琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪载体概述
琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪用于分离、鉴定和纯化DNA段,是分子克隆的核心技术之一。该技术操作简单,迅速,能分离用其它方法如密度梯度离心等不能满意分离的DNA段。此外,凝胶中DNA的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭直接观察到,甚至含量少至20pg的双链DNA在紫外线激发下也能直接检测到。这些分离的DNA条带可以从凝胶中回收,用于各种各样的目的。 琼脂糖凝胶的分离范围很大,50bp至百万bp长的DNA都可以在不同浓度和构型的琼脂糖凝胶中电泳分离。小片段DNA(50~20000bp)zui适合在恒定强度和方向的电场中水平方位的琼脂糖凝胶中电泳分离。在这些条件下,DNA的泳动速度通常随DNA段长度的增加而减少,与电场强度成正比。但此相关性当DNA段长度超过最大极限值时会立即被破坏,这主要是由于凝胶的构成和电场强度决定的。当线状双螺旋DNA的半径超过凝胶的孔径时,就达到分辨率的极限。此时,DNA不再被凝胶按其大小筛分......阅读全文
琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪载体概述
琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪用于分离、鉴定和纯化DNA段,是分子克隆的核心技术之一。该技术操作简单,迅速,能分离用其它方法如密度梯度离心等不能满意分离的DNA段。此外,凝胶中DNA的位置可以用低浓度荧光插入染料如溴化乙锭直接观察到,甚至含量少至20pg的双链DNA在紫外线激发下也能直接检测到。这
琼脂糖凝胶电泳色谱仪的载体分类
琼脂糖凝胶电泳色谱仪的载体按熔点可分为高熔点(标准)琼脂糖凝胶和低熔点琼脂糖凝胶。一、高熔点(标准)琼脂糖凝胶:制造高熔点琼脂糖凝胶的原料是Gelidium和Gracilaria海藻。这两种琼脂糖的熔点不同,但在实际应用中每种来源的琼脂糖都可以用于分离1~25kb的DNA段。新型的标准琼脂糖具有高凝
气液填充柱色谱仪载体概述
气液填充柱色谱仪载体是支撑固定液的惰性多孔固体颗粒。一、载体要求: 1、化学惰性。 2、比表面积大。 3、机械强度好。 4、热稳定性好。二、载体分类: 1、硅藻土型载体:(1)天然硅藻土+粘合剂→煅烧→红色载体(2)天然硅藻土+粘合剂+Na2CO3→煅烧→白色载体 2、非硅藻土型载体:(
聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪凝胶载体合成方式
聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪(PAGE)是以聚丙烯酰胺凝胶作为载体的电泳技术,由于分辨率高,目前已广泛用于蛋白质等生物大分子的分析。聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(CH2 = CH-CO-NH2,简称Acr)和交联剂N,N′-甲叉双丙烯酰胺(CH2 = CH-CO-NH-CO-CH = CH2,简称B
聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪载体的合成与性质
聚丙烯酰胺凝胶电泳色谱仪的载体是聚丙烯酰胺凝胶。聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(CH2 = CH-CO-NH2,简称Acr)和交联剂N,N′-甲叉双丙烯酰胺(CH2 = CH-CO-NH-CO-CH = CH2,简称Bis)在催化剂的作用下聚合而成的含酰胺基侧链的脂肪族长链,相邻的两个链通过甲叉桥交
概述杆状病毒表达系统的载体和发展
杆状病毒基因组十分庞大,不能直接对其进行操作插入外源基因,因此需要通过中间转染载体而获得重组杆状病毒。经过十多年来研究者们的不断探索,已构建出用于表达不同基因产物的各种转移载体。这些转移载体的共同特征是[3]: ①在一个基础质粒(如pUC系列)中插入一个多角体蛋白基因启动子(或p10基因启动子
经典电泳色谱仪各分离模式性能特点
经典电泳色谱仪分离模式有自由界面电泳、纸电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-PAGE电泳、琼脂糖凝胶电泳、等电聚焦电泳和等速电泳等。经典电泳仪由于受到焦耳热的限制,只能在低电场强度下进行电泳,分离时间长,分离效率低。一、自由界面电泳: 1、原理:溶液在U型管中,根据样品各组分泳动
传统电泳色谱仪分离模式
传统电泳色谱仪分离模式有自由界面电泳、纸电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS-PAGE电泳、琼脂糖凝胶电泳、等电聚焦电泳和等速电泳等。一、自由界面电泳:1、原理:溶液在U型管中,根据样品各组分泳动速度的不同进行分离。2、特点:没有载体,对流比较严重,组分不能完全分离,成分相互重叠,检
聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂糖凝胶电泳的异同
DNA电泳一般使用的都是琼脂糖凝胶电泳,电泳的驱动力靠DNA骨架本身的负电荷。聚丙烯酰氨(PAGE)凝胶电泳用于蛋白质与寡糖核苷酸的分离。电泳的驱动力靠与蛋白质结合的SDS上所携带的负电荷。蛋白质电泳(一般指SDS-PAGE)根据蛋白分子量亚基的不同而分离蛋白。蛋白质亚基的电泳迁移率主要取决于亚基分
琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳实验原理
聚丙烯酰胺凝胶电泳,普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大适用于分离同工酶及其亚型,大分子核酸等应用较广。琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA段。琼脂糖通常用水平装置在强度和
琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳迁移速率的影响因素
琼脂糖主要在DNA制备电泳中作为一种固体支持基质,其密度取决于琼脂糖的浓度。在电场中,在中性pH值下带负电荷的DNA向阳极迁移,其迁移速率由下列多种因素决定:(1)DNA的分子大小线状双链DNA分子在一定浓度琼脂糖凝胶中的迁移速率与DNA分子量对数成反比,分子越大则所受阻力越大,也越难于在凝胶孔隙中
气相色谱仪的载体
气相色谱仪的载体是一种化学惰性的固体颗粒,提供一个承担固定液的惰性表面,使固定液以薄膜状态均匀分布在其表面上。一、对一般载体的要求:1、比表面积大,孔穴结构好。2、表面没有吸附性能或很弱。3、不与被分离物质和固定液发生化学反应。4、热稳定性好,粒度均匀,有一定机械强度等。二、载体类型:载体可分为硅藻
凝胶色谱仪载体的要求
载体是凝胶色谱仪产生分离作用的关键,要求如下:一、良好的化学稳定性和热稳定性。二、有一定的机械强度。三、不易变形。四、流动阻力小。五、对样品没有吸附作用。六、粒度小,均匀,堆积紧密。七、分离范围大。
关于λ类噬菌体载体的概述
构建λ噬菌体载体的基本原理是多余限制位点的删除,按照这一基本原理构建的λ噬菌体的派生载体,可以归纳成两种不同的类型:一种是插入型载体(insertionvectors),只具有一个可供外源DNA插入的克隆位点,另一种是替换型载体(rePlacementvectors),具有成对的克隆位点,在这两
概述腺病毒载体的作用机制
典型的腺病毒载体系统如:穿梭质粒pCA13/腺病毒基因组质粒pBHG11/包装细胞293细胞。pCA13/的HCMV IE启动子-多克隆位点-SV40 AN(poly A)构成外源基因的表达盒,该表达盒的插入使腺病毒E1基因缺失,但是保留其两端侧翼序列(左侧的1~3bp的ITR,右侧从3.5kb
LITMUS39载体载体载体的基本信息和质粒图谱
LITMUS39载体载体基本信息载体名称LITMUS39载体抗性Ampicillin载体长度2817 bp载体类型Basic Cloning Vectors载体来源Evans PD, Cook SN, Riggs PD, Noren CJ.拷贝数High copy number5'引物M13
气液填充柱色谱仪载体的选择原则和评价方法
气液填充柱色谱仪载体性能的优劣对样品的分离起着重要作用,实际工作中主要依据分离对象、固定液的性质及涂渍量、载体粒度等选择载体。1、分离对象:酸性样品,选用酸洗载体。碱性样品,选用碱性载体。高沸点组分,一般选用玻璃微球载体。强腐蚀性组分,应选用氟载体。2、固定液的性质及涂渍量:当固定液的涂渍量大于 5
气液填充柱色谱仪载体的选择原则和评价方法
气液填充柱色谱仪载体性能的优劣对样品的分离起着重要作用,实际工作中主要依据分离对象、固定液的性质及涂渍量、载体粒度等选择载体。1、分离对象:酸性样品,选用酸洗载体。碱性样品,选用碱性载体。高沸点组分,一般选用玻璃微球载体。强腐蚀性组分,应选用氟载体。2、固定液的性质及涂渍量:当固定液的涂渍量大于5%
凝胶色谱仪器对载体的要求
1. 良好的化学稳定性和热稳定性;2. 有一定的机械强度;3. 不易变形;4. 流动阻力小;5. 对试样没有吸附作用;6. 分离范围越大越好(取决于孔径分布)等;7. 载体的粒度愈小,愈均匀,堆积的愈紧密,色谱柱分离效率愈高。
琼脂糖凝胶电泳色谱仪分析技术
琼脂糖凝胶电泳色谱仪是以琼脂糖凝胶作为载体的电泳技术,广泛用于核酸研究,为DNA分子及其片段的分子量测定和DNA分子构象分析提供了重要手段。一、工作原理:琼脂糖凝胶电泳中,DNA分子的迁移率与其分子量的常用对数成反比。DNA分子构象对迁移率也有影响,迁移率为共价闭环DNA>直线DNA>开环双链DNA
琼脂糖凝胶电泳技术概述
一、琼脂糖凝胶的特点天然琼脂(agar)是一种多聚糖,主要由琼脂糖(agarose,约占80%)及琼脂胶(agaropectin)组成。琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷,而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象,加之硫酸根可与
聚丙烯酰胺凝胶电泳概述
聚丙烯酰胺凝胶电泳简称为PAGE(Polyacrylamide gel electrophoresis),是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术。聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺聚合而成,聚合过程由自由基催化完成。催化聚合的常用方法有两种:化学聚合法和光聚合法。化学聚合以过
琼脂和琼脂糖的区别
1、本质不一样琼脂:是植物胶的一种,常用海产的麒麟菜、石花菜、江蓠等制成,为无色、无固定形状的固体,溶于热水。琼脂糖:琼脂糖:是线性的多聚物,基本结构是1,3连结的β-D-半乳糖和1,4连结的3,6-内醚-L-半乳糖交替连接起来的长链。琼脂果胶是由许多更小的分子组成的异质混合物。2、用途不一样琼脂:
概述酰基载体蛋白的异构体
绝大多数植物都具有几种ACP异构体。它们或是组成型表达的,或是组织特异性表达的。有科学家指出拟南芥至少具有5种质体型ACP和1种线粒体型ACP。其中ACP1在叶、根、种子中表达,但在种子中的表达远比在叶中和根中强,ACP2和ACP3在所有的组织中都表达,即属于组成型表达的。ACP4主要存在于叶片
概述λ噬菌体载体的主要用途
利用λ噬菌体作载体,主要是将外来目的DNA替代或插入中段序列,使其随左右臂一起包装成噬菌体,去感染大肠杆菌,并随噬菌体的溶菌繁殖而繁殖。现在广泛使用的λ噬菌体载体也是已作过许多人工改造的,主要的改造是: ①设计去除λDNA上的一些限制性酶切点。这是因为λDNA较大,序列中的限制性酶切点过多,妨
传统电泳仪性能特点归纳
电泳是电解质中带电粒子在电场作用下,以不同的速度向电荷相反方向迁移的现象。利用电泳现象对化学和生物化学组分进行分离的仪器称为电泳仪。从20世纪30~40年代起,相继发展了多种基于抗对流载体的电泳仪。传统电泳仪由于受到焦耳热的限制,只能在低电场强度下进行电泳,分离时间长,分离效率低。
传统电泳仪性能特点归纳
电泳是电解质中带电粒子在电场作用下,以不同的速度向电荷相反方向迁移的现象。利用电泳现象对化学和生物化学组分进行分离的仪器称为电泳仪。从20世纪30~40年代起,相继发展了多种基于抗对流载体的电泳仪。传统电泳仪由于受到焦耳热的限制,只能在低电场强度下进行电泳,分离时间长,分离效率低。传统电泳根据有无载
传统电泳仪性能特点归纳
传统电泳仪性能特点归纳 电泳是电解质中带电粒子在电场作用下,以不同的速度向电荷相反方向迁移的现象。利用电泳现象对化学和生物化学组分进行分离的仪器称为电泳仪。从20世纪30~40年代起,相继发展了多种基于抗对流载体的电泳仪。传统电泳仪由于受到焦耳热的限制,只能在低电场强度下进行电泳,分离
气相色谱仪产品概述和使用说明
一、按仪器使用说明书的规程操作 这一点主要是针对新购置和安装的仪器,不仅要清点零部件与备件是否齐全,更要检查说明书是否齐全,一定要妥善保管这些资料,以备日后查阅。在独立操作仪器前,一定要认真阅读有关使用说明书,并且严格按规程操作。这是做好仪器分析的前提,而且当仪器出现问题时也方便与厂商沟通。特
聚丙烯酰胺凝胶电泳与琼脂糖凝胶电泳的区别
聚丙烯酰胺凝胶电泳与琼脂糖凝胶电泳的区别为:支持介质不同、用途不同、优势不同。一、支持介质不同1、聚丙烯酰胺凝胶电泳:是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术2、琼脂糖凝胶电泳:是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法二、用途不同1、聚丙烯酰胺凝胶电泳:用于分离蛋白质和寡核苷酸2、琼脂糖凝胶