软琼脂克隆形成实验
实验方法原理 软琼脂克隆形成实验主要用于非贴壁生长的细胞，某些细胞(如正常成纤维细胞)在悬浮状态下不能增殖，不适用此法。某些恶性肿瘤细胞，不仅在贴壁状态下能增殖，在悬浮状态下也能增殖，其在软琼脂中形成克隆的能力反映了其恶性程度。 实验材料 细胞样品 试剂、试剂盒 胰蛋白酶 胎牛血清 GIMSA染液 PBS 纯甲醇 仪器、耗材 培养皿 培养箱 ......阅读全文
琼脂中克隆培养
实验方法原理 温度高时琼脂呈液态，但在37℃ 时成凝胶状态，细胞悬浮在温暖的琼脂凝胶培养基中，待琼脂形成凝胶后进行培养，形成散在集落，很容易分离。实验材料 Noble琼脂Difco胎牛血清仪器、耗材 两倍浓度培养基生长培养基无菌超纯水无菌锥形瓶吸管通用容器培养皿水浴三角瓶托盘电子细胞计数仪本生煤气喷
琼脂中克隆培养
实验方法原理 温度高时琼脂呈液态，但在37℃ 时成凝胶状态，细胞悬浮在温暖的琼脂凝胶培养基中，待琼脂形成凝胶后进行培养，形成散在集落，很容易分离。 实验材料
琼脂中克隆培养
实验方法原理温度高时琼脂呈液态，但在37℃ 时成凝胶状态，细胞悬浮在温暖的琼脂凝胶培养基中，待琼脂形成凝胶后进行培养，形成散在集落，很容易分离。实验材料Noble琼脂 D
琼脂中克隆培养
实验方法原理温度高时琼脂呈液态，但在37℃ 时成凝胶状态，细胞悬浮在温暖的琼脂凝胶培养基中，待琼脂形成凝胶后进行培养，形成散在集落，很容易分离。实验材料Noble琼脂Difco胎牛血清仪器、耗材两倍浓度培养基生长培养基无菌超纯水无菌锥形瓶吸管通用容器培养皿水浴三角瓶托盘电子细胞计数仪本生煤气喷灯实验
软琼脂克隆形成实验
原理：细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形
软琼脂克隆形成实验
原理：细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形
软琼脂克隆形成实验
原理：细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形
软琼脂克隆形成实验
实验方法原理 软琼脂克隆形成实验主要用于非贴壁生长的细胞，某些细胞(如正常成纤维细胞)在悬浮状态下不能增殖，不适用此法。某些恶性肿瘤细胞，不仅在贴壁状态下能增殖，在悬浮状态下也能增殖，其在软琼脂中形成克隆的能力反映了其恶性程度。
软琼脂克隆形成实验
实验方法原理 软琼脂克隆形成实验主要用于非贴壁生长的细胞，某些细胞(如正常成纤维细胞)在悬浮状态下不能增殖，不适用此法。某些恶性肿瘤细胞，不仅在贴壁状态下能增殖，在悬浮状态下也能增殖，其在软琼脂中形成克隆的能力反映了其恶性程度。
软琼脂克隆形成实验
软琼脂克隆形成实验可用于：（1）细胞分化的基础研究；（2）临床肿瘤治疗的疗效检验等方面。实验方法原理软琼脂克隆形成实验主要用于非贴壁生长的细胞，某些细胞(如正常成纤维细胞)在悬浮状态下不能增殖，不适用此法。某些恶性肿瘤细胞，不仅在贴壁状态下能增殖，在悬浮状态下也能增殖，其在软琼脂中形成克隆的能力反映
软琼脂克隆化的方法
软琼脂克隆化借助撒在软琼脂上单个细胞定位生长，而达到克隆化，具体操作如下：1．配2.5%的琼脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。2．将117ml完全DMEM液和3ml10倍浓度的DMEM液混合，置45℃水浴预热。3．将琼脂糖与DMEM液混合，即为含0.5%琼脂糖的完全DMEM液，并加75×1
单克隆抗体技术：克隆化(有限稀释法、软琼脂克隆化、...
经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。 克隆化的阳性杂交瘤细胞，经
软琼脂克隆形成实验的基本步骤
原理：细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形
单克隆抗体的克隆化方法软琼脂平板法介绍
软琼脂克隆化借助撒在软琼脂上单个细胞定位生长，而达到克隆化，具体操作如下：1．配2.5%的琼脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。2．将117ml完全DMEM液和3ml10倍浓度的DMEM液混合，置45℃水浴预热。3．将琼脂糖与DMEM液混合，即为含0.5%琼脂糖的完全DMEM液，并加75×1
单克隆抗体的纯化——蛋白A琼脂糖纯化
单克隆抗体的纯化可用于：（1）制备体外诊断试剂；（2）制备治疗用药实验方法原理目前常用的纯化方法有：盐析、凝胶过滤、离子交换层析和辛酸提取等方法达到纯化目的，也有采用较简便的酸沉淀法。最有效的纯化法为亲合纯化法，常用葡萄球菌A蛋白或抗小鼠免疫球蛋白抗体与载体交联，制备亲合层析柱将抗体结合后洗脱，回收
细胞单克隆的分离方法（有限稀释法与软琼脂法）
一、有限稀释法材料：a、96孔细胞培养板等；b、HT培养基；c、活力强的杂交瘤细胞；d、小鼠腹腔细胞。方法：a、制备小鼠腹腔细胞。同“细胞融合”一节中的方法。b、制备待克隆的杂交瘤细胞悬液，用含20%血清的HT培养基稀释至每毫升含2.5、15和50个细胞三种不同的稀释度。c、按每毫升加入5×104-
琼脂扩散实验——单向琼脂扩散
实验材料待检血清试剂、试剂盒生理盐水琼脂粉仪器、耗材微量进样器打孔器玻璃板湿盒实验步骤1. 将适当稀释（事先滴定）的诊断血清与予溶化的2%琼脂在60℃水浴预热数分钟后等量混合均匀制成免疫琼脂板。2. 在免疫琼脂板上按一定距离（1.2~1.5厘米）打孔，见图1。图1 单向琼脂扩散试验抗原孔位置示
琼脂扩散实验——双向琼脂扩散
实验材料待测血清试剂、试剂盒生理盐水琼脂粉仪器、耗材载玻片打孔器微量进样器实验步骤1. 取一清洁载玻片，倾注3.5~4.0毫升加热熔化的1%食盐琼脂制成琼脂板。2. 凝固后，用直径3毫米打孔器，孔间距为5毫米。孔的排列方式如图2所示。图2 双向琼脂扩散原抗体孔位置示意图3. 用微量进样器于中央
琼脂和琼脂糖的区别
1、本质不一样琼脂：是植物胶的一种，常用海产的麒麟菜、石花菜、江蓠等制成，为无色、无固定形状的固体，溶于热水。琼脂糖：琼脂糖：是线性的多聚物，基本结构是1，3连结的β-D-半乳糖和1，4连结的3，6-内醚-L-半乳糖交替连接起来的长链。琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。2、用途不一样琼脂：
尿素琼脂
成分 蛋白胨 1g 氯化钠 5g 葡萄糖 1g 磷酸二氢钾 2g 0.4%酚红溶液 3mL 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL 20%尿素溶液 100mL pH7.2±0.1 制法 将除尿素和琼脂以外的成分配好，
豆粉琼脂
成分 牛心消化汤(PH7.4～7.6) 1000mL 琼脂 20g 黄豆粉浸液 50mL制法 将琼脂加在牛心消化汤内，加热溶解，过滤。加入豌豆粉浸液，分装每瓶100mL，121℃高压灭菌15min。 豌豆粉浸液制法：取豌豆粉
血琼脂
成分 pH7.4～7.6豆粉琼脂 100mL 脱纤维羊血(或兔血) 5～10mL制法 加热溶化琼脂，冷至50℃，以灭菌手续加入脱纤维羊血，摇匀，倾注平板。亦可分装灭菌试管，置成斜面。亦可用其他营养丰富的基础培养基配制血琼脂。
DHL琼脂
成分 蛋白胨 20g 牛肉膏 3g 乳糖 10g 蔗糖 10g 去氧胆酸钠 1g 硫代硫酸钠 2.3g 柠檬酸钠 1g 柠檬酸铁铵 1g 中性红 0.03g 琼脂 18～20g 蒸馏水
HE琼脂
成分 脙胨 12g 牛肉膏 3g 乳糖 12g 蔗糖 12g 水杨素 2g 胆盐 20g 氯化钠 5g 琼脂 18～20g 蒸馏水 1000mL 0.4%溴麝香草酚蓝溶液 16mL Andrad
SS琼脂
基础培养基 牛肉膏 5g 脙胨 5g 三号胆盐 3.5g 琼脂 17g 蒸馏水 1000mL 再将两液混合，121℃高压灭菌15min，保存备用。完全培养基 基础培养基
Ws琼脂
成分 ②胨 12g 牛肉膏 3g 氯化钠 5g 乳糖 12g 蔗糖 12g 十二烷基硫酸钠 2g 琼脂 15g Andrade指示剂
TTC琼脂
成分 胰蛋白胨(tryptone) 17.0g 大豆胨 3.0g 葡萄糖 6.0g 氯化钠 2.5g 硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂
马铃薯琼脂
成分 马铃薯(去皮切块) 200g 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL制法 同马铃薯葡萄糖琼脂。 用途 鉴定霉菌用。
营养琼脂
成分 蛋白胨 10g 牛肉膏 3g 氯化钠 5g 琼脂 15～20g 蒸馏水 1000mL制法 将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至7.2～7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121℃高压灭菌15min
用克隆环分离细胞克隆
实验方法原理 将集落在瓷制克隆环、玻璃环、PTFE 环或者不锈钢环中用胰蛋由酶消化后移至24 孔或12 孔板中的一个孔或者直接种于 25 cm2 的培养瓶内。实验材料 胰蛋白酶试剂、试剂盒 硅油仪器、耗材 克隆培养环巴氏吸管生长培养基多孔板无菌镊移液器粗头笔实验步骤 1. 观察细胞克隆，用毡制粗头笔