大肠杆菌诱变处理与营养缺陷型筛选
【实验目的】1.了解应用物理、化学因素对细菌进行诱变的方法。2.初步掌握诱变产生营养缺陷型菌株的筛选与鉴定的技术。【实验原理】在以微生物为材料的遗传学研究中，用某些物理因素或化学因素处理细菌，可诱发基因突变。如果突变后丧失合成某一物质(如氨基酸、维生素、核苷酸等)的能力，不能在基本培养基上生长，必须补充某些物质才能生长，称为营养缺陷型。实验室获得营养缺陷型菌株通过经过以下几个步骤：诱变处理、突变型筛选、缺陷型检出，缺陷型鉴定。诱变处理首先要选择诱变剂，诱变剂可分为物理和化学两类。微生物诱变中最常用的物理诱变剂是紫外线。进行诱变处理时为了避免出现不纯的菌落，一般要求微生物呈单核的单细胞或单孢子的悬浮液，分布均匀。试验表明处于对数生长期的细菌对诱变剂的反应最灵敏。诱变处理必须选择合适的剂量，不同微生物的最适处理剂量不同，须经预备实验确定。物理诱变的相对剂量与三个因素有关：诱变源和处理微生物的距离、诱变源(紫外灯)功率、处理时间，往往......阅读全文
从包含体中溶解大肠杆菌重组蛋白实验
实验方法原理 分子克隆技术能够使细菌高水平表达蛋白，因此原核表达是一个非常便利的获得重组蛋白的系统。遗憾的是这些蛋白在细菌中易于聚合和沉淀，形成难溶解的包含体，因而很难纯化。非细菌蛋白的包含体尤其普遍。虽然没有一种可用于所有蛋白的普适方法，还是有许多策略适用于包含体蛋白的溶解。本方案描述的就是这些策
大肠杆菌的检测方法ATP－生物发光技术相关介绍
ATP 生物发光技术是近年来发展较快的微生物快速检测方法。细胞内源性的ATP含量可以反应活细胞的数量和活性。其化学反应如下：ATP+D-Luciferin+O2→Oxyluciferin+AMP+PPi+O2+Light 当细胞受损或死亡时，其ATP值迅速下降或消失，基于这一原理，检测细胞内的
从包含体中溶解大肠杆菌重组蛋白实验
基本方案 实验方法原理 分子克隆技术能够使细菌高水平表达蛋白，因此原核表达是一个非常便利的获得重组蛋白的系统。遗憾的是这些蛋白在细菌中易于聚合和沉淀，形成难溶
香港首现肠出血性大肠杆菌感染个案
早前源自德国的肠出血性大肠杆菌，在欧美多国肆虐，导致数十人死亡。香港日前首次在本地发现O124：H19产志贺毒素大肠杆菌的感染个案。专家指出，该病菌的毒性及杀伤力等同德国爆发的O104型产志贺毒素大肠杆菌。 密切接触者未现病征 香港卫生防护中心8月5日公布称，一名本身有长期病患的71
关于致病性大肠杆菌性肠炎的基本介绍
致病性大肠杆菌性肠炎潜伏期一般为2～5天。起病一般较慢，也可急性起病。有饮食不调、添加辅食不当等诱因。轻症不发热，主要症状为腹泻，大便每天3～5次，呈黄色蛋花样带奶瓣，量多。病情继续发展则出现发热、呕吐、食欲缺乏、腹胀、中毒性肠麻痹。在出现肠麻痹前腹泻加重，可出现黏液血便。成人患者常急性起病，有
简述致病性大肠杆菌性肠炎的发病机制
致病性大肠杆菌性肠炎比较肯定的致病性是它们对肠道表面具有黏附能力。病原菌经口进入小肠，在十二指肠、空肠、回肠上段生长繁殖，紧密黏附于肠上皮细胞表面，或嵌入肠上皮细胞表面的凹陷中，使黏膜呈特征性损伤，局部微绒毛萎缩，肠功能紊乱，甚至导致肠黏膜坏死、溃疡，出现腹泻。此外，EPEC尚可产生非洲绿猴细胞
外源基因在大肠杆菌中诱导表达与检测
原理目的基因被克隆到pET质粒载体上，受噬菌体T7强转录及翻译(可选择)信号控制；表达由宿主细胞提供的T7 RNA 聚合酶诱导。T7 RNA 聚合酶机制十分有效并具选择性：充分诱导时，几乎所有的细胞资源都用于表达目的蛋白；诱导表达后仅几个小时，目的蛋白通常可以占到细胞总蛋白的50%以上。在培养体
大肠杆菌基因型及遗传符号说明系列一
实验室的一般大肠杆菌拥有4288条基因，每条基因的长度约为950bp,基因间的平均间隔为118bp（基因Ⅷ）。E.coli基因组中还包含有许多插入序列，如λ-噬菌体片段和一些其他特殊组份的片段，这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的，由此表明了基因组具有它的可塑造性。利用大肠杆菌基因组
美国飞机饮用水被指验出大肠杆菌
乘坐飞机时，您是否留意过自己喝的水呢?最近一条关于美国航班饮用水检测出大肠杆菌的消息引发关注，“要想喝水只能喝瓶装水啦?”“机组人员不喝热水吗?”……随着这条消息在网上的扩散，也引发了网友诸多的疑问。北京青年报记者了解到，目前国内航班的饮水分为瓶装水和仓储水，仓储水在水箱加热后直接用来泡茶或咖啡
美国大肠杆菌O26爆发与面粉有关
2019年5月24日，美国疾病预防与控制中心（CDC）发布食品安全警报：大肠杆菌O26爆发与面粉有关。 据了解，2019年5月23日，ALDI与ADM Milling Co.联合召回了袋装5磅的Baker's Corner 通用面粉，因为它们可能被大肠杆菌污染。召回的面粉在以下州销售
全自动大肠杆菌快速测定仪主要特点
DST-酶底物法可以采用成品的培养基及试剂,操作方便,不需要确认试验;DST-酶底物法检测时间短,18～24h即可同时判断水样中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)的 MPN 值。在美国、欧洲及大部分亚洲国家广泛应用于水中总大肠杆菌、粪大肠菌群(耐热大肠菌群)及大肠埃希氏菌的检测,并通过美国 EPA《水与废水
大肠杆菌细胞的破碎和包涵体的制备实验
实验材料 过表达σ32 的大肠杆菌细胞株试剂、试剂盒 氯霉素氨苄青霉素异丙基硫代-β-D-半乳糖苷利福平LB 培养基SDS 样品缓冲液脱氧胆酸钠仪器、耗材 Oak Ridge 离心管带刻度的聚丙烯锥形离心管Tissue-TearorTM 匀浆器超声破碎器实验步骤 材料与设备过表达σ32 的大肠杆菌细
大肠杆菌细胞翻译起始复合物形成的过程
⑴核糖体30S小亚基附着于mRNA起始信号部位：原核生物中每一个mRNA都具有其核糖体结合位点，它是位于AUG上游8-13个核苷酸处的一个短片段叫做SD序列。这段序列正好与30S小亚基中的16S rRNA3’端一部分序列互补，因此SD序列也叫做核糖体结合序列，这种互补就意味着核糖体能选择mRNA上A
电转化法感受态大肠杆菌TGl的制备
[器材和试剂]●大肠杆菌TGl菌株(Stratagen)●37℃孵育箱(NewBrunswickScientmc)●Sorvatl RC5离心机(或同类型)，GS3转头(均在4℃预冷)●预冷的500m1聚丙烯离心管●2L有挡板锥形瓶●基本培养琼脂板[10 5g K2HP04、4．5gKH2P04、1
大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
一、实验原理 体外连接的重组DNA分子导入合适的宿主细胞中才能大量的进行复制、增殖和表达。研究发现，用含Ca2+ 的溶液处理大肠杆菌细胞会易于吸收外源DNA。大肠杆菌吸收外源DNA的过程被称为转化。细菌处于容易吸收外源DNA的状态称为感受态。用理化方法可以诱导细胞进入感受态，如电转化法、Ca
超声波破碎大肠杆菌温度升高解决方法
实验室常用超声波细胞破碎仪来破碎大肠杆菌，用于提取表达外源蛋白等试验，在超声波破碎大肠杆菌过程中常常温度探头测得大肠杆菌菌液中温度逐渐升高，有可能会致使热敏物质失活，该怎么解决呢？今天舜玛仪器来谈谈在超声波细胞破碎仪处理大肠杆菌过程中降低温度的解决措施。 超声波细胞破碎仪在处理大肠杆菌过程中，
大肠杆菌感受态细胞的制备及转化
[实验目的] 通过本实验，掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的方法和技术 [实验原理] 细菌处于容易吸收外源DNA 的状态叫感受态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。其原理是细菌处于0℃，CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。转化混合物中的DNA形成
关于肠致病性大肠杆菌的致病物质介绍
大肠杆菌具有很多毒力因子，包括内毒素，荚膜，〣型分泌系统，黏附素和外毒素等。（〣型分泌系统是指能向真核靶细胞内输送毒性基因产物的细菌效应系统。约由20余种蛋白质组成。） 黏附素 能使细菌紧密黏着在泌尿道和肠道的细胞上，避免因排尿时尿液的冲刷和肠道的蠕动作用而被排除。大肠杆菌黏附素的特点是具有高
大肠杆菌细胞翻译起始复合物形成的过程
⑴核糖体30S小亚基附着于mRNA起始信号部位：原核生物中每一个mRNA都具有其核糖体结合位点,它是位于AUG上游8-13个核苷酸处的一个短片段叫做SD序列。这段序列正好与30S小亚基中的16S rRNA3’端一部分序列互补,因此SD序列也叫做核糖体结合序列,这种互补就意味着核糖体能选择mRNA
大肠杆菌细胞的破碎和包涵体的制备实验
实验材料 过表达σ32 的大肠杆菌细胞株 试剂、试剂盒 氯霉素 氨苄青霉素 异丙基硫代-β-D-半
《科学》：大肠杆菌突变率比预想的高1000倍
葡萄牙科学家近日研究发现，大肠杆菌（Escherichia coli）有益突变发生的频率比之前预想的要高上1000倍之多。这将有助于解释为什么细菌能快速对抗生素产生抵抗性。相关论文发表在8月10日的《科学》杂志上。 领导该项研究的是葡萄牙古尔班基安科学研究所（Gulbenkian Science I
冻融对发酵用大肠杆菌甘油保存的影响
摘要:目的:探讨冻融对发酵用大肠杆菌甘油保存的影响.方法:将大肠杆菌用10%的甘油溶液制成菌悬液,分成3组,测定各组菌种的活菌数,同时置-20℃冷冻处理.3组分别被冻融处理1、2、3次.测定冻融处理后、冻存1年及2年各组的活菌数.结果:随着冻融次数的增加,冻融处理后,冻存1年及2年的活菌数均明显降低
除菌香皂并不除菌－大肠杆菌逍遥法外
美国密西根大学公共卫生学院的一个研究小组通过多年的研究发现，使用含有三氯生浓度在0.1—0.45克/100毫升之间的除菌香皂，其实并不比普通香皂更有效地减少细菌和防止传染疾病。这项研究成果发表在8月出版的《临床传染病》（Clinical Infectious Diseases）上。 三氯生是除菌香皂
关于肠出血性大肠杆菌的传播途径介绍
1. 通过食物传播O157H7大肠杆菌主要是通过污染食物而引起人的感染。O157H7大肠杆菌的致病能力和对胃酸的抵抗力均较强，对细胞的破坏性大。据专家估计100个菌就可使人发病。而1个汉堡包的牛肉馅里可含有1000个细菌，足以使人得病。在世界各地报告的肠出血性大肠杆菌感染爆发中，约有70%以上与
Inoue法制备大肠杆菌超级感受态细胞
实验步骤： 1、Inoculate from an overnight grown in LB.从培养过夜的LB平板上挑取单菌落 。2、Grow in 250 ml "SOB" at 18℃ until OD600 = 0.6.(0.3)接种于250ml SOB，18度培养至OD＝0.6。3、On
香港科技大学破解大肠杆菌素致癌机制
香港科技大学17日宣布，该校研究团队破解了人类体内大肠杆菌释放的“大肠杆菌素-645”引致大肠癌的机制，有助推动预防大肠癌的研究。 据科大研究人员介绍，虽然人类肠道中的大肠杆菌可以帮助消化食物和调节免疫系统，但它们产生的大肠杆菌素是一种基因毒性化合物，能破坏真核细胞中脱氧核糖核酸（DNA）的双
宜家再次陷食品安全风波蛋糕大肠杆菌超标
继上月底自产瑞典肉丸陷入马肉丑闻后，时隔不到半月，瑞典家居用品巨头宜家再次陷入食品安全问题风波。 根据上海检疫局的消息，在最新一轮的食品质量检查中，因大肠杆菌超标，目前已销毁由宜家进口的巧克力杏仁蛋糕总计1.872吨。同时被销毁的还有大量卡夫奶油芝士蛋糕和2.7吨雀巢
大肠杆菌和大肠埃希菌是否一样
不一样。1、性质不同：大肠杆菌是条件致病菌。大肠埃希菌是人体不可缺少单细胞生物，是人和动物肠道中的正常栖居菌。2、感染病菌不同：大肠杆菌的血清型能够引起人体或动物胃肠道感染，主要是由特定的菌毛抗原、致病性毒素等感染引起的，除胃肠道感染以外，还会引起尿道感染、关节炎、脑膜炎以及败血型感染等。大肠埃希菌
IPTG诱导大肠杆菌表达目标蛋白的作用原理是
用乳糖操纵子作为启动子进行蛋白质表达的时候,需要诱导物进行诱导(相当于点火),但乳糖可以被细胞利用掉,所以利用IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)在结构上与乳糖的相似性也可以将基因表达启动,但它不能被细胞利用掉,从而实现持续的表达.
韩国科学技术院利用大肠杆菌生产酪氨酸
韩国教育科学技术部日前宣布，韩国科学技术院(KAIST)生命科学工程系李相烨教授组成功研制出酪氨酸等化学物质,开发出利用新种大肠杆菌生产出治疗忧郁症和痴呆所需物质——酪氨酸的新方法。 该研究组以核糖核酸(RNA)技术，插入制造酪氨酸所需的基因(去除妨碍生产的基因)培养大肠杆菌。培养大肠菌的