阳性克隆筛选方法汇总
阳性克隆筛选方法汇总 ——基于ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9基因敲除方法 近几年来，基因重组的技术层出不穷，包括TALEN和CRISPR/Cas9在内的重组技术给基础研究提供更为方便和快捷的分子生物学工具。 关于这些技术的具体原理和操作细节，这里不做展开介绍，主要谈一谈在用这些技术进行细胞株构建的过程中，如何做才能加快阳性克隆筛选的步伐,做好这个关键的步。 一，混合克隆pool验证 质粒转染后48-72小时后取转染后细胞的pool 1000个细胞以上离心，去上清，PBS洗一遍，细胞沉淀溶于适量的PBS中，煮5min后模板就制备好了，剩余的pool细胞做有限稀释，一般5块板足够。 分析敲除位点的上下游序列，设计合适的引物PCR扩增目的基因片段，与野生型目的基因杂交后CruiserTM酶切15-20分钟，酶切产物1.5%-2%凝胶电泳。 上图为混合克隆pool酶切检测，由此图可知......阅读全文
制备克隆实验
试剂、试剂盒 ATP-巯基乙醇IPTGX-gal平末端限制酶连接缓冲液T4DNA 连接酶平末端插入物克隆载体培养基仪器、耗材 FALCON 2059 多聚丙烯试管37°C 恒温箱 水浴箱实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂ATP(10 mmol/L)β-巯基乙醇（可选择）IPTG(100 mm
PCR产物克隆
克隆方法：1. 平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3''末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3''突出一个碱基的DNA分子。这种DN
PCR产物克隆
克隆方法：1. 平端连接 通常情况下，PCR产物可直接与平端载体DNA进行连接，但其连接效率效低。因为TaqDNA聚合酶具有非模板依赖性末端转移酶活性，能在两6条DNA链的3''''末端加上一个多余的碱基，使合成的PCR产物成为3'''&#
多克隆抗体
Making Antibody· Production of Polyclonal Antibody in Rabbit (Walter Steffen)Provides detailed protocol for immunizatioin, bleeding procedure,
miRNA克隆实验
实验方法原理 在细胞中表达的 RNA 除了我们所熟悉的 mRNA 以外，还有大量不编码蛋白质的非编码 RNA（noncoding RNA，ncRNA），非编码 RNA 在细胞中起着非常重要的作用，如 rRNA 和 tRNA 维持着基因
定位候选克隆
当前，人类基因组研究的重心正在由“结构”向“功能”转移，一个以基因组功能研究为主要内容的所谓“后基因组时代”(post-genomics)，也即功能基因组(functional genomics)时代，即将到来。如何获取基因的功能信息，即与人类重大疾病和重要生理功能相关的基因信息，就摆在了我们面前。
核糖克隆实验
这个方案只是用 RNA 酶处理 PCR 产物的一种方法。有很多可选择和有效的途径来纯化 PCR 产物以除去引物，接着用酶处理 PCR 产物，然后再除去酶。值得注意的是用 PCR仪设置温浴程序是很方便的。可以在加热步骤完成后选择加上“冷却”步骤，即在冷模块中放置 5 min 甚至过夜。本实验来源于 P
靶向克隆法
靶向克隆法是一种新的基因克隆方法，该克隆方法的特点是：在基因克隆过程中不使用已有的DNA Ligase，而是使用新开发的靶向克隆酶。靶向克隆酶能够使末端序列相同的双链DNA(14bp-18bp)同源重组，从而达到克隆基因的目的。LP Recco酶，中文名：靶向克隆酶，无需传统基因克隆所需要的限制性内
核糖克隆实验
试剂、试剂盒ATEN 缓冲液DNA 缓冲液（TEN)KLA 缓冲液T5E5Dpn IKlentaq LA蛋白酶 K蛋白酶K储存缓冲液RNA 酶 A设计好的载体已经进行 5'端生物素-TEG 修饰并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修饰过的引物卡那霉素（Sigma)四环素Ticarci
核糖克隆实验
—、材料1. 缓冲液、溶液和试剂.10XATEN 缓冲液0.5mol/LTris-HCl,pH7.92.5mol/L 氯化钠0.25mol/L Na4EDTA,pH7.9甜菜碱（SigmaB-2629)蓝色葡聚糖（bluedextran)(SigmaD
核糖克隆实验
试剂、试剂盒 ATEN 缓冲液DNA 缓冲液（TEN)KLA 缓冲液T5E5Dpn IKlentaq LA 蛋白酶 K蛋白酶K储存缓冲液 RNA 酶 A设计好的载体已经进行 5'端生物素-TEG 修饰并且 3'端核糖胞嘧啶或者核糖尿嘧啶修饰过的引物卡那霉素（Sigma)四
细胞克隆染色
做克隆形成率的染色非常非常简单,因为克隆产生的细胞集落非常清晰,大的甚至肉眼可辩.对染色方法只有一个基本要求,染细胞不染培养容器就可以了.非常多的染料可以用作此用途.像是一楼所说的结晶紫也可以.
什么是克隆？
“克隆”这个词听上去并不陌生，在我们的日常生活中也会经常用到它。比如，每当春暖花开时，有人喜欢进行植物扦插的试验。从一棵植株上剪下的植条，通过扦插而形成许多遗传物质的组成完全相同的植株就是克隆；又比如有一种样子像苹果，但滋味像梨的水果——梨苹果就是采用树嫁接培育而成的。嫁接形成的产物也是克隆；还有将
分子克隆介绍
各位小伙伴，大家还记得当初进实验室的时候接触到的一个实验技能是什么呢？没错，是 PCR 扩增。小编曾经也是，看着自己亲自配比 PCR 克隆扩增的每个组分，亲眼看着琼脂糖凝胶在紫外透光台上发出的幽绿色的荧光，也是深深被迷住。但总不可能成天就对着这个邪魅的荧光发呆，对吧？看久了，她会爱上你的眼
制备克隆实验
试剂、试剂盒 ATP -巯基乙醇 IPTG X-gal 平末端限制酶 连接缓冲液 T4DNA 连接酶 平末
PCR产物克隆
PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。但因为TA克隆法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的ZL权。TA克隆方法（Original TA Cl
细胞克隆和DNA克隆之间是什么关系
细胞克隆包括了dna的克隆，这么说吧，你要克隆一个细胞，你就要百克隆度这个细胞的所有，而dna是一个细胞最重要的东东。但是这并不是说细胞克隆的时候你要自己去克隆dna。细胞内克隆时相当于你在容体外复制细胞，自然dna也会被克隆。而dna克隆，你可以用pcr去完成。
单克隆抗体技术的克隆化的内容
从原始孔中得到的阳性杂交瘤细胞，可能来源于二个或多个杂交瘤细胞，因此它们所分泌的抗体是不同质的。为了得到完全同质的单克隆抗体，必须对杂交瘤细胞进 行克隆化。另一方面，杂交瘤细胞培养的初期是不稳定的，有的细胞丢失部分染色体，可能丧失产生抗体的能力。为了除去这部分已不再分泌抗体的细胞，得到分泌 抗体
什么是多克隆抗体，多克隆抗体的优势？
天然的抗原分子中常含有多种不同的抗原表位，以该抗原刺激机体的免疫系统可同时激活多种B细胞克隆，产生的抗体中会含有多种针对不同抗原表位的抗体，因此称之为多克隆抗体。多克隆抗体主要从动物免疫血清、恢复期患者血清或免疫接种人群的血清中获得。多克隆抗体的优势是：作用全面，具有中和抗原、免疫调理、补体依赖的细
美成功克隆猴子胚胎－人体克隆可能性增大
美国科学家新近取得的一种技术突破可帮助利用成年猴子克隆胚胎，预示着克隆人类胚胎终于有可能成为现实。这种新技术承诺将革命性地提高科学家把人类卵子转化为克隆胚胎的效率，同时也引发新一轮关于克隆人伦理的讨论。 据悉，被克隆的是一只10岁的雄性恒河猴。（华盖图） 基于新的卵子处理方法 这是科学家首次
单克隆抗体和多克隆抗体有何区别
单克隆抗体的优点与局限性：单克隆抗体和多克隆抗体各有其优点和局限性，只有对它们有全面的了解，才能根据不同应用领域的要求，正确的选择和应用。1.单克隆抗体的优点：（1）杂交瘤可以在体外“永久”地存活并传代，只要不发生细胞株的基因突变，就可以不断的生产高特异性、高均一性的抗体。（2）可以用相对不纯的抗原
关于单克隆抗体有限稀释法克隆法介绍
1．材料 （1）微量培养盘，盘内各孔于克隆化前一天培养小鼠腹腔细胞（即饲养细胞）每孔2万～4万。 （2）HT培养基 2．操作方法 （1）取出抗体阳性孔细胞，用HT培养液制成细胞悬液。并取样进行台盼兰染色，计数。 （2）用HT培养液将细胞稀释成200个/ml、40个/ml、20个/ml和
单克隆抗体与多克隆抗体的功能差异
单克隆抗体和多克隆抗体的最大的区别在于特异性上的差别。因此实验中如果对抗体的特异性有一定的需求，但并不是特别强调的话，可以选择定制多克隆抗体，这样的实验一般包含Western-Blot(WB)，IP等。如果您需要抗体用于流式细胞术时，那么最好选择单克隆抗体。另外，在研究很多新的蛋白时，并不确定新蛋白
世界首头克隆骆驼怀孕：证明克隆动物可繁衍
科学家表示世界上第一头克隆骆驼“因扎兹”（Injaz）成功自然受孕。“因扎兹”今年6岁，是2009年一头屠宰骆驼的卵巢细胞克隆结晶。整个克隆过程借助一位代孕母亲完成。照片中的小骆驼便是“因扎兹”，当时只有6天大。 自“因扎兹”降生后，科学家又成功克隆了很多动物，其中包括一头利用骆驼选美比赛冠军
重组克隆的概念
中文名称重组克隆英文名称recombinant clone定 义含有重组核酸分子或其片段的分子克隆或细胞克隆。应用学科生物化学与分子生物学（一级学科），方法与技术（二级学科）
分子克隆常用技术
一、核酸的纯化 在分子克隆的所有操作中，最基本的操作是核酸的纯化。其关键步骤是去蛋白质，通常只要用酚/氯仿。氯仿抽提核酸的溶液即可。每当需要把克隆有某一些所用的酶灭活或去除以便进行下一步时，可进行这种抽提。然而，如要从细胞裂解液等复杂的分子混合物中纯化核酸，则要先用某些蛋白水解酶消化大部分蛋白质后
克隆技术（十）
克隆多利羊1996年7月5日克隆出一只基因结构与供体完全相同的小羊“多利”（Dolly），世界舆论为之哗然。“多利”的特别之处在于它的生命的诞生没有精子的参与。研究人员先将一个绵羊卵细胞中的遗传物质吸出去，使其变成空壳，然后从一只6岁的母羊身上取出一个乳腺细胞，将其中的遗传物质注入卵细胞空壳中。这克
克隆技术（八）
技术应用日本理化研究所的科学家借助用克隆动物培育克隆动物的“再克隆”技术，成功地用一只实验鼠培育出了26代共598只实验鼠，而且克隆的实验鼠很健康，繁殖能力和寿命与一般实验鼠也没有区别。研究人员认为，这说明再克隆可以无限持续下去。该研究作为封面故事发表在了3月7日的《细胞-干细胞》(Cell Ste
PCR产物的克隆
PCR产物克隆大致分为两类，即平头连接和粘头连接。平头连接是将制备好的平头载体和补平或削平的PCR 产物直接进行连接。载体可用EcoR V或Sma I切成平头；PCR 产物纯化后，可以在22℃用DNA聚合酶I作用30min（利用该酶所具有的3’→5’外切酶活性和5’→3’的聚合酶活性）。如果要求
克隆技术（二）
定义概述克隆技术 [1]克隆是英文“clone”一词的音译，在台湾与港澳一般意译为复制或转殖，是利用生物技术由无性生殖产生与原个体有完全相同基因组之后代的过程.科学家把人工遗传操作动物繁殖的过程叫克隆，这门生物技术叫克隆技术，其本身的含义是无性繁殖，即由同一个祖先细胞分裂繁殖而形成的纯细胞