决定DNA在琼脂糖凝胶电泳色谱仪中迁移速率的因素
决定DNA在琼脂糖凝胶电泳色谱仪中迁移速率的因素有DNA分子大小、琼脂糖凝胶浓度、DNA构象、琼脂糖凝胶和电泳缓冲液中的溴化乙锭、所用电压、电泳缓冲液等。一、DNA分子大小:双链DNA分子在琼脂糖凝胶中的迁移速率与其碱基对数的常用对数成反比。分子越大,迁移越慢,因为摩擦力越大,也因为大分子通过凝胶孔的效率低于较小的分子。二、琼脂糖凝胶浓度:给定大小的线状DNA段在不同浓度的琼脂糖凝胶中的迁移速率不同。三、DNA构象:超螺旋环状(Ⅰ型)、切口环状(Ⅱ型)和线状(Ⅲ型)DNA在琼脂糖凝胶中的迁移速率不同,三种类型的移速速率主要取决于琼脂糖凝胶的浓度和类型,电流强度、缓冲液离子强度和Ⅰ型超螺旋绞紧的程度也影响迁移速率。在一些条件下,Ⅰ型DNA比Ⅲ型迁移得快,但在另一些条件下,顺序可能会颠倒。绝大多数情况下,区分不同构象DNA的需求很简单,主要是区分未处理的环状DNA样品和单一位点经限制酶作用线状化的同一DNA样品。四、琼脂糖凝胶和电泳......阅读全文
毛细管区带电泳色谱仪分析技术
一、工作原理: CZE中,粒子的电荷性质不同,电泳方向不同;粒子的电荷数量不同,电泳速度不同;粒子的分子量不同,电泳速度不同。在毛细管中,由于电渗流的存在,所有粒子都随电渗流一起向负极迁移,电渗流速度约是一般离子电泳速度的5~7倍。各种电性粒子在毛细管中的迁移速度分别为: 1、阳离子:vap
高效毛细管电泳色谱仪性能特点归纳
高效毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继高效液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。 C
毛细管区带电泳色谱仪分析技术
毛细管区带电泳色谱仪(CZE)又称自由溶液区带电泳仪,整个系统采用同一种缓冲液充满,以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异进行分离。一、工作原理: CZE中,粒子的电荷性质不同,电泳方向不同;粒子的电荷数量不同,电泳速度不同;粒子的分子量不同,电泳速度不同。在毛细管
凝胶色谱仪DNA电泳带模糊的解决方案
凝胶色谱仪DNA电泳带模糊的解决方案:一、可能原因:DNA降解。解决方案:避免核酸酶污染。二、可能原因:电泳缓冲液多次使用后,离子强度降低,pH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳效果。解决方案:经常更换电泳缓冲液。三、可能原因:所用电泳条件不合适。解决方案:电泳时电压应<20V/cm,温度<30℃。
毛细管电泳色谱仪电动进样技术
毛细管电泳色谱仪电动进样是当在毛细管的进样端浸入样品溶液并加上电场E时,组分因电泳和电渗作用而进入毛细管内。由于毛细管内径很小,对进样技术要求很高,进样区带宽度约是毛细管柱长的1%~2%,不能引入显著的区带扩张,以确保系统的;样品量必须<100nL,否则易造成过载。一、进样方法:毛细管洗净后,用微量
影响等电聚焦电泳色谱仪分离容量的因素
等电聚焦电泳色谱仪是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同,在一个稳定、连续和线性的pH梯度中进行分离。等电聚焦是在电泳介质中放入载体两性电解质,当通以直流电时,载体两性电解质形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,不同的蛋白质移动到其相当的等电点位置上,聚焦于一个狭窄区带中的过程。一、影响等电
毛细管电泳色谱仪压力进样技术
毛细管电泳色谱仪压力进样要求毛细管内的填充介质具有流动性,当毛细管两端置于不同的压力环境中时,管内溶液流动,将样品引入。一、进样动力:进样动力有进样端加压(正压)、出口端抽真空(负压)和虹吸(重力)。1、进样端加压:采用压缩空气(钢瓶气)可实现正压进样,并可与毛细管清洗系统共用。多采用。2、出口端抽
毛细管电泳色谱仪毛细管简介
毛细管电泳色谱仪分离的关键部件是毛细管。一、毛细管材质:理想的毛细管必须是电绝缘、紫外可见光透明和富有弹性。目前使用的有塑料毛细管、玻璃毛细管和石英毛细管等,其中使用最多的是石英毛细管。熔融石英拉制的毛细管脆而易断,外涂聚酰亚胺后会变得很有弹性。二、毛细管检测窗口制作:毛细管的聚酰亚胺涂层不透明,检
毛细管电泳色谱仪分离分析模式详解
分析模式详解。毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,正成为生物样品zui重要的分离分析手段。CE分离分析模式有毛细管电色谱、毛细管区带电泳
毛细管电泳色谱仪的主要特点
毛细管电泳色谱仪是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度和分配系数的差异进行分离。由于毛细管的散热性能良好,允许在小内径毛细管两端加高达30kV的高电压,可在很短的时间内达到很高的分离效率,具有以下特点: 一、分离速度快。二、分离效率高。三、运行成本低。四、样品和试剂消
毛细管区带电泳色谱仪工作原理
毛细管区带电泳色谱仪(CZE)的整个系统采用同一种缓冲液充满,以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异进行分离,是CEzui基本、应用最广的分离模式。CZE中,粒子的电荷性质不同,电泳方向不同;粒子的电荷数量不同,电泳速度不同;粒子的分子量不同,电泳速度不同。在毛细管中
毛细管电泳色谱仪检测器汇总
毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离。由于CE溶质区带的超小体积特性导致光程太短,圆柱形毛细管作为光学表面不够理想,对检测器灵敏度要求相当高。CE检测器有紫外检测器、激光诱导荧光检测器、质谱检测器、电化学检测器、激光
等电聚焦电泳色谱仪pH梯度的形成过程
等电聚焦电泳色谱仪是在电泳介质中放入载体两性电解质,当通以直流电时,载体两性电解质形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,不同的蛋白质移动到其相当的等电点位置上,聚焦于一个狭窄区带中而达到分离。载体两性电解质是一系列脂肪族多氨基多羧酸同系物和异构体组成的混合物,具有很多既不相同又十分接近的相互连接的
毛细管等电聚焦电泳色谱仪分析技术
毛细管等电聚焦电泳色谱仪(CIEF)是以载体两性电解质为介质,根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术。一、载体两性电解质应具备的条件:载体两性电解质是两性分子,使其在电泳柱中能达到一个平衡位置。载体两性电解质可作为载体,但两性电解质不能用于等电聚焦。只有载体两性电解质,即具有好的电导和缓冲
琼脂糖凝胶电泳色谱仪的载体分类
琼脂糖凝胶电泳色谱仪的载体按熔点可分为高熔点(标准)琼脂糖凝胶和低熔点琼脂糖凝胶。一、高熔点(标准)琼脂糖凝胶:制造高熔点琼脂糖凝胶的原料是Gelidium和Gracilaria海藻。这两种琼脂糖的熔点不同,但在实际应用中每种来源的琼脂糖都可以用于分离1~25kb的DNA段。新型的标准琼脂糖具有高凝
毛细管电泳色谱仪进样方式归纳
毛细管电泳色谱仪进样方式有电动进样、压力进样和扩散进样。一、电动进样:1、方法:在毛细管的阳极端接触缓冲液前,先置于样品溶液中,并在很短时间内加进样电压,使样品通过电迁移进入毛细管。2、特点:(1)对毛细管内的填充介质没有特殊限制,属普适性进样方法,可实现自动化操作。(2)进样装置简单,不需附加设备
毛细管电泳色谱仪在药学中的应用
毛细管电泳色谱仪(HPCE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到纳升级。近年来,HPCE在药物分析应用中发展迅速,正越来越受到重视。一、中药及中药复方制剂的分析:1、应用范
毛细管电泳色谱仪进样注意事项
毛细管电泳色谱仪对进样技术要求很高,进样时应注意以下事项:一、毛细管插入样品溶液后,应立即开始进样操作,完成后迅速移至缓冲液中开始电泳。否则会产生毛细作用和虹吸现象,引起误差并使谱带展宽。二、电极不要和毛细管接触,样品贮器和缓冲液贮器液面的高度应保持平衡。三、进样区带越小越好,否则会使柱效和分离度降
毛细管电泳色谱仪有机基质整体柱制备
毛细管电泳色谱仪有机基质整体毛细管柱是采用柱内直接键合的方法在毛细管中进行原位自由基聚合反应,形成连续床固定相,不用柱塞,简化了柱制备过程。通过改变单体可引入多种官能团,有更好的多孔性和渗透性,对流动相阻力小,溶质在固定相和流动相之间快速分配,有利于实现高速分离。有机基质整体毛细管柱有以聚丙烯酰胺、
毛细管电泳色谱仪无机基质整体柱制备
毛细管电泳色谱仪无机基质整体毛细管柱是采用柱内直接键合的方法在毛细管中进行原位自由基聚合反应,形成连续床固定相,不用柱塞,简化了柱制备过程。通过改变单体可引入多种官能团,有更好的多孔性和渗透性,对流动相阻力小,溶质在固定相和流动相之间快速分配,有利于实现高速分离。无机基质整体毛细管柱是通过溶胶-凝胶
毛细管电泳色谱仪在环境中的应用
毛细管电泳色谱仪(CE)在环境中的应用:一、CE是元素形态分析的一种新型分离技术。目前用于形态分析的主要分离模式是CZE,检测器主要是UVD。间接紫外检测是在缓冲液中加入具有紫外吸收的物质,当那些没有或有很小紫外吸收的分析物通过检测窗口时引起吸光度的减小,为自身没有发色团的无机离子、无机络合物和有机
毛细管电泳色谱仪分析的关键问题
毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以高压直流电场为驱动力,利用荷电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。由于CE溶质区带
高效毛细管等电聚焦电泳色谱仪分析技术
高效毛细管等电聚焦电泳色谱仪(CIEF)是以载体两性电解质为介质,根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术。一、载体两性电解质应具备的条件: 载体两性电解质是两性分子,使其在电泳柱中能达到一个平衡位置。载体两性电解质可作为载体,但两性电解质不能用于等电聚焦。只有载体两性电解质,即
高效毛细管电泳色谱仪扩散进样技术
高效毛细管电泳色谱仪扩散进样是利用浓度差扩散原理,当将毛细管浸入样品溶液时,样品分子因在毛细管管口界面存在浓度差而向管内扩散。一、进样质量: 扩散进样时,在时间t内,进入毛细管的样品质量Q为: Q = 400CS(2Dt)1/2 式中:D为样品分子的扩散系数
毛细管电泳色谱仪分析中的Zeta电位
毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以电渗流为驱动力,利用带电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,是分析科学继液相色谱仪之后的又一重大进展,使分析科学从微升级进入到了纳升级水平,不仅使单细胞乃至单分子分析成为可能,也使蛋白质和核酸等生物大分子分析有了新的转机。电渗流是CE的主要驱动力
影响毛细管电泳色谱仪迁移速率的因素
影响毛细管电泳色谱仪迁移速率的因素有待分离分子的性质、缓冲液pH值、缓冲液离子强度、电场强度、电渗和支持介质的筛孔等。一、待分离分子的性质:待分离分子带的电量越大,直径越小,形状越接近球形,迁移速率越大。二、缓冲液pH值:缓冲液pH值距离其等电点越远,待分离分子所带净电量越大,迁移速率越大。但pH过
等电聚焦电泳色谱仪pH梯度的建立方式
等电聚焦电泳色谱仪是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同,在一个稳定的、连续的和线性的pH梯度中进行分离,等电聚焦电泳的关键是pH梯度的建立。一、人工建立pH梯度:在电场下利用不同pH值缓冲液相互扩散,在混合区间形成pH梯度。此pH梯度易受缓冲液离子的迁移和扩散而变动,重复性差,已不被采用。二、
等电聚焦电泳色谱仪pH梯度的建立方式
等电聚焦电泳色谱仪是利用蛋白质分子或其它两性分子的等电点不同,在一个稳定的、连续的和线性的pH梯度中进行分离,等电聚焦电泳的关键是pH梯度的建立。 一、人工建立pH梯度: 在电场下利用不同pH值缓冲液相互扩散,在混合区间形成pH梯度。此pH梯度易受缓冲液离子的迁移和扩散而变动,重复性差,已不
毛细管电泳色谱仪分析中的电渗现象
毛细管电泳色谱仪(CE)是以毛细管为分离通道,以电渗流为驱动力,利用带电粒子之间的淌度差异和分配系数差异进行分离,电渗流在CE中起着极其重要的作用。一、电渗:电渗是指在电场作用下,毛细管中液体沿毛细管内表面或或固相多孔物质内液体沿固体表面移动的现象。毛细管一般采用石英管,管内表面为硅胶,当内充缓冲液
等电聚焦电泳色谱仪固相pH梯度的形成
等电聚焦电泳色谱仪固相pH梯度的介质是Immobilines试剂,不是两性分子,在凝胶聚合时便形成pH梯度,不随环境电场条件的改变而改变。Immobilines试剂的分子式为CH2 = CH-CO-NH-R,其中R代表羧基或第三氨基,每个分子都有一个单一的酸性或碱性缓冲基团与丙烯酰胺单连。分子一端的