软琼脂克隆化的方法
软琼脂克隆化借助撒在软琼脂上单个细胞定位生长，而达到克隆化，具体操作如下：1．配2.5%的琼脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。2．将117ml完全DMEM液和3ml10倍浓度的DMEM液混合，置45℃水浴预热。3．将琼脂糖与DMEM液混合，即为含0.5%琼脂糖的完全DMEM液，并加75×108脾细胞。4．每块平皿加10ml，于室温中凝固。5．DMEM中的细胞与DMEM—琼脂1:1混合，将细胞琼脂混合物2ml铺于凝固的平板上，使其全部覆盖。6．放入CO2箱饱和湿度，37℃培养10天。7．用PBS配制0.6%琼脂糖，于沸水浴溶解后，置45℃，在保温情况下取一试管，迅速加入0.1ml25%羊红血球，0.2ml豚鼠补体，2.7ml0.6%琼脂糖。8．用3ml琼脂糖—羊红血球混合液覆盖克隆。于37℃CO2箱孵育1h~2h。从克隆上部溶解羊红血球的溶血范围，可筛选抗羊红血球Ig。......阅读全文
软琼脂克隆化的方法
软琼脂克隆化借助撒在软琼脂上单个细胞定位生长，而达到克隆化，具体操作如下：1．配2.5%的琼脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。2．将117ml完全DMEM液和3ml10倍浓度的DMEM液混合，置45℃水浴预热。3．将琼脂糖与DMEM液混合，即为含0.5%琼脂糖的完全DMEM液，并加75×1
单克隆抗体的克隆化方法软琼脂平板法介绍
软琼脂克隆化借助撒在软琼脂上单个细胞定位生长，而达到克隆化，具体操作如下：1．配2.5%的琼脂糖30ml，水浴溶化后，移入45℃水浴中。2．将117ml完全DMEM液和3ml10倍浓度的DMEM液混合，置45℃水浴预热。3．将琼脂糖与DMEM液混合，即为含0.5%琼脂糖的完全DMEM液，并加75×1
单克隆抗体技术：克隆化(有限稀释法、软琼脂克隆化、...
经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。 克隆化的阳性杂交瘤细胞，经
软琼脂法
软琼脂法是一种克隆化的方法。克隆化是指使单个细胞无性繁殖而获得该细胞团体的整个培养过程。
软琼脂克隆形成实验
原理：细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形
软琼脂克隆形成实验
原理：细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形
软琼脂克隆形成实验
原理：细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形
软琼脂克隆形成实验
实验方法原理 软琼脂克隆形成实验主要用于非贴壁生长的细胞，某些细胞(如正常成纤维细胞)在悬浮状态下不能增殖，不适用此法。某些恶性肿瘤细胞，不仅在贴壁状态下能增殖，在悬浮状态下也能增殖，其在软琼脂中形成克隆的能力反映了其恶性程度。
软琼脂克隆形成实验
实验方法原理 软琼脂克隆形成实验主要用于非贴壁生长的细胞，某些细胞(如正常成纤维细胞)在悬浮状态下不能增殖，不适用此法。某些恶性肿瘤细胞，不仅在贴壁状态下能增殖，在悬浮状态下也能增殖，其在软琼脂中形成克隆的能力反映了其恶性程度。
软琼脂克隆形成实验
软琼脂克隆形成实验可用于：（1）细胞分化的基础研究；（2）临床肿瘤治疗的疗效检验等方面。实验方法原理软琼脂克隆形成实验主要用于非贴壁生长的细胞，某些细胞(如正常成纤维细胞)在悬浮状态下不能增殖，不适用此法。某些恶性肿瘤细胞，不仅在贴壁状态下能增殖，在悬浮状态下也能增殖，其在软琼脂中形成克隆的能力反映
克氏双糖铁琼脂(换用方法)
成分 蛋白胨 20g 牛肉膏 3g 酵母膏 3g 乳糖 10g 葡萄糖 1g 氯化钠 5g 柠檬酸铁铵 0.5g 硫代硫酸钠 0.5g 琼脂 12g 酚红 0.0
软琼脂培养的概念和原理
I.Macpherson等于1964年首创的培养法，这一培养法选择性地使已转化的细胞进行增殖，而抑制正常细胞的增殖。通常是将含有0.5%琼脂的培养基作为营养层铺在底部，然后再将含有细胞的少量软琼脂培养基（琼脂量约0.3%）倒在上面。正常细胞仍停留在接种时的状态，几乎不进行增殖，但已转化的细胞则以半浮
肿瘤细胞的软琼脂集落培养实验
肿瘤细胞的软琼脂集落培养实验可用于：（1）细胞分化的基础研究；（2）临床肿瘤治疗的疗效检验等方面。实验方法原理在体外培养基中由一个祖先细胞增殖形成的细胞团，称之为集落。肿瘤细胞能无限繁殖，所以具有这种能力，而成熟分化的细胞则不能形成集落。HL-60细胞是一种急性早幼粒细胞白血病细胞，在体外无需加刺激
肿瘤细胞的软琼脂集落培养实验
肿瘤细胞的软琼脂集落培养实验 实验方法原理 在体外培养基中由一个祖先细胞增殖形成的细胞团，称之为集落。肿瘤细胞能无限繁殖，所以具有这种能力，而成熟分化的细胞则
肿瘤细胞的软琼脂集落培养实验
实验方法原理 在体外培养基中由一个祖先细胞增殖形成的细胞团，称之为集落。肿瘤细胞能无限繁殖，所以具有这种能力，而成熟分化的细胞则不能形成集落。HL-60细胞是一种急性早幼粒细胞白血病细胞，在体外无需加刺激因子，可在软琼脂培养基中形成集落。二甲
肿瘤细胞的软琼脂集落培养实验
在体外培养基中由一个祖先细胞增殖形成的细胞团，称之为集落。肿瘤细胞能无限繁殖，所以具有这种能力，而成熟分化的细胞则不能形成集落。实验方法基本方案 实验方法原理 HL-60细胞是一种急性早幼粒细胞白血病细胞，在体外无需加刺激因子，可在软琼脂培养基中形成集落。二甲基亚砜是一种细胞分化诱导剂，经二甲基亚砜
软琼脂克隆形成实验的基本步骤
原理：细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形
细胞单克隆的分离方法（有限稀释法与软琼脂法）
一、有限稀释法材料：a、96孔细胞培养板等；b、HT培养基；c、活力强的杂交瘤细胞；d、小鼠腹腔细胞。方法：a、制备小鼠腹腔细胞。同“细胞融合”一节中的方法。b、制备待克隆的杂交瘤细胞悬液，用含20%血清的HT培养基稀释至每毫升含2.5、15和50个细胞三种不同的稀释度。c、按每毫升加入5×104-
肿瘤细胞的软琼脂集落培养和测定
一、原理 在体外培养基中由一个祖先细胞增殖形成的细胞团，称之为集落。肿瘤细胞能无限繁殖，所以具有这种能力，而成熟分化的细胞则不能形成集落。HL一60细胞是一种急性早幼粒细胞白血病细胞，在体外无需加刺激因子，可在软琼脂培养基中形成集落。二甲基亚砜是一种细胞分化诱导剂，经二甲基亚砜处理后的HL一
克氏双糖铁琼脂(KI)
上层培养基成分 血消化汤(PH7.6) 500mL 琼脂 6.5g 硫代硫酸钠 0.1g 硫酸亚铁铵 0.1g 乳糖 5g 0.2%酚红溶液 5mL下层培养基成分 血消化汤(pH7.6) 500mL 琼脂
阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存
单个细胞培养又称克隆化。细胞克隆化一般至少进行3～5次。克隆化有以下几种方法：(一)显微操作法 直观可靠，但操作时间过长，容易增加污染机会。(二)有限稀释法 操作简单，出现率高，为实验室最常用的方法。(三)荧光激活细胞分选仪 先进、高效、高纯度、昂贵。(四)软琼脂平板法 本法缺点是琼脂融化温度较难掌
阳性杂交瘤细胞的克隆化培养与冻存
单个细胞培养又称克隆化。细胞克隆化一般至少进行3～5次。克隆化有以下几种方法：(一)显微操作法 直观可靠，但操作时间过长，容易增加污染机会。(二)有限稀释法 操作简单，出现率高，为实验室最常用的方法。(三)荧光激活细胞分选仪 先进、高效、高纯度、昂贵。(四)软琼脂平板法 本法缺点是琼脂融化温度较难掌
阳性杂交瘤细胞怎么样进行克隆化培养与冻存？
单个细胞培养又称克隆化。细胞克隆化一般至少进行3～5次。克隆化有以下几种方法：(一)荧光激活细胞分选仪 先进、高效、高纯度、昂贵。(二)有限稀释法 操作简单，出现率高，为实验室最常用的方法。(三)显微操作法 直观可靠，但操作时间过长，容易增加污染机会。(四)软琼脂平板法 本法缺点是琼脂融化温度较难掌
单克隆抗体的克隆化方法
克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。 克隆化的阳性杂交瘤细胞，经过一段时期培养之后，也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失，使部分细
单克隆抗体的克隆化方法
克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。 克隆化的阳性杂交瘤细胞，经过一段时期培养之后，也还会因为细胞突变或特定染色体的丢失，使部分细
单克隆抗体(monoclonal－antibody)克隆化技术
经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细胞有被淹没和淘汰的可能。但克隆时间也不宜太早，太早细胞性状不稳定，数量少也易丢失。 克隆化的阳性杂交瘤细胞，经
单克隆抗体的克隆化方法
实验概要本文介绍了单克隆抗体的克隆化方法，包括有限稀释法、显微操作法、软琼脂平板法及荧光激活分离法等。实验原理经过抗体测定的阳性孔，可以扩大培养，进行克隆，以得到单个细胞的后代分泌单克隆抗体。克隆的时间一般说来越早越好。因为在这个时期各种杂交瘤细胞同时旺盛生长，互相争夺营养和空间，而产生指定抗体的细
关于动物细胞工程的过程介绍
1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。 2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细
关于动物细胞工程的过程介绍
1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞不能在
单克隆抗体的制备步骤
过程1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞