pcr出现非特异性扩增原因分析
PCR产物的电泳检测时间 一般为48h以内，有些最好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。 假阴性，不出现扩增条带 PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及， ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质，②模板中含有Taq酶抑制剂，③模板中蛋白质没有消 化除净，特别是染色体中的组蛋白，④在提取制备模板时丢失过多，或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶和引物质量好时，不出现扩增带，极有可能是标本的消化处 理，模板核酸提取过程出了毛病，因而要配制有效而稳定的消化处理液，其程序亦应 固定不宜随意更改。 酶失活：需更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或不够而 导致假阴性。需注意的是有时忘加Taq酶或溴乙锭。 引物：引物质量、引物的浓度、两条引物的浓度是否对称，是PCR失败或扩增条带不 理想、容易弥散的常见原因。有些批......阅读全文
PCR基因扩增
实验概要PCR扩增目标DNA片段。实验原理多聚酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR）基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性、退火、延伸三个基本反应步骤构成。 1. 模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃
PCR扩增仪
聚合酶链锁反应，Polymerase chain reaction，简称PCR，是一种分子生物学技术，用于扩增特定的DNA片段，这种方法可在生物体外进行，不必依赖大肠杆菌或酵母菌等生物体。PCR这项技术，被广泛地运用在医学和生物学的实验室，例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊
PCR扩增过程
①首先是将含有待扩增DNA样品的反应混合物放置在高温（>91℃）环境下加热1分钟,使双链DNA变性,形成单链模板DNA；②降低反应温度（约50℃）,致冷1分钟,使寡核苷酸引物与两条单链模板DNA发生退火作用并结合在靶DNA区段两端的互补序列位置上;③将反应混合物的温度上升到72左右保温1-数分钟,在
PCR扩增过程
①首先是将含有待扩增DNA样品的反应混合物放置在高温（>91℃）环境下加热1分钟，使双链DNA变性，形成单链模板DNA；②降低反应温度（约50℃），致冷1分钟，使寡核苷酸引物与两条单链模板DNA发生退火作用并结合在靶DNA区段两端的互补序列位置上;③将反应混合物的温度上升到72左右保温1-数分钟，在
PCR扩增仪步骤
一般的PCR反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：利用高温(93-98℃)使双链DNA分离(熔解)。高温将连接两条DNA链的氢键打断。在第一个循环之前，通常加热长一些时间以确保模板和引物完全分离，仅以单链形式存在。该步骤时间1-2分钟。在DNA双链分离后，降低温度使得引物可以结合于单
PCR扩增的步骤
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：模板DNA的变性模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；模板DNA与引 物的退火(复性)模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模
多重－PCR－扩增实验
试剂、试剂盒 Taq 聚合酶溶于水的 DNA引物仪器、耗材 热循环仪实验步骤 一、材料1. 酶和酶缓冲液Taq 聚合酶许多 Taq 聚合酶都可以用；作者发现 Roche 公司的 Taq 聚合酶可以满足大多数需要. 如果需要提高PCR 产物的特异性，应该使用热启动聚合酶。使用 Tag 聚合酶本身附带的
多重－PCR－扩增实验
多重PCR扩增实验可以用于：（1）在同一PCR反应管内同时检出多种病原微生物，或对有多个型别的目的基因进行分型，特别是用一滴血就可检测多种病原体；（2）多重PCR很适宜于成组病原体的检测，如肝炎病毒，肠道致病性细菌，性病，无芽胞厌氧菌，战伤感染细菌及细菌战剂的同时侦检；（3）多种病原体在同一反应管内
核酸扩增—多重PCR
多重PCR是在单一PCR基础上改进和发展起来的新技术，是在同一PCR体系中加入多对特异性引物，一次扩增多个DNA片断，实现多个基因序列或多种病原体的同时检出。多重PCR降低了检测成本，减少了工作量，提高了检测效率，并且可以解决淋球菌、衣原体等混合感染者临床症状不明显，检出率低等问题。淋病患者往往
PCR扩增仪简介
PCR扩增仪又称为PCR基因扩增仪、PCR核酸扩增仪、聚合酶链反应核酸扩增仪，是利用PCR(Polymerase chain reaction，聚合酶链反应)技术对特定DNA扩增的一种仪器设备，被广泛运用于医学、生物学实验室中，例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制
多重－PCR－扩增实验
实验方法原理 多重PCR（multiplex PCR），其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同。一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定。重PCR的特点有：①高效性在同一PCR反应管内同时
PCR基因扩增1
一、实验原理 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）是一种体外核酸扩增系统，其原理类似DNA分子的天然复制过程，是将在待扩增的DNA片段和与其两侧互补的两个寡聚核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增 2n 倍。该技术已成为分子生物学中
PCR扩增的步骤
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：模板DNA的变性模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；模板DNA与引 物的退火(复性)模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模
PCR扩增的步骤
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：模板DNA的变性模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；模板DNA与引 物的退火(复性)模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模
PCR基因扩增2
（4）引物的熔点温度（Tm值）要适当。Tm值与引物的碱基组成和长度有关；PCR引物的GC/AT应与要扩增的模板DNA相当或略高些。一般熔点温度以大于55℃为宜。（5）引物的3，末端必须与模板严格互补，而5，末端的要求可灵活些。（6）目前在引物选择中已广泛应用计算机软件，从EMBL或Genebank中
PCR扩增的步骤
PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：模板DNA的变性模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；模板DNA与引 物的退火(复性)模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模
什么叫PCR扩增
PCR扩增：就是体外条件下，扩增DNA的技术。在模板DNA、引物和4dNTP在的条件下，DNA聚合酶的酶促合反应，经“变性—退火—延伸”多次循环，使DNA片段数量呈指数增加，从而在短时间内获得大量的基因片段。
PCR基因扩增原理
基因扩增技术（PCR）聚合酶链反应（polymerase chain reaction简称PCR）又称无细胞分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法，是基因扩增技术的一次重大革新。可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍，从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力，能检测单分子DNA或对每1
PCR基因扩增实验
[实验目的]通过本实验学习PCR反应的基本原理与实验技术。[实验原理]多聚酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）的原理类似于DNA的天然复制过程。在待扩增的DNA片段两侧和与其两侧互补的两个寡核苷酸引物，经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2n倍。1．变性：加
基因扩增PCR的扩增与克隆方法介绍
①引物的序列应位于基因组DNA的高度保守区,且与非扩增区无同源序列。这样可以减少引物与基因组的非特异性结合,提高反应的特异性 ②引物长度:15-40bp为宜。引物过短或过长均可使反应的特异性下降。 ③引物的碱基尽可能随机发布,避免出现数个嘌呤或嘧啶的连续排列,G+C碱基的含量在40%-75%
pcr扩增没有条带
你降低引物浓度，增加模版浓度，做一个梯度PCR试试
核酸扩增—实时荧光PCR
实时荧光PCR，即在常规PCR扩增时加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时，探针结合在DNA任意一条单链上；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'端外切
分析PCR扩增的标准
什么是PCR实验的灵敏度?灵敏度指的是PCR扩增反应能够检测到目的基因的zui小值。研究结果表明，影 响PCR扩增效率的因素，如模板的复杂程度与完整性、引物的纯度及其与模板的结合效率、反应温度、DNA聚合酶的热稳定性与扩增性能、反应缓冲液的离子组 成（主要指阳离子）、反应优化剂等等，都决定了PCR
基因扩增梯度PCR仪
聚合酶链反应（Polymerase Chain Reaction ,简称PCR）是80年代中期发展起来的体外核酸扩增技术。 它具有特异、敏感、产率高、 快速、 简便、重复性好、易自动化等突出优点；能在一个试管内将所要研究的目的基因或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,使肉眼能直接观
pcr为什么要扩增
PCR扩增～获得大量的目的片段～只有这样才便于目的片段的分离和纯化～要知道现在的分离纯化手段DNA损失50%都算少的～
浅谈PCR基因扩增仪
聚合酶链式反应，简称PCR。聚合酶链式反应，其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期，循环进行，使目的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。生命科学仪器
PCR扩增仪的选择
1971年Kleppe等人在Journal of molecular biology上发表文章首次准确、精炼、客观的阐述了PCR方法，1976年一种从嗜热水生菌(Thermus aquaticus)分离得到的热稳定的DNA依赖的DNA聚合酶的应用大大增加了PCR的效率。而现今所发展出来的PCR则是源
PCR基因扩增仪简介
聚合酶链式反应简称PCR（英文全称：Polymerase Chain Reaction）聚合酶链式反应 聚合酶链式反应，简称PCR。聚合酶链式反应，其英文Polymerase Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应
PCR基因扩增仪简介
分类： PCR仪的种类总体来说可以分为两大类：PCR扩增仪和实时荧光定量PCR仪。用途： PCR仪是医学，农业，食品，医药，检验检疫等领域的实验室常规仪器设备。PCR仪原理： 为双链dna在多种酶的作用下可以变性解链成单链，在dna聚合酶的作用下，以单链为模版，根据碱基互补配对
pcr为什么要扩增
PCR扩增～获得大量的目的片段～只有这样才便于目的片段的分离和纯化～要知道现在的分离纯化手段DNA损失50%都算少的～