胶体金标记实验步骤
1、蛋白质的处理：胶体金标记蛋白的制备胶体金对蛋白的吸附主要取决于pH值，在接近蛋白质的等电点或偏碱的条件下，二者容易形成牢固的结合物。如果胶体金的pH值低于蛋白质的等电点时，则会聚集而失去结合能力。除此以外胶体金颗粒的大小、离子强度、蛋白质的分子量等都影响胶体金与蛋白质的结合。（1）待标记蛋白溶液的制备 将待标记蛋白预先对0.005Mol/L pH7.0 NaCl溶液中4℃透析过夜，以除去多余的盐离子，然后100 000g4℃离心1h，去除聚合物。（2）待标胶体金溶液的准备 以0.1Mol/L K2CO3或0.1Mol/L HCl调胶体金液的pH值。标记IgG时，调至9.0；标记McAb时，调至8.2；标记亲和层析抗体时，调至7.6；标记SPA时，调至5.9～6.2；标记ConA时，调至8.0；标记亲和素时，调至9～10.由于胶体金溶液可能损坏pH计的电板，因此，在调节pH时，采用精密pH试纸测定为宜。由于盐类成分能影响金溶胶......阅读全文
实验动物标记实验
实验材料 兔子 小鼠试剂、试剂盒 3%～5%苦味酸 0.5%中性品红 2%硝酸银实验步骤 1. 染色法 适用于小动物，如兔子、大鼠、小鼠等。此方法是将化学药品涂在动物的被毛上，以不同颜色来区分动物。常用的化学药品有：3%～5%苦味酸溶液（黄色）、0.5%中性品红（红色）、2%硝酸银（咖啡色）
实验动物标记实验
实验材料兔子 小鼠试剂、试剂盒3%～5%苦味酸 0.5%中性品红 2%硝酸银实验步骤1. 染色法 适用于小动物，如兔子、大鼠、小鼠等。此方法是将化学药品涂在动物的被毛上，以不同颜色来区分动物。常用的化学药品有：3%～5%苦味酸溶液（黄色）、0.5%中性品红（红色）、2%硝酸银（咖啡色）。标记的原则是
荧光素标记抗体的操作步骤
FITC荧光素标记抗体的操作步骤 www.runwelltac.com当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键（thiocarbmide）结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖
分子标记——AFLP原理和操作步骤
一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增,然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳,多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接,连接后的粘末端顺
分子标记—AFLP原理和操作步骤
AFLP可用于：（1）构建遗传连锁图谱；（2）利用AFLP快速鉴别与目的基因紧密连锁的分子标记；（3）AFLP辅助的轮回选择育种；（4）研究基因表达与调控；（5）分类和进化研究；（6）甲基化研究等。实验方法原理AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行
切口平移法标记探针的步骤
(1)模板 DNA 的制备用限制性内切酶将载体上的外源 DNA 酶切并进行琼脂糖凝胶电泳回收纯化,琼脂糖残留可抑制切口平移反应,因此彻底清除琼脂糖至关重要。也可以用带有外源 DNA 克隆片段的重组载体为模板来切口平移制备探针。(2)切口平移标记将模板 DNA 水溶液、DNase Ⅰ、未标记的三磷酸单
非标记抗体免疫电镜操作步骤
1．经典法（1）将被检病毒材料0.9ml，加1︰5～1︰10稀释的特异性免疫血清0.1ml充分混合。（2）置37℃作用1h或37℃1h后再置4℃过夜。（3）以17 000r/min～23 000r/min离心90min。（4）吸去上清，将离心管口倒置于滤纸上，吸去残留液体。（5）沉淀物中加少量H2
分子标记——AFLP原理和操作步骤
一、原理AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘末端顺
分子标记—AFLP原理和操作步骤
实验方法原理 AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘末端顺序和接头顺序就作为以后
简述酶标记抗体的方法步骤
1、HRP标记抗体的方法 酶与抗体交联的方法有许多种,根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠法。尤以简易过碘酸钠法更为常用。 戊二醛二步法 原理 戊二醛为一种双功能试剂，通过其醛基分别与酶和免疫球蛋白上的氨基共价结合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白
胶体金标记蛋白A技术（Protein－Agold－technique,－PAg法）1
PAg复合物制备方法简便，作为第二抗体，无种属特异性，可以免去不同种属动物要制备不同的特异性免疫球蛋白。PAg 复合物与包埋剂和细胞成分都极少发生非特异性的交互作用，蛋白A和金粒间非共价的结合特性既不影响蛋白A的活性，又能保持高度的稳定性，PAg复合物分子最小易于穿透组织。PAg复合物的原液在4
胶体金标记技术在免疫学中的应用
胶体金标记技术由于标记物的制备简便，方法敏感、特异，不需要使用放射性同位素，或有潜在致癌物质的酶显色底物，也不要荧光显微镜，它的应用范围广，除应用于光镜或电镜的免疫组化法外，更广泛地应用于各种液相免疫测定和固相免疫分析以及流式细胞术等。1．液相免疫测定：将胶体金与抗体结合，建立微量凝集试验检测相应的
胶体金标记的全定量免疫层析技术的原理
从定性、半定量向全定量是即时检验（POCT）技术发展的一个趋势。全定量的POCT检测技术有多种原理。本文主要介绍胶体金标记的全定量免疫层析技术的原理。一、胶体金标记的全定量免疫层析POCT试剂装置结构示意图及作用 1、 吸收垫：吸收多余液体。2、 PVC底板：提供试剂封装外壳。3、
胶体金标记蛋白A技术（Protein－Agold－technique,－PAg法）2
(2)0、5mol／L，pH7.4 Tris-Hcl缓冲液：Tris，60.57g，1mol／L Hcl约420m1，调pH值至7.4，最后加双蒸水至1000m1，此为储备液。(3)0、05mo1／L Tris缓冲生理盐水：氯化钠8.5-9g；0.5mo1／L，pH7.4 Tris-Hcl缓冲液10
ULS标记实验
基本方案 实验方法原理 Universal Linkage System(ULS®;KREATECH Biotechnology BV
ULS标记实验
实验方法原理Universal Linkage System(ULS®;KREATECH Biotechnology BV）是用铂染色络合物与鸟嘌呤核苷的N7残基反应进行标记的方法。反应使核酸与铂荧光基团之间形成稳定的化学键。依据反应条件，ULS化合物在较低的程度上也与腺嘌呤形成络合物。该方法已用于
ULS标记实验
实验方法原理 Universal Linkage System(ULS®;KREATECH Biotechnology BV）是用铂染色络合物与鸟嘌呤核苷的N7残基反应进行标记的方法。反应使核酸与铂荧光基团之间形成稳定的化学键。依据反应条件，ULS化合物在较低的程度上也与腺嘌呤形成络合物。该
胶体金分散颗粒制备实验
实验步骤1. 取 0.01％ AuCl3 • HCl 水溶液 100 ml，加热至沸腾。2. 加入 4 μl 195Au。 3. 迅速加入 4 ml 1％ 柠檬酸三钠水溶液，搅拌 5～7 min，至出现透明的橙红色。4. 其含量为脉冲数 1×106/min。胶体金可用多种方法制备，其中应用较为广泛的
胶体金试验的实验目的
中文名称胶体金试验英文名称colloid gold test定 义一种免疫组织化学检测技术。即以胶体金标记特异性抗体,用于检测组织切片或细胞标本中的相应抗原。应用学科免疫学（一级学科），应用免疫（二级学科），免疫学检测和诊断（三级学科）
胶体金分散颗粒制备实验
实验方法原理 白磷还原法的建立已有近百年的历史，由于此法操作较为简便，制备出来的胶体金颗粒大小较一致，因而应用较为广泛，现以 Faulk 和 Taylor（1971）的报道为基础介绍这一方法。试剂、试剂盒 氯化金K2CO3双蒸水实验步骤 1. 取 1％ 氯化金 1.5 ml、0.1mol/L K2C
非标记抗体免疫电镜的操作步骤
1．经典法 （1）将被检病毒材料0.9ml，加1︰5～1︰10稀释的特异性免疫 血清0.1ml充分混合。（2）置37℃作用1h或37℃1h后再置4℃过夜。（3）以17 000r/min～23 000r/min离心90min。（4）吸去上清，将离心管口倒置于滤纸上，吸去残留液体。（5）沉淀物中加少量H
分子标记方法：AFLP原理和操作步骤
AFLP原理：AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘
FITC荧光素标记抗体的操作步骤
当FITC在碱性溶液中与抗体蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的r氨基与荧光素的硫碳胺键（thiocarbmide）结合，形成FITC-蛋白质结合物，即荧光抗体或荧光结合物。一个IgG分子中有86个赖氨酸残基，一般zui多能结合15～20个，一个IgG分子可结合2～8个分子的FITC，其反应式如下：F
干细胞的鉴定实验——免－疫－电－镜－胶－体－金－标－记－技－术
实验步骤免 疫 电 镜 胶 体 金 标 记 技 术免疫电镜技术是利用抗原抗体特异性结合的原理，在细胞超微结构水平上定位、定性和定量，原位显示抗原大分子的技术。 1971 年 Faulk 等将胶体金标记抗体技术应用到电镜中，开始了免疫电镜胶体金标记技术。该技术的优点是：胶体金颗粒致密，易于辨认 ；定位
AFLP分子标记实验
其基本原理是：以PCR(聚合酶链式反应)为基础，结合了RFLP、RAPD的分子标记技术。把DNA进行限制性内切酶酶切，然后选择特定的片段进行PCR扩增(在所有的限制性片段两端加上带有特定序列的“接头”，用与接头互补的但3-端有几个随机选择的核苷酸的引物进行特异PCR扩增，只有那些与3-端严格配对的片
实验动物编号标记方法
动物在实验前常常需要作适当的分组，那么就要将其标记使各组加以区别。标记的方法很多，良好的标记方法应满足标号清晰、耐久、简便、适用的要求。 常用的标记法有染色、耳缘剪孔、烙印、号牌等方法。 （一）颜料涂染 这种标记方法在实验室最常使用，也很方便。使用的颜料一般有3-5%苦味酸溶
标记裂解培养细胞实验
基本方案 温和去垢剂裂解法（对贴壁细胞）基本方案 温和去垢剂裂解法（对非贴壁细胞）SDS煮沸法裂解细胞实验方法原理实验材料待标记的培养细胞 试剂、试剂盒37℃标记培养液
活细胞的标记步骤以及注意事项
活细胞的标记步骤以及注意事项是什么耐心看完下文你就会有了答案。用蒸馏水配制贮存液，4摄氏度避光保存。标记时用蒸馏水稀释100倍。2.吸去细胞培养基。3.用PBS(+)冲洗细胞3次。4.将细胞于Hoechst标记液中室温下孵育10一30分钟。S.吸去标记液，并用PBS(+)冲洗3次，然后固定盖玻片:注
金垫中胶体金标记的抗体释放不够，这是什么原因
可能是因为你的胶体金的颗粒大小的选择和最佳抗体标记量的选择上出了问题，这是多方面的因素导致的，你得先固定一个影响因子来调另一个因子，这样反复实验看看效果。
胶体金分散颗粒制备实验——柠檬酸钠还原法
实验方法原理柠檬酸钠还原法（Frens，1973）制备过程十分简单，制备出的金颗粒均匀一致，因此广为采用。大量研究已表明该法制备胶体金时，颗粒的大小是柠檬酸钠用量的函数，即在一定的范围内任意给定一个柠檬酸钠的量，总有一定大小的胶体金颗粒与它相对应，因而这种方法可很好地满足电镜双重标记和多重标记的要求