启动子—基因表达的发动机

众所周知,一段基因从转录开始,最终形成蛋白质执行功能,离不开一个高效、匹配的启动子。启动子的一般结构包括核心启动子元件和上游调控元件。核心启动子元件又包括转录起始点和TATA框,主要作为RNA聚合酶结合并起始转录的位点,上游调控元件能够通过与对应的反式作用因子相结合改变转录的效率,如图1。 图1. 启动子示意图启动子由于元件和位置不同,转录的能力也不同。好的启动子就像好的发动机,响应各种调控,起始各种生命活动。基因编辑技术更是离不开形形色色的启动子,来实现组织特异性表达。今天我们就盘点一下基因编辑中常见的启动子。1. CMV启动子CMV启动子顾名思......阅读全文

启动子—基因表达的发动机

  众所周知,一段基因从转录开始,最终形成蛋白质执行功能,离不开一个高效、匹配的启动子。启动子的一般结构包括核心启动子元件和上游调控元件。核心启动子元件又包括转录起始点和TATA框,主要作为RNA聚合酶结合并起始转录的位点,上游调控元件能够通过与对应的反式作用因子相结合改变转录的效率,如图1。

启动子—基因表达的发动机

众所周知,一段基因从转录开始,最终形成蛋白质执行功能,离不开一个高效、匹配的启动子。启动子的一般结构包括核心启动子元件和上游调控元件。核心启动子元件又包括转录起始点和TATA框,主要作为RNA聚合酶结合并起始转录的位点,上游调控元件能够通过与对应的反式作用因子相结合改变转录的效率,如图1。     

启动子与转录因子/基因表达调控蛋白

目的基因的表达调控生命活动丰富多彩、千变万化。但是万变不离其宗,不管如何变化都围绕着中心法则展开。核酸作为遗传物质指导蛋白质的表达,表达产生的一些特殊蛋白(如转录因子、调控蛋白)反过来又对DNA指导合成蛋白质的过程进行调控。对基因表达调控的研究一直是生物学研究热点,涉及到生命活动的各个过程,也是各类

用λ噬菌体-PL-启动子在大肠杆菌中表达克隆基因实验

            实验材料 载体和细菌菌株 PL 表达载体 阳性对照质粒 试剂、试剂盒 考马斯亮蓝染色溶液或银染溶液

用λ噬菌体-PL-启动子在大肠杆菌中表达克隆基因实验

实验材料 载体和细菌菌株PL 表达载体阳性对照质粒试剂、试剂盒 考马斯亮蓝染色溶液或银染溶液L-色氨酸SDS 凝胶加样缓冲液SDS-聚丙烯酰胺凝胶靶基因或 cDNA 片段LB 琼脂平板LB 培养基M9 基本培养基仪器、耗材 SorvallGSA 转头或相当的转头沸水浴振荡培养器实验步骤 材料缓冲液和

用λ噬菌体-PL-启动子在大肠杆菌中表达克隆基因实验

λ噬菌体 PL 启动子是受控于温度敏感阻抑物(cIts857) 的强效启动子,阻抑物可在低温下阻抑 PL 启动子的转录,但在髙温下不能。因此带有λ噬菌体启动子的载体必须以带有 cIts857 基因的菌株作为宿主。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞

用-IPTG-诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因实验

            实验材料 带有 lacIq 或 lacIq1 等位基因的适于转化的大肠杆菌菌株 IPTG 诱导的表达载体 试剂、试剂盒

用-IPTG-诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因实验

实验材料 带有 lacIq 或 lacIq1 等位基因的适于转化的大肠杆菌菌株IPTG 诱导的表达载体试剂、试剂盒 考马斯亮蓝染色溶液或银染溶液IPTGSDS 凝胶加样缓冲液SDS-聚丙烯酰胺凝胶靶基因或 cDNA 片段LB 琼脂平板LB 培养基仪器、耗材 SorvallGSA 转头或相当的转头沸水

用-IPTG-诱导启动子在大肠杆菌中表达克隆化基因实验

本方案将在疑难解析和诱导启动子表达蛋白的优化部分讨论影响质粒表达效率的因素。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实验材料带有 lacIq 或 lacIq1 等位基因的适于转化的大肠杆菌菌株IPTG 诱导的表达载体试剂、试剂盒考马斯亮蓝染色溶液或

基因内启动子的定义

中文名称基因内启动子英文名称intragenic promoter定  义被RNA聚合酶III识别的基因内的一段DNA序列。应用学科遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)

关于原核表达载体的原件启动子的介绍

  启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列,它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子,基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别真核基因的启动子,因此原核表达载体所用的启动子必须是原核启动子。 原核启动子是由两段彼此分开且又高度保守的核苷酸序列组成,对mRNA的合成

T7-RNA聚合酶/启动子表达实验

基本方案 备选方案 备选方案2             实验材料 载体 试剂、

T7-RNA聚合酶/启动子表达实验

实验材料 载体试剂、试剂盒 氨苄青霉素卡那霉素pGP裂解缓冲液仪器、耗材 培养箱分光光度计离心机实验步骤 1.  将含有待表达基因的片段亚克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中,转化一种标准大肠杆菌菌株,此菌株不应带有可指导T7 RNA聚合酶合成的质粒。转化物涂布于氨苄青霉素平皿,于37℃温育培养

用-T7-噬菌体启动子在大肠杆菌中表达克隆基因实验

Tabor 和 Richardson 在 1985 年及 Studier 和 Moffatt 在 1986 年提出了一个新的利用 T7 噬菌体启动子的表达系统,使用的是从 T7 噬菌体基因组获得的转录信号。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。实

用-T7-噬菌体启动子在大肠杆菌中表达克隆基因实验

            实验材料 大肠杆菌菌株 HMS174(DE3) 或 BL21(DE3) pET 载体或同类载体 阳性对照质粒 试剂、试剂盒

用-T7-噬菌体启动子在大肠杆菌中表达克隆基因实验

实验材料 大肠杆菌菌株 HMS174(DE3) 或 BL21(DE3)pET 载体或同类载体阳性对照质粒试剂、试剂盒 考马斯亮蓝染色溶液或银染溶液IPTGSDS 凝胶加样缓冲液SDS-聚丙烯酰胺凝胶靶基因或 cDNA 片段NZCYM 琼脂平板NZCYM 培养基仪器、耗材 SorvallGSA 转头或

T7-RNA聚合酶/启动子表达实验3

实验材料噬菌体试剂、试剂盒PEGIPTG仪器、耗材培养箱离心机实验步骤1.  制备从M13噬菌体mGP1-2原种,加PEG溶液沉淀浓缩噬菌体。重悬噬菌体于M9培养基,滴定其滴度。 2.  将由“基本方案”步骤1所得的含T7 启动子表达质粒转化M13许可性大肠杆菌细胞,转化物涂布于氨苄青霉素平皿上,3

T7-RNA聚合酶/启动子表达实验2

实验材料蛋白质试剂、试剂盒氨基酸混合物M9培养基甲硫氨酸甲醇仪器、耗材荧光显微镜离心机分光光度计实验步骤1.  将含有待表达基因的片段亚克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中,转化一种标准大肠杆菌菌株,此菌株不应带有可指导T7 RNA聚合酶合成的质粒。转化物涂布于氨苄青霉素平皿,于37℃温育培养过

T7-RNA聚合酶/启动子表达实验1

在适宜的条件下,T7 RNA聚合酶/启动子系统表达的基因产物可占细胞总蛋白的25%以上,但多数情况下产量比这个比例要低得多。实验材料载体试剂、试剂盒氨苄青霉素卡那霉素pGP裂解缓冲液仪器、耗材培养箱分光光度计离心机实验步骤1.  将含有待表达基因的片段亚克隆于pT7-5、pT-6或pT7-7中,转化

基因外启动子的定义

中文名称基因外启动子英文名称extragenic promoter定  义位于基因转录区以外的启动子。许多小RNA基因、H1 RNA基因和U6 RNA基因等具有基因外启动子。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),基因表达与调控(二级学科)

基因内启动子的基本定义

中文名称基因内启动子英文名称intragenic promoter定  义被RNA聚合酶III识别的基因内的一段DNA序列。应用学科遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)

什么是基因表达调控?基因表达调控有什么意义

意义:1.适应环境、维持生长和增殖:生物体赖以生存的外环境是在不断变化的,为了生存,所有活细胞都必须对外环境变化作出适当反应,调节代谢,以适应环境变化。生物体适应环境、调节代谢的能力与蛋白质分子的生物学功能有关。而蛋白质的水平又受基因表达的调控。2.维持个体发育与分化:多细胞生物调节基因的表达除为适

RNA干涉实验——采用RNA聚合酶Ⅲ启动子表达siRNA分子

实验方法原理因为哺乳动物细胞不具备低等真核生物细胞所具有的扩增 RNAi 信号的机制,因此人工合成或体外转录的 siRNA 分子在细胞内的作用是瞬时性的,不适合用于进行靶基因的表达受到抑制后细胞表型的长期变化观察,也不适于进行文库的筛选。此外,体外制备 siRNA 分子的成本比较高,而且 siRNA

基因表达的定义

基因表达(gene expression)是指将来自基因的遗传信息合成功能性基因产物的过程。基因表达产物通常是蛋白质,所有已知的生命,都利用基因表达来合成生命的大分子。

-环境影响基因表达

  日复一日、年复一年,我们的基因不断地和我们所生活的环境、邻居、家人,以及我们自己的心态“对话”。这些社会性互动的结果会进入我们细胞的控制室,改变基因的强弱表达,从而影响我们的习性、行为、生理、心理与健康。美国知名科学作家戴维·多布斯日前撰写了《基因的社会生活——改变你的分子组成》一文,介绍了科学

人脑基因表达图集

  小鼠的全基因组基因表达的高分辨率图已经问世几年时间了,但是,对于人脑而言,此前只发表过相对来说比较粗糙的分布图。这是由于与小鼠相比,人脑规模增大了1000倍,以及死后组织供应有限和质量较差等因素所导致的。现在,Michael Hawrylycz及其在“艾伦脑科学研究

什么是基因表达?

基因表达(gene expression)是指将来自基因的遗传信息合成功能性基因产物的过程。基因表达产物通常是蛋白质,所有已知的生命,都利用基因表达来合成生命的大分子。

基因差异表达技术

真核生物中,从个体的生长、发育、衰老、死亡,到组织的得化、调亡以及细胞对各种生物、理化因子的应答,本质上都涉及基因的选择性表达。高等生物大约有30000个不同的基因,但在生物体内任意8细胞中只有10%的基因的以表达,而这些基因的表达按特定的时间和空间顺序有序地进行着,这种表达的方式即为基因的差异表达

基因表达的机制

转录转录过程由RNA聚合酶(RNAP)进行,以DNA为模板,产物为RNA。RNA聚合酶沿着一段DNA移动,留下新合成的RNA链。基因组DNA由两条反向平行和反向互补链组成,每条链具有5'和3'末端。这两条链分别称为“模板链”(产生RNA转录物的模板)和“编码链”(含有转录本序列的DN

基因表达的机制

转录转录过程由RNA聚合酶(RNAP)进行,以DNA为模板,产物为RNA。RNA聚合酶沿着一段DNA移动,留下新合成的RNA链。基因组DNA由两条反向平行和反向互补链组成,每条链具有5'和3'末端。这两条链分别称为“模板链”(产生RNA转录物的模板)和“编码链”(含有转录本序列的DN