关于λ类噬菌体载体的概述
构建λ噬菌体载体的基本原理是多余限制位点的删除，按照这一基本原理构建的λ噬菌体的派生载体，可以归纳成两种不同的类型：一种是插入型载体（insertionvectors），只具有一个可供外源DNA插入的克隆位点，另一种是替换型载体（rePlacementvectors），具有成对的克隆位点，在这两个位点之间的人DNA区段可以被外源插入的DNA片段所取代。 在基因克隆中的二者的用途不尽相同。插入型载体只能承受较小分子量（一般在10kb以内）的外源DNA片段的插入，广泛应用于cDNA及小片段DNA的克隆。而替换型载体则可承受较大分子量的外源DNA片段的插入，所以适用于克隆高等真核生物的染色体DNA。......阅读全文
关于λ类噬菌体载体的概述
构建λ噬菌体载体的基本原理是多余限制位点的删除，按照这一基本原理构建的λ噬菌体的派生载体，可以归纳成两种不同的类型：一种是插入型载体（insertionvectors），只具有一个可供外源DNA插入的克隆位点，另一种是替换型载体（rePlacementvectors），具有成对的克隆位点，在这两
关于替换型λ类噬菌体载体的简介
替换型载体又叫做取代型载体（substitutionvector），是一类在λ噬菌体基础上改建的、在其中央部分有一个可以被外源插入的DNA分子所取代的DNA片段的克隆载体。 λNM781便是其中的一个代表。在这个替换型载体中，可取代的EcoRI片段，编码有一个supE基因（大肠杆菌突变体tRN
关于插入型λ类噬菌体载体的简介
外源的DNA克隆到插入型的λ载体分子上，会使噬菌体的某种生物功能丧失效力，即所谓的插入失活效应。插入型的λ载体又可以分为免疫功能失活的（inactivatiortofimmunityfunction）和大肠杆菌β-半乳糖苷酶失活的（inactlvatlonofE．coliβ-galactosid
概述λ噬菌体载体的主要用途
利用λ噬菌体作载体，主要是将外来目的DNA替代或插入中段序列，使其随左右臂一起包装成噬菌体，去感染大肠杆菌，并随噬菌体的溶菌繁殖而繁殖。现在广泛使用的λ噬菌体载体也是已作过许多人工改造的，主要的改造是： ①设计去除λDNA上的一些限制性酶切点。这是因为λDNA较大，序列中的限制性酶切点过多，妨
关于M13噬菌体载体的基本介绍
M13噬菌体是一类特异的雄性大肠埃希菌噬菌体，基因组为一长度6.4kb的且彼此同源性很高的单链闭环DNA分子。只感染雄性大肠埃希菌，但M13噬菌体DNA可以转传导进入雌性大肠埃希菌。M13子代噬菌体通过细胞壁挤出，并不杀死细菌，但细菌生长速度缓慢。 该类噬菌体作为克隆载体，可以通过质粒提取技术
l噬菌体载体的类型
插入型 （Insertion vectors ）这种载体仅仅有一个可供外源DNA插入的克隆位点。如：λgt10 、 λgt11克隆能力小，不到10kb置换型 （Replacement vectors）这种载体具有两个对应的酶切克隆位点，在两个位点之间的λDNA区段是λ噬菌体的非必需序列，可以被外源插
λ噬菌体的载体表达实验
实验材料 表达载体试剂、试剂盒 SDSLB仪器、耗材 培养箱分光光度计离心机实验步骤 1. 将表达载体转化携有温度敏感突变的抑制基因的大肠杆菌溶源菌。转化物涂布于LB/抗生素平皿上，32℃下温育。2. 于抗生素培养基中，32℃培养转化菌。 3. 以≥1：20的比例将过夜培养物稀释往新鲜的LB/
λ噬菌体的载体表达实验
基本方案1 基本方案2 实验材料 表达载体 试剂、试剂盒
噬菌体的概述
噬菌体(bacteriophage, phage)是感染细菌、真菌、藻类 、放线菌或螺旋体等微生物的病毒的总称，因部分能引起宿主菌的裂解，故称为噬菌体。本世纪初在葡萄球菌和志贺菌中首先发现。作为病毒的一种，噬菌体具有病毒的一些特性：个体微小；不具有完整细胞结构；只含有单一核酸。可视为一种“捕食”
λ噬菌体的载体表达实验1
pSKF是利用了λ噬菌体的调节信号的pBR222衍生质粒。λ噬菌体阻遏蛋白cI 可完全抑制PL。启动子的转录，使得含PL启动子的质粒可稳定存在于宿主菌中。 实验材料 表达载体 试剂、试剂盒 SDSLB 仪器、耗材 培养箱分光光度计离心机 实验步骤
λ噬菌体的载体表达实验2
实验材料 表达载体 试剂、试剂盒 SDSLB 仪器、耗材 培养箱分光光度计离心机 实验步骤 1. 将表达载体转化一种复制缺陷型的大肠杆菌cI+溶源菌。转化物涂布于LB/抗生素平皿上并于37℃下温育。 2. 在LB/抗生素培养基中，37℃过夜
M13噬菌体载体的克隆
实验方法原理 虽然理论上 M13 重组噬菌体所能携带的外源 DNA 片段没有限制，但实际上是有限的：长片段的外源 DNA 比短片段的更易发生缺失和重排。因此如果可能，最好克隆至 M13 噬菌体的 DNA 片段不要大于 1000 碱基。而且，当用“正向”或“反向”通用测序引物进行 DNA
构建λ噬菌体载体的基本途径介绍
构建λ噬菌体载体的基本途径如下： ①抹去某种限制性内切酶在λDNA分子上的一些识别序列,只在非必需区保留1～2个识别序列； ②用合适的限制性内切酶切去部分非必需区,但是由此构建的λDNA载体不应小于38kb； ③在λDNA分子的合适区域插入可供选择的标记基因。值得指出的是,没有适用于克隆所
M13噬菌体载体的克隆
实验方法原理 虽然理论上 M13 重组噬菌体所能携带的外源 DNA 片段没有限制，但实际上是有限的：长片段的外源 DNA 比短片段的更易发生缺失和重排。因此如果可能，最好克隆至 M13 噬菌体的 DNA 片段不要大于 1000 碱基。
M13噬菌体载体的克隆
虽然理论上 M13 重组噬菌体所能携带的外源 DNA 片段没有限制，但实际上是有限的：长片段的外源 DNA 比短片段的更易发生缺失和重排。因此如果可能，最好克隆至 M13 噬菌体的 DNA 片段不要大于 1000 碱基。而且，当用“正向”或“反向”通用测序引物进行 DNA 测序时，大片段的中心区域可
M13噬菌体载体的构建
在IS区内插入LacZ基因 ⑵在标记基因区内组装MCS区段所以能通过a互补在X-Gal/ IPTG平板上识别重组体。这类载体包括了 M13mp8、9 和 M13mp18 、 19等这类载体的突出优点在于其既可以提供单链DNA，也可以提供双链的DNA。其最大的不足在于插入大的DNA片段后表现不稳定，在
病毒和噬菌体载体的基本介绍
病毒主要有DNA(或RNA)和外壳蛋白组成,经包装后成为病毒颗粒。通过感染,病毒颗粒进入宿主细胞,利用宿主细胞的合成系统进行DNA(或RNA)复制和壳蛋白的合成,实现病毒颗粒的增殖。把感染细菌的病毒专门称为噬菌体,由此构建的克隆载体则称为噬菌体克隆载体。 噬菌体作为载体,可插入长10～20kb
M13噬菌体衍生载体的制备实验——载体衍生法
M13噬菌体是一种丝状噬菌体，感染宿主后不裂解细菌细胞，只利用细胞内物质完成自身增殖，组装成完整病毒颗粒后被宿主细胞分泌而出，宿主细胞仍能继续生长分裂。为分子生物学中理想的质粒载体。基因间隔区的有些核苷酸序列即使发生突变、缺失活插入外源DNA片段，也不会影响M13DNA的复制，这为M13DNA构建克
关于胰岛细胞类癌的基本概述
疾病名称：胰岛细胞类癌 英文名称：Carcinoid 药物疗法：甲基麦角酸丁醇酰胺；methysergide；赛庚啶；cyproheptadine；对氯苯丙氨酸；parachlophenylalanine；甲基多巴；methylodpa；生长抑素胰岛细胞类癌（Carcinoid）是起源于EC
M13噬菌体衍生载体的制备实验
实验材料 质粒试剂、试剂盒 YT培养基仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 1. 将来自一个单菌落的过夜培荞新鲜菌液按1 ：50稀释，在含有适当抗生素的2×YT培养液（1~5 ml）中，于37℃培养至OD600=0.1。2. 按1，10，20，50 MOI感染细胞，于37℃剧烈振荡下培养4.
M13噬菌体衍生载体的制备实验
载体衍生法 实验材料 质粒 试剂、试剂盒
概述噬菌体的基因重组
历史：1936年F. M. Burnet发表了噬菌体能产生突变体，其噬菌斑的外形和野生型的有明显区别，可惜的未能引起重视，以致噬菌体遗传学延迟了十年才得以建立。 1946年第11届冷泉港学术讨论会上，在宣布一基因一酶学说的胜利，及Ledernerg、Tatum细菌杂交实验报告的同时，Hersh
概述λ噬菌体的整合和转导噬菌体的形成机制
λ噬菌体的整合和转导噬菌体的形成机制首先由A·坎贝尔所推测，以后经实验证明。 当用λ噬菌体转导发酵乳糖的基因时，大约10^6 被感染的细菌中出现一个转导子。这一事实说明大约10^6 噬菌体中只有一个带有发酵乳糖的基因，这是低频转导。当λ噬菌体整合到寄主细胞后，带有发酵乳糖基因的λ噬菌体也整合到
筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验
在典型的免疫筛选实验中，λ噬菌体表达载体构建的文库应铺在不含异丙基硫代-β-D-半乳糖苷（IPTG) 的大肠杆菌菌株的平板上。诱导物的缺少保证了噬菌斑顺利形成前不产生对宿主有毒性的融合蛋白，2~4 h 后，将平板从 42°C 移到 37°C 以稳定温度敏感型的所有融合蛋白。本实验来源于分子克隆实验指
筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验
试剂、试剂盒 封闭缓冲液 氯仿 IPTG 抗原-抗体复合物检测试剂 SM TNT 缓冲液 洗涤缓冲液 放射
P1噬菌体的概述
温和噬菌，例如P1，有能力在之内存在 细菌 细胞他们传染用二别的方法。 在 溶原性P1可能在一个细菌细胞之内存在作为a prophage因为它存在 复制用主人 染色体并且不导致细胞死亡。 二者择一地，在它 细胞溶解阶段， P1可能促进细胞 病势渐退在成长期间造成寄主细胞死亡。 在溶原性期间新的噬
λ噬菌体载体DNA的碱性磷酸酶处理实验
λ 噬菌体两臂内部末端 5'-磷酸基团的去除，能有效防止自连和减少非重组噬菌体的背景。当使用含单一克隆位点的插入型载体（如 λgt10、λgt11 和 λORF8）或使用虽含多克隆位点但用单一酶切割的插入型载体（如 λgt18-23 和 λZAP) 时，本方法可被用于抑制非重组子背景。本实验
筛选构建于λ噬菌体载体的表达文库实验（一）
试剂、试剂盒 封闭缓冲液氯仿IPTG抗原-抗体复合物检测试剂SMTNT 缓冲液洗涤缓冲液放射性碘标记第二抗体第一抗体LB 琼脂板LB 顶层琼脂板硝酸纤维素滤膜λ噬菌体表达文库E.coli仪器、耗材 预设 42°C 的空气培养箱培养管平头镊子装有防水黑墨水（印度墨水）并带有 18 号针头的注射器实验步
λ噬菌体载体DNA的碱性磷酸酶处理实验
实验方法原理 λ 噬菌体两臂内部末端 5'-磷酸基团的去除，能有效防止自连和减少非重组噬菌体的背景。当使用含单一克隆位点的插入型载体（如 λgt10、λgt11 和 λORF8）或使用虽含多克隆位点但用单一酶切割的插入型载体（如
λ噬菌体载体DNA的碱性磷酸酶处理实验
实验方法原理 λ 噬菌体两臂内部末端 5'-磷酸基团的去除，能有效防止自连和减少非重组噬菌体的背景。当使用含单一克隆位点的插入型载体（如 λgt10、λgt11 和 λORF8）或使用虽含多克隆位点但用单一酶切割的插入型载体（如 λgt18-23 和 λZAP) 时，本方法可被用于抑