如何从细胞和组织提取物中有效分离和富集K48多聚泛素
泛素（Ubiquitin，Ub）对蛋白质的翻译后修饰，对它们的区室化，降解和功能产生了深远的影响。单个Ub与靶蛋白的结合被称为单泛素化，另外的Ub部分可以与该初始Ub缀合，形成多聚泛素（polyUb）链。这些polyUb链通过Ub的C末端与靶蛋白的赖氨酸之间形成异肽键而连接。PolyUb链本身通过各个单体Ub单元之间的类似缀合机制形成，并且可以通过Ub中存在的所有赖氨酸（K6，K11，K27，K29，K33，K48和K63）连接。两种表征的最充分的多泛素化形式是通过连接在赖氨酸48（K48）或赖氨酸63（K63）上发生的。K48连接多聚泛素化最常见的后果是蛋白酶体介导的降解，而K63连接的多泛素化修饰与其他细胞过程有关，DNA损伤反应的调节，胞内分选，错误折叠/聚集蛋白的自噬和神经变性。其它赖氨酸的多聚泛素蛋白连接尚不显著，其生理作用仍然大部分未知。 什么是TUBE？TUBE（Tandem Ubiquitin Bind......阅读全文
单细胞分离和转移最新用法—单个细胞级别的分离和转移
在当代生物学与医学的研究中，对单个细胞的分离一直有着很高的需求。然而传统手段往往需要将大量细胞悬浮后进行分选接种。这类方法不仅费时费力，而且细胞活力也会受到影响。本篇报道中Guillaume使用FluidFM BOT建立了一种非常简易、快速的新手段。 单细胞分离有哪些优势？由于蛋白和基因的随机表达性
从组织培养细胞中制备粗微体实验
实验材料 细胞 试剂、试剂盒 环己酰亚胺 匀浆缓冲液
从组织培养细胞中制备粗微体实验
实验材料细胞试剂、试剂盒环己酰亚胺匀浆缓冲液仪器、耗材培养皿实验步骤1. 培养基中加入环己酰亚胺（溶于蒸馏水，贮存液浓度 0.1 mol/L，-20℃ 保存。如果不溶，试着加热到 40℃ 以帮助溶解）（终浓度 10 μmol/L)，37℃ 保温 5~10 分钟。2. 培养皿从 37℃ 转移到冷室，立
从组织培养细胞中制备粗微体实验
实验材料细胞 试剂、试剂盒环己酰亚胺 匀浆缓冲液
细胞核连缀分析实验_从组织中制备细胞核
实验材料动物组织试剂、试剂盒PBS蔗糖仪器、耗材电动匀浆器特氟隆研杵实验步骤一、用超速离心法从组织中分离细胞核1. 切下动物组织，放入置于冰上的平皿中，用冰冷的 PBS 冲洗。2. 加少量蔗糖Ⅰ溶液，用剪刀或剃须刀片将组织切碎，转入一个干净试管中，加蔗糖Ⅰ溶液至终体积为每克组织 10 ml。3. 用
植物组织和细胞显微化学染色_检测植物细胞中核酸方法
实验步骤(1)脱氧核糖核酸：孚尔根染色法是检定细胞中 DNA 的一种常用方法，主要染色液为希夫试剂。切片材料加入蒸馏水后，在盐酸 (1 mol/L) 中 60℃下保温 5-15 min, 转入室温的盐酸中1min, 蒸馏水清洗，希夫试剂染色 1-5 h, 漂洗液中漂洗 3 次，每次 2-10min,
中间丝的分离方法实验——从组织中分离中间丝
实验材料牛舌试剂、试剂盒解聚缓冲液组装缓冲液匀浆缓冲液抽提缓冲液柱缓冲液PEM 缓冲液仪器、耗材离心机实验步骤一、从牛舌上皮分离角蛋白中间丝1. 从当地屠宰场拿到新鲜牛舌。一条舌头通常可以产出几十毫克纯化了的角蛋白中间丝。2. 用刀片切刮，把舌中的肌肉和黏膜分开。舌黏膜片（大约 1cmx1 cm )
分离核仁实验—从人肝脏或胎盘组织中分离核仁
实验材料组织试剂、试剂盒NKM仪器、耗材粗孔滤纸Teflon-玻璃匀浆器实验步骤1. 准备溶液：NKM：0.13 mol/L NaCl，5 mmol/L KCl，8 mmol/L 乙酸镁2.2 mol/L 蔗糖，10 mmol/L MgCl20.88 mol/L 蔗糖0.34 mol/L 蔗糖，含
新鲜组织分离原代细胞
新鲜手术取得或冻存的组织于37 ℃ 快速复温，原代细胞培养工作液清洗3次，尽量修剪去除纤维组织，将组织块剪成约1 mm3大小的小块，弯头吸管吸取组织块均匀种植于75 cm2 培养瓶瓶底，瓶内加入少量原代细胞培养工作液，小心翻转培养瓶使组织块黏附于瓶底，置于37 ℃、5% CO2培养箱中培养6-8
SD大鼠神经视网膜组织分离和鉴定
实验概要本研究对SD大鼠神经视网膜进行分离，并用组织学和透射电镜方法鉴定所分离的组织。主要试剂1%戊巴比妥钠，液氮，HE染色剂，4%多聚甲醛，二甲苯，苏木素-伊红，2.5%戊二醛，0.1mol/L磷酸缓冲液，1%饿酸，丙酮，环氧树脂618，醋酸铀，枸椽酸铅主要设备解剖显微镜，冻存管，光镜，LKB超薄
从源头保障药品安全性和有效性
真实、规范、完整的临床试验，是药品安全性和有效性的源头保障。如果临床试验数据存在问题，不仅给老百姓用药安全带来隐患，也严重影响我国医药产业的健康发展。7月22日以来，食品药品监管总局开展药物临床试验数据自查核查工作，11月起组织力量分两批对真实性存在疑点的部分生物等效性试验项目进行核查，发现有2
组织和细胞RNA的制备
一、 组织和细胞总RNA提取：异硫氰酸胍法（一）试剂准备1．CSB缓冲液：42mM柠檬酸钠；0.83% N-lauryl sarcosine(十二烷基，N甲基甘氨酸钠)；0.2 mM β-巯基乙醇。2．变性液：异硫氰酸胍（终浓度 4 M）25g、CSB缓冲液 33ml，混合直至完全溶解，可在65℃助
植物细胞和组织的类型
植物细胞与未分化的分生组织细胞（类似于动物的干细胞）分化、形成根、茎、叶、花和生殖结构的主要细胞和组织类别，每种细胞和组织可能由几种细胞类型组成。薄壁组织薄壁细胞是活细胞，其功能范围从储存和支持到光合作用（叶肉细胞）和韧皮部负载（转移细胞）。除了木质部和韧皮部的维管束外，叶片主要由薄壁组织组成。某些
组织和细胞的固定方法
组织和细胞的固定方法 固定 的目的是用人为的方法尽可能使组织细胞的形态结构和化学成分保持生活状态，防止组织细胞死后发生自溶和组织腐败。固定还能增加组织块硬度，使其更容易切片，使不同的结构更容易染色。 固定方法有物理固定和化学固定两类，物理固定可采用空气干燥（血涂片）、骤冷（在液氮中迅速冷冻）或微波
组织和细胞的固定方法
组织和细胞的固定方法 固定 的目的是用人为的方法尽可能使组织细胞的形态结构和化学成分保持生活状态，防止组织细胞死后发生自溶和组织腐败。固定还能增加组织块硬度，使其更容易切片，使不同的结构更容易染色。 固定方法有物理固定和化学固定两类，物理固定可采用空气干燥（血涂片）、骤冷（在液氮中迅速冷冻）或微波固
从脐静脉分离干细胞
试剂和材料：1. 培养基：完全LG-DMEM：含2mmol/L的左旋谷氨酰胺的低糖DMEM，添加10%热灭活胎牛血清，100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素；2. PBSA；3. 胰蛋白酶，0.05%，含EDTA；4. 胶原酶A，0.1%用PBSA配制；5. 培养瓶；6. 导管；实验方法：1.
巨噬细胞的分离和纯化
巨噬细胞的分离1）从小鼠、豚鼠或家兔腹腔中分离巨噬细胞1．取6周左右的小鼠（或600克左右的豚鼠，或3公斤左右的家兔），剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml（豚鼠20ml，家兔200ml）无菌的液体石蜡或巯基乙酸肉汤或4％淀粉肉汤。3～4天以后收集腹腔细胞。2．如要收集腹腔静置巨噬细胞，不注射刺激物，
从骨骼肌分离和培养单肌纤维
实验方法原理研磨用胶原蛋白处理的整块骨骼肌，以分散为单肌纤维。在 Matrigel 上培养单肌纤维，然后收集迁出的细胞。实验材料MatrigelDMEML-谷氨酰胺Ⅰ型胶原蛋白试剂、试剂盒青霉素和链霉素混合液鸡胚提取液马血清胎牛血清接种培养液增殖培养液仪器、耗材Petri培养皿改良Pasteur吸管
从骨骼肌分离和培养单肌纤维
实验方法原理研磨用胶原蛋白处理的整块骨骼肌，以分散为单肌纤维。在 Matrigel 上培养单肌纤维，然后收集迁出的细胞。实验材料Matrigel DMEM
从骨骼肌分离和培养单肌纤维
实验方法原理 研磨用胶原蛋白处理的整块骨骼肌，以分散为单肌纤维。在 Matrigel 上培养单肌纤维，然后收集迁出的细胞。实验材料 MatrigelDMEM L-谷氨酰胺Ⅰ型胶原蛋白试剂、试剂盒 青霉素和链霉素混合液鸡胚提取液马血清胎牛血清接种培养液增殖培养液仪器、耗材 Petri培养皿改良Past
如何有效分离提取cfDNA用于检测？
说起肿瘤、癌症，已经不再像多年前一样让谈癌色变，但仍旧为人们所恐惧。成功治疗肿瘤还是以早发现早治疗为主。那么尽早检测和发现肿瘤便是首当其冲的核心。液体活检(Liquid biopsy)的检测方法，可以捕获到进入血液的其它细胞或DNA，从而替代了疾病的诊断，例如肿瘤。最近比较火热的液体活检有：cf
山东大学医学院《自然通讯》发表免疫学新成果
生物通报道：NLRP3炎性体在宿主防御病原微生物的过程中，发挥不可或缺的作用，它的异常可能导致多种炎症性疾病。NLRP3蛋白表达是炎性体激活的一个决定步骤，因此它的表达必须严格控制，以维持免疫稳态和避免有害的影响。然而，NLRP3表达是如何被调控的，仍然是未知的。12月8日在《Nature Co
人体组织细胞从组织液中吸收甘油的量主要取决
甘油进出细胞是通过自由扩散的方式，是顺浓度梯度运输的过程，既不需要载体蛋白质的协助，也不消耗细胞的能量。此类题考查一些常见物质进出膜的方式，要加以记忆，如自由扩散：水、氧气、二氧化碳、甘油、苯、乙醇、乙二醇等；协助扩散：葡萄糖（进入红细胞）；主动运输比较多，可重点记忆前两者。
如何有效处理总氮和氨氮
1.想要直接整体处理的话,可以直接考虑工艺建造,但是整体的处理时间和成本会比较高。2.利用某些生物菌种也能对总氮和氨氮的降解起到一定的作用,但是日常的维护需求比较大,一般需要长期安排技术人员在现场操作。3.先测试总氮和氨氮的浓度,如果浓度差值不大,建议直接用氨氮去除剂处理,这样氨氮处理下来了,总氮也
从动物脾脏组织分离淋巴细胞应如何操作
取动物脾脏组织时,应注意取材的无菌操作.分离出脾脏组织,研磨后过200目筛网,保证所分离的细胞为单个细胞悬液.获得细胞悬液后应该使用相应的淋巴细胞分离液进一步分离单个核细胞.
细胞和亚细胞提取物的制备实验2
方案2 用于免疫沉淀的培养细胞的裂解实验实验方法原理培养的动物细胞一般使用温和去垢剂来裂解。如果低浓度的去垢剂就能引起细胞的充分裂解（如 l%NP-40 或 l%Triton X-100)，那么这对目标蛋白的影响可能比方案 1 中所讨论的匀浆方法更温和。去垢剂的选择必须根据免疫沉淀所用的抗体的识别表
细胞和亚细胞提取物的制备实验9
实验方法原理差异去垢剂分离法（differential detergent fractionation, DDF) 包括使用一系列含不同去垢剂的 PIPES 缓冲液对细胞进行连续抽提，首先是毛地黄皂苷，其次是 Triton, 最后是 Tween/脱氧胆酸盐。这些步骤产生 4 种在生化和电泳上相异的组
细胞和亚细胞提取物的制备实验8
方案8 酵母提取物的制备实验实验方法原理由于酵母的经典遗传分析和分子遗传分析都已经研究得非常透彻，因而对于纯化重组动物蛋白来说，酵母是一个很有吸引力的表达体系。关于培养和收集酵母细胞的讨论，尤其是芽殖酵母，参见 Jazwinski(1990)。酵母细胞的裂解方法有很多种，包括自溶、压力破碎（如 Fr
细胞和亚细胞提取物的制备实验7
方案7 从包含体中溶解大肠杆菌重组蛋白实验实验方法原理由于分子克隆技术能够使细菌高水平表达蛋白，因此原核表达是一个非常便利的获得重组蛋白的系统。遗憾的是这些蛋白在细菌中易于聚合和沉淀，形成难溶解的包含体，因而很难纯化。非细菌蛋白的包含体尤其普遍。虽然没有一种可用于所有蛋白的普适方法，还是有许多策略适
细胞和亚细胞提取物的制备实验4
方案4 氮舱减压法裂解培养细胞实验实验方法原理通过来自增压舱中的氮气减压膨胀来破碎细胞是一种快速、有效的细胞和组织的匀浆方法，能释放完整的细胞器和制备细胞膜（Hunter and Commerford，1961)。该方法的原理很简单：细胞放在一个压力舱中，在高压下（约5500kPa，相当于800ps