等。  标本的采集 用无菌操作收集适宜部位的标本,可疑浅部真菌感染应取病变部位的毛发、指(趾)甲

RNA提取和RT-PCR

真核生物的基因组是DNA,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的,这些编码区叫做外元(exon)。真核生物的DNA转录成为RNA之后,经过剪切和拼接,去掉这些非编码区,才形成成熟

分子生物学常用实验技术(page 1)

第一章质粒DNA 的分离、纯化和鉴定 第二章DNA 酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章RNA 的提取和cDNA 合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA 的提取 第七章RFLP 和RAPD 技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分

RNA提取与RT-PCR

 1.RNA的提取  RNA的提取其实原理很简单:通过变性剂破碎细胞或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提RNA,再经过沉淀,洗涤,晾干,zui后溶解。但是由于RNA酶无处不在,随时可能将RNA降解,所以实验中有很多地方需要注意,稍有疏忽就会前功尽弃。  1.1分离高质量RNA  成功的cDNA合成来

PCR仪的用途及使用方法

PCR仪的用途及使用方法真核生物的基因组是DNA,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的,这些编码区叫做外元(exon)。真核生物的DNA转录成为RNA之后,经过剪切和拼接,去掉这些非编码

PCR仪的用途及使用方法

 PCR的用途及使用方法真核生物的基因组是DNA,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋白的区段是被这些内元隔开的,这些编码区叫做外元(exon)。真核生物的DNA转录成为RNA之后,经过剪切和拼接,去掉

RNA提取和RT-PCR

在做Northern等杂交实验、构建cDNA文库、获取能够编码真核生物蛋白的基因、获得RNA病毒基因时,会用到RNA提取和RT-PCR技术。真核生物的基因组是DNA,为什么不直接从DNA PCR得到我们需要的基因呢?因为真核生物的基因含有大量的非编码区,称为内元(intron),真正编码蛋白的区段是

包涵体的纯化和复性总结

关于包涵体的纯化是一个令人头疼的问题,包涵体的复性已经成为生物制药的瓶颈,关于包涵体的处理一般包括这么几步:菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化,内容比较庞杂 一、菌体的裂解 1、怎样裂解细菌?  细胞的破碎方法  1.高速组织捣碎

蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验

实验步骤 一、化学法和酶法细胞裂解 微量的细胞裂解经常通过化学法或酶法或二者共同采用来完成。例如, 超声和弗式细胞压碎器 (Frenchpress 均质机) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培养液的情况,而且应用这些

蛋白质纯化所需的生物提取物制备的实验

实验步骤一、化学法和酶法细胞裂解微量的细胞裂解经常通过化学法或酶法或二者共同采用来完成。例如, 超声和弗式细胞压碎器 (Frenchpress 均质机) 都不便于用在收集小于或等于 5 mL 的培养液的情况,而且应用这些机械的方法经常会遇到过度的产热和样品被氧化等问题。微量细胞裂解的简化方面的重大进

国家药监局印发食品安全检验机构技术装备等基本标准

关于印发餐饮服务食品安全检验机构技术装备基本标准和现场快速检测设备配备基本标准的通知 国食药监食[2011]130号 各省、自治区、直辖市及新疆生产建设兵团食品药品监督管理局:   为贯彻落实《食品安全法》、《食品安全法实施条例》以及《餐饮服务食品安全监督管理办法》,逐步建立

霉菌毒素最全百科,你涨知识了吗?

霉菌毒素(mycotoxin)一词源自希腊语的“mykes”,指霉菌和“toxicum”,指毒物。霉菌毒素(Mycotoxins)是由霉菌自然产生的。人们目前所知道的霉菌毒素就有上百种,但还有更多的霉菌毒素不被我们所了解。霉菌产生霉菌毒素是自身的一种防御机制和/或有助于在宿主体内定植。霉菌通过这一天

PCR技术(十三):PCR用于进化分析

进化遗传学具有两个并列的研究方向:系统发育的重建和种群分析。自1962年, Zuckerkandl和Pauling提出蛋白质序列和基因序列的比较可以象分子种一样用于标志 现存物种分化的时间以来,各种生化方法被用于系统发育的研究。在最初二十年内, 同功酶的电泳分析、免疫学比较和蛋白质序列分析被广泛地应

不同土壤类型采用何种研磨方案效果最佳

我们在产品研发过程中需要收集大量各种各样的样品,然后找出最佳的微生物DNA提取方法。所以当我们开发PowerLyer的操作流程的时候,希望能找到适合各种样品的一套方法。我们之前在研究均质研磨和研磨珠套管的时候就知道,根据土壤类型不同选择合适的研磨珠可以增加DNA的得率。所以我们决定使用PowerLy

植物组织培养技术知识汇总(二)

三、生根 生根是获得完整植株的一个关键。通过侧芽和不定芽途径产生的芽长成嫩枝后(此时的嫩枝叫试管苗),必须诱导生根才能移植。促使试管苗生根的方法通常有两种。一种是在固体培养基上诱导生根。当试管苗长到2~3厘米高时,将它从基部切下,转移到只含0.2~0.5毫克/升的萘乙酸或吲哚丁酸的固体培养基

样品制备仪FastPrep-24™ 5G的介绍

众所周知,在DNA、RNA和蛋白质的提取过程中,生物样本的破碎和匀浆是关键的第一步。谁不想来个开门红?当然,这并非易事。利用传统的液氮研磨,不光费时费力,效果还不是太稳定。尤其在处理多个样本时,面对那一堆研钵,手忙脚乱不说,交叉污染也是个不得不重视的问题。世界那么大,你应该去看看。如今,机械的样品裂

3分钟了解:PCR检测怎么做以及注意事项

PCR反应的准备PCR反应体系10×扩增缓冲液10μl4种dNTP混合物(终浓度)各100~250μmol/L引物(终浓度)各5~20μmol/L模板DNA0.1~2μgTaq DNA聚合酶5~10 UMg2+(终浓度)1~3mmol/L补加双蒸水100 μl其中dNTP、引物、模板DNA、Taq

真菌总 RNA 的制备

真菌总 RNA 的制备             试剂、试剂盒 酚 氯仿

对一些DNA提取方法的总结

有时候提DNA不是很顺,所以提出来大家讨论一下,因为我是做微生物的,我首先提供一下关于微生物的DNA 提取方法,大家觉的有可以改进的地方,欢迎讨论!!细菌DNA的提取:(一)试剂:1. 抽提缓冲液2% CTAB (W/V)2% PVP K25 (w/v) (去色素)100mM Tris-HCl (p

植物RNA提取实验——直接研磨法

植物RNA提取可应用于:(1)进行植物分子生物学方面的研究;(2)进行Northern杂交分析、纯化mRNA以用于体外翻译或cNDA文库构建等研究。实验方法原理通过裂解液β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件

分子杂交

一、杂交通过碱基对之间非共价键(主要是氢键)的形成即出现稳定的双链区,这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的

分子杂交技术(一)

一、概述  前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键(主要是氢键)的形成即出现稳定的双链区,这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交

分子杂交技术(一)

一、概述  前面已经介绍了核酸分子单链之间有互补的碱基顺序,通过碱基对之间非共价键(主要是氢键)的形成即出现稳定的双链区,这是核酸分子杂交的基础。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补,所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序(即某种程度的同源性)就可以形成杂交双链。分子杂交

植物RNA提取实验

直接研磨法 液氮研磨法             实验方法原理 通过裂解液β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA