特异性位点的DNA甲基化的检测方法

相关专题1 甲基化敏感性限制性内切酶 (methylation-sensitive restriction Endonuclease,MS-RE)-PCR/Southern法这种方法利用甲基化敏感性限制性内切酶 对甲基化区的不切割的特性,将DNA消化为不同大小的片段后再进行分析。常使用的甲基化敏感的限制性内切酶有HpaⅡ-MspⅠ(识别序列CCGG)和SmaⅠ-Xmal(CCCGGG)等。由于后者识别的碱基数相对较多,其碱基序列在体内出现的概率相对较低,所以以前者即HpaⅡ-MspⅠ更常用。其中HpaⅡ和MspⅠ均能识别CCGG序列,然而当序列中的胞嘧啶发生甲基化时,HpaⅡ不切割,利用HpaⅡ-MspⅠ的这种属性处理DNA,随后进行Southern或PCR扩增分离产物,明确甲基化状态]。这是一种经典的甲基化研究方法,其优点是:相对简单,成本低廉,甲基化位点明确,实验结果易解释;缺点是:1.由于CG不仅仅限于CCGG序列中,因此......阅读全文

非特异性免疫的分类及特点

  分类  固有免疫(非特异性免疫)系统分类  固有免疫(非特异性免疫)系统包括:组织屏障(皮肤和黏膜系统、血脑屏障、胎盘屏障等);固有免疫细胞(吞噬细胞、杀伤细胞、树突状细胞等);固有免疫分子(补体、细胞因子、酶类物质等)。  特点  ①作用范围广。机体对入侵抗原物质的清除没有特异的选择性。  ②

提高RTPCR特异性的方法总结

第一链cDNA合成的起始可以使用三种不同的方法,各种方法的相对特异性影响了所合成cDNA的量和种类。      随机引物法是三种方法中特异性最低的。引物在整个转录本的多个位点退火,产生短的,部分长度的cDNA。这种方法经常用于获取5'末端序列及从带有二级结构区域或带有逆转录酶不能复制的终止位

关于食物过敏的特异性试验的介绍

  食物过敏的特异性试验主要指确定过敏原的种类。须注意的是,过敏原检测(皮肤试验、血清特异性IgE)的阳性结果必须结合临床表现才能确定引起过敏的过敏原种类。  1、皮肤试验  皮肤试验对诊断吸入物过敏,如过敏性鼻炎和结膜炎有较高的阳性预测值;对食物过敏的阴性预测值高。有两种皮试方法:皮肤点刺或皮内试

决定抗原特异性的结构基础是啥

决定抗原特异性的结果基础是存在于抗原分子中的抗原表位.抗原表位又称抗原决定簇.补充:抗原(完全抗原)要有免疫原性和抗原性,仅具有抗原性的抗原称半抗原.

卵巢非特异性炎症的临床特征

卵巢非特异性炎症有急性卵巢炎和慢性卵巢炎,前者远较后者少见,且卵巢炎常包含在盆腔炎内,故临床常有以下体征和症状:急性者可能有发热、腹痛(呈钝痛,无向它处放射)、腰骶部疼痛、肛门坠胀感等;慢性者则症状被包含在慢性盆腔炎内,如腰骶部不适酸痛、肛门坠胀感、纳差、全身疲乏无力、精神欠佳、月经改变(多数为经量

简述亲和层析法提取特异性IgG

  将纯化抗原或粗制抗原(如是单价特异性则对抗原要求不高)交联Sepharose4B制成亲和层析柱,将抗血清过柱后洗去未结合的杂蛋白,再用硫氰酸钾洗脱,流出的是纯的特异性IgG抗体。因硫氰酸钾对抗体有破坏作用,应及时透析除去。纯化的IgG因含量低,失去保护作用,应及时应用或冻干保存,亦可20℃保存,

非特异性免疫的主要特点

①作用范围广。机体对入侵抗原物质的清除没有特异的选择性。非特异性免疫②反应快。抗原物质一旦接触机体,立即遭到机体的排斥和清除。③有相对的稳定性。既不受入侵抗原物质的影响,也不因入侵抗原物质的强弱或次数而有所增减。但是,当机体受到共同抗原或佐剂的作用时,也可增强免疫的能力。④有遗传性。生物体出生后即具

卵巢非特异性炎症的临床症状

表现一、腹痛下腹有不同程度疼痛,多为隐性不适感,腰背部及骶部酸痛、发胀、下坠感,常因劳累而加剧。由于盆腔粘连,可能有膀胱、直肠充盈痛或排空时痛,或其他膀胱直肠刺激症状,如尿频、里急后重等。表现二、月经不调以月经过频、月经量过多为最常见,可能是盆腔充血及卵巢功能障碍的结果。由于慢性炎症导致子宫纤维化、

关于组织多肽特异性抗原的物质简介

  组织多肽特异性抗原在细胞增殖时,在细胞周期的S晚期和G2期,伴随着DNA、蛋白质的合成,组织多肽特异性抗原被合成并释放人血或其他体液中。组织多肽特异性抗原在一些生长活跃的正常体细胞(如肝细胞、泌尿生殖道细胞)中有少量表达,而在上皮来源的恶性肿瘤和转移癌中则为高表达。因此,血清中组织多肽特异性抗原

免疫学实验特异性IgE抗体介绍

特异性IgE抗体介绍:  IgE主要来源于呼吸道、消化道黏膜下的浆细胞,是一种亲细胞性抗体,与变态反应、寄生虫病与皮肤过敏有关。另有一种能与某种过敏原特异性结合的IgE,称特异性IgE,对过敏性哮喘的诊断,其特异性强、敏感性高,对寻找变应原有重要意义。特异性IgE抗体正常值:  血清免疫球蛋白E(I

序列特异性引物的定义和技术特点

序列特异性引物指一种测定基因突变的方法。即利用针对点突变的2个等位特异性寡核苷酸(ASO)引物(A、B标记其中之一)与另一共同引物(C)组成引物系统;在引物延伸时,A与B同时竞争靶序列上同一复性位点,扩增反应后,经凝胶电泳及放射自显影,胶片上的显带是标记同位素的引物所扩增的产物。

特异性脂酶染色的检查过程

  (1)固定:新鲜干燥涂片,用甲醛-甲醇固定液固定30s,或用甲醛蒸气薰5~10min。  (2)水洗,凉干。  (3)放入作用液,37℃ 30min。  (4)水洗,苏木素染液复染l~2min。  (5)水洗,晾干,镜检。  附注:  染色温度以38~39℃,此时酶反应强而无明显扩散,并且萘酚和

什么叫做dna的非特异性扩增

抗体有时会和非抗原结合,可能会因为非特异的蛋白-蛋白相互作用结合细胞内成分,因为疏水相互作用结合脂肪,也可能会结合一些细胞表面表达的抗体受体。比如说,IgG亚型的抗体会结合细胞表面的Fc受体,如CD16、CD32和CD64。理想条件下,各种类型的非特异性结合都可以通过蛋白(BSA、牛奶或动物血清)来

等位基因特异性PCR的技术特点

等位基因特异性PCR( allele specific PCR,AS-PCR ),是指利用引物与模板之间的碱基错配可以有效地抑制PCR反应,进而达到模板区分(等位基因区分)的目的。

卵巢非特异性炎症的辅助检查

急性期行后穹窿穿刺抽到渗出液或脓液,或B超下行卵巢穿刺抽出脓性分泌物;或上述穿刺抽出液体作培养,查出链球菌、葡萄球菌等病原体。慢性者则可行腹腔镜检查可以明确诊断,镜下常见到:卵巢增大或表面水肿或缺血或粘连,膜样物表面覆盖;卵巢可与输卵管、盆侧壁、子宫后壁形成粘连,或可见卵巢输卵管粘连包裹在一起;有卵

消化道脂肪酶底物特异性

Ewa RogalskaS等(1990)研究了猪胰脂肪脂肪酶、兔胃脂肪酶和人胃脂肪酶对化学结构类似、但在同一甘油三酯分子中立体结构不同的酯键的立体选择性,结果表明两种胃脂肪酶对sn-3位具有立体选择性。如果由对映体过量百分率表示的话,人和兔胃脂肪酶对三辛酸甘油酯和三油精分别是54%、70%和74%、

pcr出现非特异性扩增原因分析

  PCR产物的电泳检测时间  一般为48h以内,有些最好于当日电泳检测,大于48h后带型不规则甚致消失。  假阴性,不出现扩增条带  PCR反应的关键环节有①模板核酸的制备,②引物的质量与特异性,③酶的质量及, ④PCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。  模板:①模板中含有杂蛋白质

什么叫做dna的非特异性扩增

抗体有时会和非抗原结合,可能会因为非特异的蛋白-蛋白相互作用结合细胞内成分,因为疏水相互作用结合脂肪,也可能会结合一些细胞表面表达的抗体受体。比如说,IgG亚型的抗体会结合细胞表面的Fc受体,如CD16、CD32和CD64。理想条件下,各种类型的非特异性结合都可以通过蛋白(BSA、牛奶或动物血清)来

抗病毒的非特异性免疫

  抗病毒和抗细菌的非特异性免疫有许多相同之处,现将其特点给予补充。 巨噬细胞对阻止病毒感染和促进感染的恢复具有重要作用。血流中的单核细胞也能吞噬和清除病毒,中性粒细胞只能吞噬病毒,不能将其消灭,如果被吞噬的病毒不能消灭则可将病毒带到全身,引起播散。正常人血清中含有能抑制病毒感染的物质,称为病毒抑制

关于位点特异性重组的特点介绍

  ①这种交换是可逆的,原先存在的DNA顺序全部被保存下来,并无丢失;  ②噬菌体和细菌的DNA之间有一段很短的同源序列,重组交换必须通过其中的一个特定的核苷酸。这两个特点也就是位点特异性重组的共同特点。

肿瘤检测羊胰腺特异性抗原(PaA)介绍

胰腺特异性抗原(PaA)介绍:  胰腺特异性抗原是胰腺腺泡内合成的一种糖蛋白,胰腺癌时可明显升高,其是诊断胰腺癌的一种较理想的参考指标。胰腺特异性抗原(PaA)正常值:  

关于甲基化特异性的PCR介绍

  用亚硫酸氢盐处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶被转化为尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不变;随后设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物,如果用针对处理后甲基化DNA链的引物能得到扩增片段,则说明该位点存在甲基化;反之,说明被检测的位点不存在甲基化。

Cell子刊:组织特异性的CRISPR载体

  细菌一直在与病毒或入侵核酸(质粒)进行斗争,为此它们演化出了多种防御机制。CRISPR/Cas适应性免疫系统就是其中之一。在CRISPR和Cas的帮助下,细菌可以经由小RNA分子的引导,靶标和沉默入侵者遗传信息的关键部分。  现在,CRISPR与Cas9的组合已经成为了一个通用工具,被用来对真核

简述梅毒特异性试验的临床意义

  梅毒特异性试验敏感性和特异性均高,一般用作确证试验。这种试验是检测血清中抗梅毒螺旋体IgG抗体,即使患者经过足够治疗,仍能长期存在,甚至终身不消失,血清反应仍持续存在阳性,因此,不能用于观察疗效。但对一期梅毒不如荧光密螺旋体抗体吸收试验(FTA-ABS试验)敏感。  梅毒特异性试验也存在生物学假

简述特异性IgE抗体的临床意义

  异常结果:血清中过敏原特异性IgE水平仅能说明个体对已测过敏原的敏感性。但不能仅依靠检测血清中的过敏原特异性IgE水平,而必须结合临床病史和其它诊断手段才能确诊过敏症。  需要检查的人群:患者属过敏性体质,对过敏原特异性检测项不敏感。

组织特异性消失基因的定义和功能

中文名称组织特异性消失基因英文名称tissue-specific extinguisher;TSE定  义在体细胞杂交中杂种细胞失去的亲本细胞基因。一种在体细胞杂种中能对某些亲本细胞基因的转录起明显抑制作用的基因,其产物为依赖于环腺苷酸(cAMP)的蛋白激酶的调节亚基,通过环腺苷酸应答元件发挥作用。

前列腺特异性抗原(PSA)的应用

前列腺特异性抗原的应用一说前列腺特异性抗原,有些临床医生不是很了解,如果说PSA,对于绝大多数临床医生就不陌生了。可能PSA大多是与前列腺癌较多的联系起来,只要PSA一升高,很多人会怀疑如果这项高了是不是代表自己患上了前列腺癌,前列腺特异性抗原(PSA)是检测前列腺癌的重要方法,患者PSA水平异常升

特异性脱敏治疗常采用的方法介绍

注射脱敏治疗过敏原注射脱敏治疗是指用过敏原提取物进行皮内注射。脱敏注射从小剂量开始,逐渐增加剂量,以增加对过敏原的耐受性。脱敏治疗一般至少需要2~3 年,长期的注射会带来一定痛苦。舌下含服脱敏治疗舌下含服脱敏治疗是将诱发过敏的物质(如尘螨活性蛋白)制成不同浓度的脱敏液,用患者能适应的小剂量每日给药(

如何设计特异性荧光原位杂交探针

  1.探针分为好多种,你要先决定你用何种,是RNA探针还是DNA探针,杂交时,RNA-RNA结合的稳定性要比DNA-RNA好,所以RNA探针具有结合牢固、背景低等优点;DNA探针背景稍微深一些,不过也可以,标记方法比前者简单一些,另外还有寡核苷酸探针,此类探针分子量小,通透性好,但就是标记的敏感性

特异性免疫的种类细胞免疫的介绍

  T细胞是参与细胞免疫的淋巴细胞,受到抗原刺激后,转化为致敏淋巴细胞,并表现出特异性免疫应答,免疫应答只能通过致敏淋巴细胞传递,故称细胞免疫。免疫过程通过感应、反应、效应三个阶段,在反应阶段致敏淋巴细胞再次与抗原接触时,便释放出多种淋巴因子(转移因子、移动抑制因子,激活因子,皮肤反应因子,淋巴毒,