噬菌体DNA在滤膜上的杂交实验
实验方法原理 通过用 32P 标记探针的原位杂交,可筛选携带有固定化 DNA 的滤膜,这些 DNA 来源于噬菌斑。该技术是强有力的、高度特异的和很灵敏的,能从数千个噬菌斑中鉴别出单一的重组子。 实验材料 噬菌体 DNA 放射性标记探针 试剂、试剂盒 氯仿 预杂交液 SM SSPE 仪器、耗材 煮沸的水浴 玻璃(Pyrex ) 烘烤平皿或其他杂交器......阅读全文
噬菌体DNA在滤膜上的杂交实验
实验方法原理 通过用 32P 标记探针的原位杂交,可筛选携带有固定化 DNA 的滤膜,这些 DNA 来源于噬菌斑。该技术是强有力的、高度特异的和很灵敏的,能从数千个噬菌斑中鉴别出单一的重组子。
噬菌体DNA在滤膜上的杂交实验
通过用 32P 标记探针的原位杂交,可筛选携带有固定化 DNA 的滤膜,这些 DNA 来源于噬菌斑。该技术是强有力的、高度特异的和很灵敏的,能从数千个噬菌斑中鉴别出单一的重组子。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理通过用 32P 标记探针的原位杂交,可筛选携带有固定化 DNA
噬菌体DNA在滤膜上的杂交实验
实验方法原理 通过用 32P 标记探针的原位杂交,可筛选携带有固定化 DNA 的滤膜,这些 DNA 来源于噬菌斑。该技术是强有力的、高度特异的和很灵敏的,能从数千个噬菌斑中鉴别出单一的重组子。实验材料 噬菌体 DNA放射性标记探针试剂、试剂盒 氯仿预杂交液SMSSPE仪器、耗材 煮沸的水浴玻璃(Py
噬菌体DNA从噬菌斑到滤膜的转移实验
实验方法原理 一个从 λ 噬菌体文库中鉴别和分离特异重组子的方法,在分子克隆历史的早期由 Bemon 和 Davis (1977) 建立起来。这个目前仍经常使用的方法,包括通过用 32P 标记的探针进行原位杂交以大量筛选噬菌斑。
噬菌体DNA从噬菌斑到滤膜的转移实验
一个从 λ 噬菌体文库中鉴别和分离特异重组子的方法,在分子克隆历史的早期由 Bemon 和 Davis (1977) 建立起来。这个目前仍经常使用的方法,包括通过用 32P 标记的探针进行原位杂交以大量筛选噬菌斑。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理一个从 λ 噬菌体文库中鉴
噬菌体DNA从噬菌斑到滤膜的转移实验
实验方法原理 一个从 λ 噬菌体文库中鉴别和分离特异重组子的方法,在分子克隆历史的早期由 Bemon 和 Davis (1977) 建立起来。这个目前仍经常使用的方法,包括通过用 32P 标记的探针进行原位杂交以大量筛选噬菌斑。实验材料 λ 噬菌体文库大肠杆菌铺平板细菌试剂、试剂盒 变性液中和液SM
λ噬菌体DNA提取
λ噬菌体是最早使用的克隆载体,λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子,它在宿主细胞有两种生活途径,其一是裂解生长,环状DNA分子在细胞内多次复制,合成大量噬菌体基因产物,装配成噬菌体颗粒,裂解宿主菌再进行下一次感染;其二是溶源性生长,即感染细胞内λ噬菌体DNA整合到宿主菌染色体D
λ噬菌体DNA的制备
实验概要本实验介绍了λ噬菌体DNA的制备、操作步骤和注意事项。实验原理λ噬菌体是最早使用的克隆载体,λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子,它在宿主细胞有两种生活途径:其一是裂解生长,环状DNA 分子在细胞内多次复制,合成大量噬菌体基因产物,装配成噬菌体颗粒,裂解宿主菌再进行下一次
Lambda(噬菌体)DNA-Miniprep
David HarryInstitute of Forest GeneticsUSDA Forest ServicePacific Southwest Research StationAugust 26, 1993Background :There are many published method
λ噬菌体DNA提取方法
成功走出第一步:DNA提取 λ噬菌体是最早使用的克隆载体 ,λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子,它在宿主细胞有两种生活途径,其一是裂解生长,环状DNA分子在细胞内多次复制,合成大量噬菌体基因产物,装配成噬菌体颗粒,裂解宿主菌再进行下一次感染;其二是溶源性生长,即感染细胞
什么是DNA噬菌体?
中文名称DNA噬菌体英文名称DNA phage定 义能感染细菌并在细菌内复制自身的DNA病毒。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇DNA噬菌体
中文名称:DNA噬菌体英文名称:DNA phage定 义:能感染细菌并在细菌内复制自身的DNA病毒。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
在滤膜上进行细菌DNA的杂交实验
实验方法原理 本方案介绍如何用放射性标记探针与固定在滤膜上的转化菌 DNA 进行杂交,以及从琼脂板中将与探针特异性杂交的克隆回收培养的方法,这些方法适用于平均长度大于 100 核苷酸的探针。实验材料 带有固定转化克隆 DNA 的滤膜寡核苷酸探针试剂、试剂盒 甲醛预杂交 杂交液BLOTTO预洗液洗脱液
在滤膜上进行细菌DNA的杂交实验
本方案介绍如何用放射性标记探针与固定在滤膜上的转化菌 DNA 进行杂交,以及从琼脂板中将与探针特异性杂交的克隆回收培养的方法,这些方法适用于平均长度大于 100 核苷酸的探针。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理本方案介绍如何用放射性标记探针与固定在滤膜上的转化菌 DNA 进
在滤膜上进行细菌DNA的杂交实验
实验方法原理 本方案介绍如何用放射性标记探针与固定在滤膜上的转化菌 DNA 进行杂交,以及从琼脂板中将与探针特异性杂交的克隆回收培养的方法,这些方法适用于平均长度大于 100 核苷酸的探针。
菌落的裂解和DNA与滤膜的结合实验
本方案介绍如何从携带重组质粒的克隆中释放出 DNA 并将其固定于硝酸纤维滤膜或尼龙膜的方法,这一方法最初由 Grunstein 和 Hogness 使用。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理本方案介绍如何从携带重组质粒的克隆中释放出 DNA 并将其固定于硝酸纤维滤膜或尼龙膜的
菌落的裂解和DNA与滤膜的结合实验
实验方法原理 本方案介绍如何从携带重组质粒的克隆中释放出 DNA 并将其固定于硝酸纤维滤膜或尼龙膜的方法,这一方法最初由 Grunstein 和 Hogness 使用。 实验材料
菌落的裂解和DNA与滤膜的结合实验
实验方法原理 本方案介绍如何从携带重组质粒的克隆中释放出 DNA 并将其固定于硝酸纤维滤膜或尼龙膜的方法,这一方法最初由 Grunstein 和 Hogness 使用。实验材料 带有 E.coli 转化子克隆的滤膜试剂、试剂盒 变性液中和液SDS (10% m V)2X SSPE仪器、耗材 玻璃或塑
利用λ噬菌体文库筛选-DNA-结合蛋白实验
可利用合成双链寡核苷酸筛选构建于λ噬菌体的 cDNA 表达文库,以鉴定与特异 DNA 结合蛋白质相对应的克隆(Singhetal.1988,Vinsonetal.1988)。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒ATP结合缓冲液变性溶
利用λ噬菌体文库筛选-DNA-结合蛋白实验
试剂、试剂盒 ATP 结合缓冲液 变性溶液 二硫苏糖醇 EDTA 乙醇激酶 连接酶缓冲液 酚 氯
利用λ噬菌体文库筛选-DNA-结合蛋白实验
试剂、试剂盒 ATP结合缓冲液变性溶液二硫苏糖醇EDTA乙醇激酶 连接酶缓冲液酚氯仿筛选缓冲液SDS醋酸钠TET4 噬菌体 DNA 连接酶T4 噬菌体多核苷酸激酶合成的寡核苷酸[a-32P]ATP非变性聚丙烯酰胺凝胶仪器、耗材 烤盘结晶皿平头镊子装有防水黑墨水注射器硝酸纤维素滤膜Sephadex G
借助于噬菌体ELISA的DNA/RNA...
实验概要本实验从含有源自文库筛选的噬菌体克隆制备了噬菌体上清液,通过噬菌体ELISA,评估筛选出DNA/RNA结合区域的特异性序列的结合活性。实验步骤1. 噬菌体的制备 1) 挑取含有源自文库筛选的噬菌体克隆的单菌落。用灭菌牙签挑取单菌落接种于灭菌圆底培养板的微孔内,其中加有150ul含15
M13噬菌体单链DNA的制备
实验方法原理 M13 噬菌体单链 DNA 是从感染细胞分泌至周围培养液中的病毒颗粒中制备的,首先在高盐存在下,丝状病毒被聚乙二醇(PEG) 沉淀浓缩,然后用酚抽提释放单链 DNA,最后乙醇沉淀收集单链 DNA。实验材料 M13 单链噬菌体载体感染 M13 噬菌体的大肠杆菌培养物未感染的大肠杆菌的培养
M13噬菌体单链DNA的制备
实验方法原理 M13 噬菌体单链 DNA 是从感染细胞分泌至周围培养液中的病毒颗粒中制备的,首先在高盐存在下,丝状病毒被聚乙二醇(PEG) 沉淀浓缩,然后用酚抽提释放单链 DNA,最后乙醇沉淀收集单链 DNA。
M13噬菌体单链DNA的制备
M13 噬菌体单链 DNA 是从感染细胞分泌至周围培养液中的病毒颗粒中制备的,首先在高盐存在下,丝状病毒被聚乙二醇(PEG) 沉淀浓缩,然后用酚抽提释放单链 DNA,最后乙醇沉淀收集单链 DNA。本实验来源「分子克隆实验指南第三版」黄培堂等译。实验方法原理M13 噬菌体单链 DNA 是从感染细胞分泌
制备DNA测序模板实验——制备单链M13噬菌体DNA
本实验包含了用于制备适用于双脱氧测序的模板及适用于末端标记和化学测序的DNA的实验方案。所有用于双脱氧测序的双链模板在与引物退火前必须变性,在一般应用上,碱变性在测序中的效果比热变性好。实验材料大肠杆菌试剂、试剂盒LBTEM13聚乙二醇容易让顶层琼脂乙酸钠乙醇仪器、耗材巴斯德吸管试管离心机实验步骤1
制备DNA测序模板实验——小量裂解物中制备λ噬菌体DNA
实验材料重组λ噬菌体试剂、试剂盒DNA酶ⅠRNA酶ⅠPEGSMSDSEDTA异丙醇乙酸钠TE仪器、耗材巴斯德吸管试管离心机实验步骤1. 在新鲜配制的λ顶层琼脂糖和λ琼脂糖平板上,通过在平板上裂解适于λ噬菌体生长的大肠杆菌菌株,制备重组λ噬菌体毒种原液。2. 取700 μl 毒种液加入无菌的1.5
用原位筛选法分离编码序列特异性DNA结合蛋白的cDNA
放射性标记DNA探针的制备l 聚丙烯酰胺凝胶的制备1.按照(三)中操作流程灌制非变性聚丙烯酰胺凝胶。将10×TBE稀释成0.5×的工作浓度。聚丙烯酰胺的工作浓度取决于待测DNA片段的大小,200bp左右的片段需要4~5%的凝胶,小于100bp的片段应灌制6~8%的凝胶。 l DN
用T4噬菌体DNA聚合酶标记双链DNA的3端
实验材料 限制性内切核酸酶 T4 噬菌体 DNA 聚合酶 模板 DNA 试剂、试剂盒 醋酸氨
用T4噬菌体DNA聚合酶标记双链DNA的3端
实验材料限制性内切核酸酶T4 噬菌体 DNA 聚合酶模板 DNA试剂、试剂盒醋酸氨乙醇酚氯仿T4 噬菌体 DNA 聚合酶缓冲液dNTP 溶液仪器、耗材Sephadex G-50 离心柱水浴实验步骤一、材料1. 缓冲液和溶液醋酸氨(10 mol/L)乙醇酚:氯仿(1:1,V/V)2. 酶和缓冲液适当的