特异性位点的DNA甲基化的检测方法

相关专题1 甲基化敏感性限制性内切酶 (methylation-sensitive restriction Endonuclease,MS-RE)-PCR/Southern法这种方法利用甲基化敏感性限制性内切酶 对甲基化区的不切割的特性,将DNA消化为不同大小的片段后再进行分析。常使用的甲基化敏感的限制性内切酶有HpaⅡ-MspⅠ(识别序列CCGG)和SmaⅠ-Xmal(CCCGGG)等。由于后者识别的碱基数相对较多,其碱基序列在体内出现的概率相对较低,所以以前者即HpaⅡ-MspⅠ更常用。其中HpaⅡ和MspⅠ均能识别CCGG序列,然而当序列中的胞嘧啶发生甲基化时,HpaⅡ不切割,利用HpaⅡ-MspⅠ的这种属性处理DNA,随后进行Southern或PCR扩增分离产物,明确甲基化状态]。这是一种经典的甲基化研究方法,其优点是:相对简单,成本低廉,甲基化位点明确,实验结果易解释;缺点是:1.由于CG不仅仅限于CCGG序列中,因此......阅读全文

消化道脂肪酶底物特异性

Ewa RogalskaS等(1990)研究了猪胰脂肪脂肪酶、兔胃脂肪酶和人胃脂肪酶对化学结构类似、但在同一甘油三酯分子中立体结构不同的酯键的立体选择性,结果表明两种胃脂肪酶对sn-3位具有立体选择性。如果由对映体过量百分率表示的话,人和兔胃脂肪酶对三辛酸甘油酯和三油精分别是54%、70%和74%、

pcr出现非特异性扩增原因分析

  PCR产物的电泳检测时间  一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。  假阴性,不出现扩增条带  PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。  模板:①模板中含有杂蛋白质

什么叫做dna的非特异性扩增

抗体有时会和非抗原结合,可能会因为非特异的蛋白-蛋白相互作用结合细胞内成分,因为疏水相互作用结合脂肪,也可能会结合一些细胞表面表达的抗体受体。比如说,IgG亚型的抗体会结合细胞表面的Fc受体,如CD16、CD32和CD64。理想条件下,各种类型的非特异性结合都可以通过蛋白(BSA、牛奶或动物血清)来

等位基因特异性PCR的工作原理

由于PCR过程中引物延伸是3'端开始的,所以3'末端的碱基对引物的延伸来说处于至关重要的位置。如果这个碱基与模板互补,则引物能从不间断延伸,PCR可以正常进行,得到特定长度扩增带。反之,则不能延伸。所以只要将与正常等位基因所不同的那个突变碱基安排在引物3'最末端,当用某一含突

简述特异性IgE抗体的临床意义

  异常结果:血清中过敏原特异性IgE水平仅能说明个体对已测过敏原的敏感性。但不能仅依靠检测血清中的过敏原特异性IgE水平,而必须结合临床病史和其它诊断手段才能确诊过敏症。  需要检查的人群:患者属过敏性体质,对过敏原特异性检测项不敏感。

组织特异性消失基因的定义和功能

中文名称组织特异性消失基因英文名称tissue-specific extinguisher;TSE定  义在体细胞杂交中杂种细胞失去的亲本细胞基因。一种在体细胞杂种中能对某些亲本细胞基因的转录起明显抑制作用的基因,其产物为依赖于环腺苷酸(cAMP)的蛋白激酶的调节亚基,通过环腺苷酸应答元件发挥作用。

前列腺特异性抗原(PSA)的应用

前列腺特异性抗原的应用一说前列腺特异性抗原,有些临床医生不是很了解,如果说PSA,对于绝大多数临床医生就不陌生了。可能PSA大多是与前列腺癌较多的联系起来,只要PSA一升高,很多人会怀疑如果这项高了是不是代表自己患上了前列腺癌,前列腺特异性抗原(PSA)是检测前列腺癌的重要方法,患者PSA水平异常升

非特异性免疫的功能及意义

  功能  发挥保护功能的几道屏障 首先是外围屏障。皮肤粘膜是机体第一道防线,包括:皮肤粘膜的机械阻挡作用和附属物(如纤毛)的清除作用;皮肤粘膜分泌物(如汗腺分泌的乳酸、胃粘膜分泌的胃酸等)的杀菌作用;体表和与外界相通的腔道中寄居的正常微生物丛对入侵微生物的拮抗作用等。其次是内部屏障。抗原物质一旦突

肿瘤检测羊胰腺特异性抗原(PaA)介绍

胰腺特异性抗原(PaA)介绍:  胰腺特异性抗原是胰腺腺泡内合成的一种糖蛋白,胰腺癌时可明显升高,其是诊断胰腺癌的一种较理想的参考指标。胰腺特异性抗原(PaA)正常值:  

特异性脱敏治疗方法的发展过程

1909年,Noon用自动免疫法治疗花粉性鼻炎获得成功,开创了免疫治疗新纪元。 经过半个多世纪的实践,免疫治疗显示了一定的临床效果,但是自从上世纪80年代起,由于英国发生了数例由于注射免疫治疗制剂而死亡的病例,导致有关政府机构下令全面禁止免疫治疗。1986年Scadding和Brostoff首次利用

关于甲基化特异性的PCR介绍

  用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到扩增片段,则说明该位点存在甲基化;反之,说明被检测的位点不存在甲基化。

Cell子刊:组织特异性的CRISPR载体

  细菌一直在与病毒或入侵核酸(质粒)进行斗争,为此它们演化出了多种防御机制。CRISPR/Cas适应性免疫系统就是其中之一。在CRISPR和Cas的帮助下,细菌可以经由小RNA分子的引导,靶标和沉默入侵者遗传信息的关键部分。  现在,CRISPR与Cas9的组合已经成为了一个通用工具,被用来对真核

简述梅毒特异性试验的临床意义

  梅毒特异性试验敏感性和特异性均高,一般用作确证试验。这种试验是检测血清中抗梅毒螺旋体IgG抗体,即使患者经过足够治疗,仍能长期存在,甚至终身不消失,血清反应仍持续存在阳性,因此,不能用于观察疗效。但对一期梅毒不如荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS试验)敏感。  梅毒特异性试验也存在生物学假

关于特异性IgE的基本信息介绍

  免疫球蛋白IgE是介导Ⅰ型变态反应的抗体,过敏患者的血清中存在具有变应原特异性的IgE,称之为特异性IgE。对牛奶过敏者有针对牛奶变应原的IgE;对蒿草花粉过敏者,有针对该花粉的IgE。过敏原进入机体诱导产生特异性IgE,IgE结合到肥大细胞和嗜碱性粒细胞,使机体进入对该过敏原特异致敏状态。当过

特异性脱敏治疗常采用的方法介绍

注射脱敏治疗过敏原注射脱敏治疗是指用过敏原提取物进行皮内注射。脱敏注射从小剂量开始,逐渐增加剂量,以增加对过敏原的耐受性。脱敏治疗一般至少需要2~3 年,长期的注射会带来一定痛苦。舌下含服脱敏治疗舌下含服脱敏治疗是将诱发过敏的物质(如尘螨活性蛋白)制成不同浓度的脱敏液,用患者能适应的小剂量每日给药(

巨噬细胞在特异性免疫中的影响

巨噬细胞是一种具多用途多功能的细胞。作为体内的“清道夫”,它们会去除体内那些坏掉死去的细胞以及其他废料。它们是众多个细胞中首个“呈递”抗原的,所以它其中有一个重要的功能就是启动一个免疫反应。另外,作为一个分泌细胞,单核细胞及巨噬细胞对于免疫反应的调整和炎症的发展尤为必需。这是因为它们会大量地产生出一

抗病毒的非特异性免疫

  抗病毒和抗细菌的非特异性免疫有许多相同之处,现将其特点给予补充。 巨噬细胞对阻止病毒感染和促进感染的恢复具有重要作用。血流中的单核细胞也能吞噬和清除病毒,中性粒细胞只能吞噬病毒,不能将其消灭,如果被吞噬的病毒不能消灭则可将病毒带到全身,引起播散。正常人血清中含有能抑制病毒感染的物质,称为病毒抑制

关于位点特异性重组的特点介绍

  ①这种交换是可逆的,原先存在的DNA顺序全部被保存下来,并无丢失;  ②噬菌体和细菌的DNA之间有一段很短的同源序列,重组交换必须通过其中的一个特定的核苷酸。这两个特点也就是位点特异性重组的共同特点。

ELISA中非特异性显色原因分析

【摘要】:影响ELISA中非特异性显色的原因很多,如试剂盒特异性、检验标本中含酶标记物的干扰物,操作过程中的问题。本文就这一原因作一简要分析,以便可以通过以上措施把非特异显色降至最低限度,从而提高检测的特异性,并得到更准确、可靠的实验结果。 【关键词】     ELISA     非特异性     

非特异性免疫的特点及功能

  特点  ①作用范围广。机体对入侵抗原物质的清除没有特异的选择性。  ②反应快。抗原物质一旦接触机体,立即遭到机体的排斥和清除。  ③有相对的稳定性。既不受入侵抗原物质的影响,也不因入侵抗原物质的强弱或次数而有所增减。但是,当机体受到共同抗原或佐剂的作用时,也可增强免疫的能力。  ④有遗传性。生物

关于抗原特异性免疫应答的过程介绍

  适应性免疫应答的过程非常复杂,可分为以下三个阶层:  (1)感应阶段(识别阶段)  指抗原提成细胞(APC)摄取、加工处理与提呈抗原和T细胞、B细胞通过TCR、BCR特异性识别抗原肽阶段。  (2)反应阶段(活化、增殖和分化阶段)  反应阶段是指T细胞、B细胞特异性识别、接受抗原刺激后活化、增殖

非特异性免疫的屏障结构介绍

  皮肤粘膜屏障:健康完整的皮肤和粘膜是阻止病原菌侵入的强有力屏障。汗腺分泌的乳酸,皮脂腺分泌的脂肪酸有一定抗菌作用。呼吸道和消化道粘膜有丰富的粘膜相关淋巴样组织和腺体,能分泌溶菌酶以及在胃酸、唾液、泪液等体液内均有SIgA等抗菌物质,表明粘膜屏障的重要性,已提出“粘膜免疫系统”的概念。血脑屏障:一

PCR实验的灵敏度和特异性

什么是PCR实验的灵敏度?灵敏度指的是PCR扩增反应能够检测到目的基因的zui小值。研究结果表明,影 响PCR扩增效率的因素,如模板的复杂程度与完整性、引物的纯度及其与模板的结合效率、反应温度、DNA聚合酶的热稳定性与扩增性能、反应缓冲液的离子组 成(主要指阳离子)、反应优化剂等等,都决定了PCR实

研究发现植物印迹基因有较强物种特异性

  记者日前从中科院昆明植物所获悉,该所刘爱忠研究组博士生徐伟利用典型双子叶胚乳型种子蓖麻,发展了崭新的研究体系,并鉴别出大量新颖的印迹基因。相关成果在线发表于《核酸研究》杂志。  据介绍,基因组印记是一种非常重要的表观遗传学现象。在配子或合子发育过程中, 来自亲本的等位基因或染色体发生差异性的表观

衣原体特异性抗原和抗体检测方法

1、材料 ①7—8d日龄的鸡胚,McCoY细胞或HL细胞。②荧光显微镜,CO2孵箱。 ③沙眼衣原体免疫荧光诊断试剂盒,吉姆萨染色液。 2、方法 (1)标本采集 ①沙眼病人眼结膜标本的采集。在10%丁卡因局部麻醉下,用无菌狭长盖玻片(0.5*2cm)刮取眼结膜上的滤泡组织,置于盛有1—2ml蔗糖磷酸盐

肿瘤特异性生长因子的注意事项

  检查前禁忌:停止服用肿瘤的治疗药物,以及停止进行肿瘤的放射治疗24小时。  检查时要求:保持血样纯度,几时提取血清样本。

非特异性免疫的主要功能

发挥保护功能的几道屏障 首先是外围屏障。皮肤粘膜是机体第一道防线,包括:皮肤粘膜的机械阻挡作用和附属物(如纤毛)的清除作用;皮肤粘膜分泌物(如汗腺分泌的乳酸、胃粘膜分泌的胃酸等)的杀菌作用;体表和与外界相通的腔道中寄居的正常微生物丛对入侵微生物的拮抗作用等。其次是内部屏障。抗原物质一旦突破第一道防线

前列腺特异性抗原的临床意义

  若血清tPSA和fPSA升高,而fPSA/tPSA降低,则考虑诊断前列腺癌,以此来提高诊断的特异性和正确性。前列腺炎、前列腺肥大、肾炎、前列腺息肉和泌尿生殖系统的疾病也可见血清tPSA和fPSA轻度升高。单独使用tPSA或fPSA诊断前列腺癌时,并不能排除前列腺良性疾病的影响。

非特异性检查羊水栓塞的介绍

  (1)心电图 右心室,右心房扩张,还可见到心肌劳损的表现。同时有心动过速。  (2)胸片 可能无异常表现,70%的患者可有轻度的肺水肿症状,表现为双侧弥漫性点状浸润阴影,沿肺门周围分布,肺部轻度扩大。心影可能会增大。  (3)血氧饱和度 突然下降往往可以提示有肺栓塞的问题。  (4)凝血功能的检

预防非特异性尿道炎的简介

  1.不滥用抗生素  抗生素可能抑制部分有益菌群,有害细菌就会乘机大量繁殖。因此,使用抗生素要慎重。  2.单独清洗内裤  有害细菌可以在皮肤表面、胃肠道、指甲内等地方大量繁殖。因此,内衣裤一定要单独洗,最好用专用的内衣裤除菌液浸泡几分钟。  3.女性护理液适合日常清洁  频繁使用药字号洗液、消毒