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质谱鉴定,常见疑问解答

问题1、一级质谱和二级质谱有什么区别?什么时候做一级,什么时候做二级?答:一级质谱鉴定的方式主要为胎指纹图谱(PMF),即利用质谱仪精确测量酶解片段的分子量并搜库比较实现蛋白质的鉴定;二级质谱是在一级质谱的基础上再选择部分肽段做进一步的破碎并对碎片进行深入分析和比较,鉴定出该肽段的序列并结合PMF的结果从而实现蛋白质的鉴定。二级质谱能够得到部分肽段的序列,具有更高的可靠性。随着现在对数据的要求越来越严格,二级质谱鉴定是蛋白鉴定的大趋势,而且即使目前做一级质谱鉴定的结果,也需要挑选部分PMF结果做二级质谱验证。 问题2、研究的物种不是模式生物怎么办?答:可以参考亲缘关系最近的模式生物做比对从而实现蛋白质的成功鉴定,如果质谱图很好而没有鉴定结果说明这是一个全新的蛋白,可以采用de-novo等技术做深入分析与鉴定。 问题3、该如何评价质谱效果的好坏?答:做PMF一般得分超过60分(P<0.05)就算成功鉴定,......阅读全文

二十年磨一剑 打开DNA研究新天地 邓子新院士访谈

中国科学院院士、上海交通大学教授邓子新说:“我们有一百个一千个理由可以放弃:拿不到研究基金、不被人认可……但我们从来没有放弃过,一直做下来了。”   2007年8月,邓子新应邀出席在英国纽卡斯尔召开的第十四届国际放线菌生物学大会,并作了DNA大分子上一种新的硫修饰的研究报告。&nb

Western Blot详解

  Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。   本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:   一、原理   二、分类